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支原体Mycoplasma 1 第一节概述 支原体 Mycoplasma 缺乏细胞壁 呈高度多形性能通过滤菌器能够在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物 2 柔膜体纲 支原体目 肺炎支原体 人型支原体 生殖支原体 穿透支原体 发酵支原体 梨支原体等 解脲脲原体 分类 支原体科 无胆甾原体科 螺原体科 支原体属 脲原体属 3 形态染色 细胞个体小 直径0 3 0 5mm 无细胞壁 只有细胞膜 呈高度多形性 革兰氏染色阴性 不易着色 4 细胞膜结构 细胞膜厚度7 5 10nm 有外 中 内三层 内外两层为蛋白质及多糖中间层为含胆固醇的脂质成分凡能作用于胆固醇的物质 如皂素 毛地黄甙 二性霉素B等均能破坏细胞膜 使支原体死亡 有的支原体有荚膜 特殊的顶端结构等 5 特殊的顶端结构 肺炎支原体 生殖支原体 穿透支原体等具有特殊的顶端结构 呈烧瓶状 顶端结构具有黏附于宿主上皮细胞表面的作用 与支原体的致病性有关 6 培养特性 营养要求 高于一般细菌 培养基中需加入血清以提供胆固醇与其它长链脂肪酸 多数支原体还需添加酵母浸液 组织浸液 核酸提取物和辅酶 pH 适宜pH为7 6 8 0 低于7 0时易死亡 但解脲脲原体最适pH为6 0 6 5 7 培养特性 氧气 兼性厌氧 但大多数寄生性支原体在37 时在微氧环境 含5 CO2和90 N2 中生长最佳 繁殖方式 通常以二分裂繁殖 也可以出芽 分枝 断裂等方式增殖 8 菌落形态 支原体生长缓慢 3 4h繁殖一代 在固体培养基中培养48 96h形成菌落 在琼脂含量较少的固体培养基上 2 7天后形成 荷包蛋 样菌落 friedegg colony 菌落中心致密隆起 深入琼脂 周边为较薄的透明颗粒区 9 支原体典型菌落 10 液体培养基 清亮 用颜色变化单位 CCU 表示 肺炎支原体培养结果1 培养基对照 2 5 肺炎支原体培养第2 5天 12345 11 支原体与细菌L型 支原体有许多特性与细菌L型相似 无细胞壁 呈多形性能通过滤菌器对青霉素不敏感 对低渗敏感 荷包蛋 样菌落临床表现相似 为间质性肺炎等 12 支原体与细菌L型的区别 13 生化反应 14 抗原结构 支原体抗原结构主要来自细胞膜 由蛋白质和糖脂组成 不同支原体均有其特有的抗原结构 交叉较少 在鉴定支原体时有重要意义 15 抗原结构补体结合试验可检测糖脂类抗原ELISA试验可检测蛋白质类抗原血清抗体鉴定 生长抑制试验 growthinhibitiontest GIT 代谢抑制试验 metabolicinhibitiontest MIT 16 抵抗力 抵抗力比细菌弱 易被脂溶剂及常用消毒剂杀灭 对紫外线 低渗 干燥及热敏感 对醋酸铊 结晶紫和亚碲酸钾抵抗力强 对影响细胞壁合成的抗生素不敏感 对干扰蛋白质合成的抗生素和阻碍DNA复制的药物敏感 17 致病性 黏附素 荚膜 毒性代谢产物 超抗原 其他 如穿透支原体黏附侵入CD4 T细胞引起损伤 支原体主要寄生于细胞外 一般为表面感染 大多不侵入血液及组织细胞内 致病物质 18 固有免疫适应性免疫体液免疫 抗膜蛋白的抗体包括IgM IgG和SIgA 细胞免疫 主要是特异性CD4 Th1细胞分泌细胞因子 免疫性 以体液免疫为主 细胞免疫也起作用 19 第二节主要病原性支原体 肺炎支原体MycoplasmaPneumoniae解脲脲原体UreaplasmaUrealyticum穿透支原体MycoplasmaPenetrans 20 肺炎支原体 菌体大小为0 2 0 3mm 呈短细丝状 具有特殊的顶端结构 位于该结构表面的P1蛋白 是肺炎支原体与宿主细胞膜受体结合的部位 P1表面蛋白 170kDa 和P30 32kDa 为主要的黏附蛋白 21 肺炎支原体 22 生物学特性 