微生物检验方法验证方案.doc

微生物限度检查方法（平皿法）验证文件 VF-PR-17-A文件类别：验证文件 编号：VF-PR-17-A部 门：生产部微生物限度检查方法（平皿法）验证方案版次 新订 替代 起草人： 起草日期： 年 月 日 验证小组 审阅方案批准人 批准日期： 年 月 日验证实施日期 年 月 日 复印数 份 批准人： 分发至：质控部目 录一、 验证方案的制定二、 验证方案的起草与审批三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案1验证目的和原理2验证方法步骤3试验实施3.1试验前的准备3.2验证试验操作3.3试验结果4验证结果评价分析5附件微生物限度检查方法（平皿法）验证文件一、 验证方案的制定验证项目名称微生物限度检查方法（平皿法）验证编号VF-PR-17-A验证小组组员成员职务姓名主要工作职责组长方案设计责任人副组长方案实施负责人组员操作人操作人操作人操作人验证方案组织实施进度步骤实施日期二、 验证方案的起草与审批1验证方案的起草验证项目名称微生物限度检查方法（平皿法）验证编号VF-PR-17-A起草部门起草人签名日期生产部年 月 日质控部年 月 日2验证方案的审核与批准验证方案审核人： 审核日期： 年 月 日验证方案批准人： 批准日期： 年 月 日三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案1验证目的和原理1.1 验证目的 为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。1.2 原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。2验证方法步骤2.1验证前的准备 进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。2.2验证试验的操作计划 用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。2.3试验结果可接受标准 用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。3试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱、霉菌培养箱。3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或防置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。3.1.3试验样品： 尿素维生素E乳膏：批号 批号 批号 3.1.4稀释液和试剂： PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 无菌十四烷酸异丙酯 3.1.5器具 无菌培养皿：（直径90mm） 无菌移液管（5ml）3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源： 菌株名称内控编号大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉编号由菌名首字母传代代数制备日期组成3.1.7培养基名称生产商培养基批号配制日期有效期营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基3.2验证试验操作3.2.1试验菌的制备和稀释将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在3035下培养1824小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，2328下培养2448小时。将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中，在2328下培养57天小时。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50100cfu的菌悬液。3.2.2用不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为4组A样品试验组 准确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇510分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。用移液管准确吸取1.0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50100cfu试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，每个试验菌平行接种2个平皿，按照 平皿法测定其菌数。B菌液组 在平皿中注入1ml的菌液立即倾注营养琼脂培养基，以测定所加的菌数。C供试品对照组 取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品的本底菌数。D 稀释剂对照组 取相应稀释液1ml加入试验菌，使最终菌浓度为每ml供试液含50100cfu试验菌，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌落数。3.2.3培养 将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在3050下培养48小时将白色念珠菌、黑曲霉在2328下培养72小时，点计菌落数。并将结果记录于附件1。3.3试验结果3.3.1稀释剂对照组菌的回收率接入菌种尿素维生素E乳膏批号菌落计数（cfu/皿）回收率稀释剂对照组菌液组大肠埃希菌平均值金黄色葡萄球平均值枯草芽孢杆菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=稀释剂对照组的平均菌落数菌液组的平均菌落数100%。3.3.2试验组的菌的回收率接入菌种尿素维生素E乳膏批号菌落计数（cfu/皿）回收率试验组供试品对照组大肠埃希菌平均值金黄色葡萄球平均值枯草芽孢杆菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=（试验组的平均菌落数供试品对照组的平均菌落数的值）菌液组的平均菌落数100%。4验证结果评价分析 质控部负责各项验证、试验结果记录，验证小组根据验证、试验结果进行评价（附件2），起草验证报告（附件3），报验证委员会。（附件4）验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书（附件5）。对验证结果的评审应包括：（1） 验证试验是否有遗漏？（2） 验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？（3） 验证记录是否完整？（4） 验证试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明合理？是否需进一步补充试验？5附件附件1产品试验组的微生物生长检查记录：菌种名称产品试验组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉供试品对照组的微生物生长检查记录菌种名称供试品对照组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉稀释剂照组的微生物生长检查记录菌种名称阳性对照计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌液组菌种名称阳性对照计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉测试人/测试日期： 复核人/复核日期：附件2验证结果评价表验证名称微生物限度检查方法（平皿法）验证编号VF-PR-17-A验证结果评价及建议确认验证小组： 年 月 日附件3验证报告年 月 日至 年 月 日，验证小组根据批准的编号为“VF-PR-17-A”的微生物限度检查方法（平皿法）验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：1 验证方案在实施过程中未做修改；2 验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内；3 验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实；4 验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入使用。以上情况，请验证委员会审批！ 验证小组 年 月 日附件4试验报告审批表验证名称微生物限度检查方法（平皿法）验证编号VF-PR-17-A验证内容审阅会签质量部审核人： 年 月