培养过程中的显微观察与应用.docx

实验二、培养过程中的显微观察与应用姓名：* 班级：生物工程 学号：*一、 实验目的了解显微观察技术在显微观察中的重要性，掌握显微观察中应该使用哪些参数来了解生茶进程、指导生产过程。以及如何获的这些参数。二、 实验仪器电子显微镜，分别培养了24h、48h、72h的酵母，血球计数板，美蓝染色剂，盖玻片，载玻片。三、 实验步骤取出擦拭干净的血球计数板，在中部盖一片盖玻片。用滴管吸取稀释了10倍培养了24小时的酵母菌并滴在血球计数板的中部斜坡处，由于毛细现象，液滴会充满血球计数板的计数区。将血球计数板放在调试好的电子显微镜下，先用低倍镜找到计数区，换用高倍镜直到得到计数区的清晰图像，分别查出左上，左下，右上，右下，中间5个中格酵母菌的数目并记录。用以上方法继续记录48和72小时的菌数。取出一片载玻片，滴一滴培养24小时的酵母菌液，并滴加一滴美蓝试剂，用盖玻片盖好后放在显微镜下观察，等1分钟后，分别取5个视野查出酵母菌总数，出芽数，和死亡数（被全部染色）并记录。用同样方法记录48和72小时的数据。使用形态分析软件对培养不同时间的酵母菌的直径大小进行分析，将得到的数据记录。四、 实验数据类别时间细胞数量（个）稀释倍数（倍）菌液浓度 （个/ml）12345总数24h31573191095000048h653342110105000072h7485226101300000项目时间 视野内细胞总数（个）出芽（个）死亡（个）出芽率（%）死亡率（%）平均出芽率（%）平均死亡率（%）细胞大小（m）24h（稀释10倍）404410.0010.007.42610.08420.3332236.259.3828133.5710.7137245.4110.81425411.909.5248h（稀释5倍）214819.0538.1017.77429.6626.51214519.0523.81315516.1316.13235821.7434.783141112.9035.4872h（未稀释）93172818.2830.1116.39429.92824.85116173514.66308229.70109162914.6826.60121204016.5333.06五、 实验结论24h：有一部分出芽，少部分死亡 48h：细胞变得更加饱满，出芽数增多，死亡数也增多72h：细胞形态变小，出芽数大致不变，死亡数继续增高六、 实验小结1、 染色时间要把握好，时间太短不能着色，时间太长会有大量细胞死亡，影响实验数据。时间大致控制在1-2分钟。2、 当视野内细胞数过多，找出合适的稀释倍数，再进行观察和计数。七、 思考题1、 影响检测数据的操作因素有哪些？ 答：操作上的失误，计数时的误差，染色的时间都会影响到检测数据的准确性。2、 碱性染色的机理是什么？答：由于细胞新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使碱性染色剂例如美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型,而对代谢作用微弱或死细胞,无此还原能力或还原能力极弱,而被美蓝染成蓝色或