初次分离应在含血清和新鲜酵母浸出液的培养基中 一般10天左右长出菌落 多次传代后生长加快 产生过氧化氢和溶血素 能发酵葡萄糖 不分解精氨酸与尿素 23 致病性与免疫性 主要侵犯呼吸系统传播途径 通过飞沫传播夏末秋初为多发季节 以5 20岁青少年发病率最高 流行特点为间歇性 每4 6年出现地区性流行 流行持续数月至一年 24 所致疾病 引起的病理改变以间质性肺炎及急性细支气管炎为主 又称原发性非典型性肺炎 primaryatypicalpneumonia 临床以咳嗽 发热 头痛 咽痛和肌肉痛为主 有时有呼吸道外并发症 如皮疹 心血管和神经系统症状 25 免疫性血清特异性IgM IgG及SIgA和致敏的淋巴细胞 呼吸道局部黏膜产生的SIgA对防止再感染有较强保护作用 出现IgE介导的I型超敏反应 促使哮喘病急性发作 致病性与免疫性 26 血清学检查冷凝集试验用病人血清与人O型血红细胞或自身红细胞混合 4 过夜时可发生凝集 而在37 时凝集又分散解离开 但仅50 左右的患者才出现阳性 此反应为非特异性 快速诊断ELISA 检测P1和P30蛋白mAbs PCR 从痰标本中检测16SrRNA或P1蛋白基因 27 微生物学检查 PCR 分离培养37 1 2周 典型菌落 鉴定 生化反应 形态染色 GIT MIT 标本 DNA测序 ELISA 28 防治原则 疫苗的预防效果尚无定论 治疗首选大环内酯类抗生素 青霉素类及头孢类抗生素无效 29 人型支原体 一 生物学性状分解精氨酸 最适pH7 2 7 4 固体培养基上形成200 300 m的菌落 呈典型的 油煎蛋 状 二 致病性寄居于泌尿生殖道 通过性接触传播 可引起附睾炎 盆腔炎 产褥热等 新生儿感染则可引起肺炎 脑炎和脑脓肿 30 三 微生物学检查法 人型支原体在液体培养基中的生长左图 培养基对照 右图 人型支原体分解精氨酸产碱 酚红指示剂变红 病原体检测液体和固体培养基接种 特异抗血清做GIT与MIT进一步鉴定 31 核酸检测PCR检测 检测16SrRNA基因 此法快速 特异 适宜于大批量标本检测 32 预防 加强宣传教育 注意性卫生 切断传播途径 治疗 人型支原体对大环内酯类抗生素不敏感 对红霉素 100mg L 不敏感 可用四环素类 喹诺酮类药物治疗 但有耐药株产生 四 防治原则 33 生殖支原体 生殖支原体基本形态为烧瓶状 能发酵葡萄糖使培养基变酸 培养基上不生长 须在无醋酸铊SP 4培养基生长但缓慢 菌落呈典型的 油煎蛋 状 顶端结构有黏附素MgPa 140kDa 能黏附在人泌尿生殖道上皮 主要引起尿道炎 较难培养 生长慢 不适宜于常规实验室分离培养 实验室最好的诊断方法是核酸检测 34 穿透支原体 1991年Lo首次从1例艾滋病患者尿中分离出一种新支原体 其形态为杆状或长烧瓶状 一端为顶端结构 具有黏附与穿入的作用 穿透支原体电镜照片 穿透支原体黏附并穿入红细胞 35 穿透支原体发酵葡萄糖 分解精氨酸 不分解尿素 在SP 4培养基上生长形成典型的 油煎蛋 状菌落 顶端结构能黏附于人红细胞 单核细胞 CD4 T淋巴细胞及人尿道上皮细胞 导致宿主细胞受损或死亡 可能是艾滋病发病的一个辅助因素 36 解脲脲原体 单个或成双排列 直径0 05 0 3mm 丝状体少见 固体培养基中菌落小 直径15 60mm 37 生物学特性 培养需要胆固醇和酵母浸液 pH要求较低 最适pH为6 0 6 5 具有尿素酶 能分解尿素产生氨和CO2 使培养基pH升高 不分解糖类和精氨酸 38 致病性 传播途径 性传播 垂直传播 引起非淋菌性尿道炎 non gonococcalurethritis NGU 前列腺炎 附睾炎等泌尿生殖道疾病 还与自然流产 早产 死胎和不孕有关 39 微生物学检查 PCR 液体培养基 含有酚红和尿素 标本 典型菌落 鉴定 生化反应 GIT MIT 阳性 红色 阴性 黄色 固体培养基37 5 CO2 90 N2 DNA测序 40 微生物学检查与防治原