（农产品加工及贮藏工程专业论文）盐酸克伦特罗在动物组织中的残留分布及其毒性的研究.pdf

摘要 本试验用酶联免疫吸附法( e l i s a ) 研究了盐酸克伦特罗( c l b ) 在动物各组织的 残留状况及对动物的毒性。试验采用小白鼠和猪两种动物。采用单因子试验设计，小白 鼠试验分为4 个试验组，猪分为3 个试验组，分别灌注不同剂量的c l b 后，观察动物 服用c l b 后的异常表现，并在小自鼠试验3 0 d ，猪试验3 5 d 后，进行解剖病理分析和残 留检测。 试验结果显示：用酶联免疫吸附法( e l i s a ) 对c l b 进行检测，方法简单，容易掌 握，耗时少( 5 6 h ) ，可满足县级以下单位对c l b 的检测。c l b 在动物各组织的残留 规律为：小白鼠的肌肉组织和肝脏、肺脏、肾脏等内脏器官的c l b 残留量与用药剂量呈 极显著正相关( p 肾脏 肌肉 脂肪 血浆：在停药期为0 d 时肺脏 肝脏，但随停药 期的增加肺脏的残留消除较肝脏快，在第2 4 d ，肺脏己测不出残留时，肝脏仍有5 3 n g 的残留。 但是，目前我国各地方的卫生检验部门( 陈琼等，2 0 0 0 ；扬兴武等，2 0 0 2 ：赖碧清 等，2 0 0 2 ：唐国盛等，2 0 0 2 金米聪等2 0 0 3 ) 在检测c l b 时主要将尿液作为的检测样 品。虽然c i b 在体内代谢后大量以原形随尿液排出，但一旦停止饲喂该药，尿液中的药 6 含量将急剧减少，因此采用尿液作为检样具有一定的局限性。 表2 各组织器官的残留情况 一一 剂量与给停药期 组织浓度( n g 幢) 药时间( d a y ) 肺脏肝脏肾脏 肌肉脂肪血浆 一一 5 m 非g a 0 4 7 6 。04 2 2 12 1 9 1 8 8 33 5 26 0 ，4 3 0 d a y l m g k 9 6 7 d a y 2 3 4 01 8 0 9 5 0 47 8 8 2 6 33 9 o 1 5 42 2 6 9 11 1 4 4 37 ，6 2 27 2 0 66 7 o 55 9 n d5 3 n d4 3 n d3 1 8 7 3 3 2 2 8 6 4 3 2 o 1 2 0 8 0 5 n d n d n d n d 2 6 3 5 6 1 o 0 5 n d n d n d n d n d n d n d n d 1 2 ，6 5 5 2 9 1 , 0 0 7 0 5 n d n d n d n d n d n d 1 5 0 5 3 0 。7 n d n d n d n d n d n d n d n d n d 0 3 7 1 8 6 81 2 2 47 7 4 8 91 2 93 3 1 42 5o 4 2 0 5 0 4 n d 1 8 1 1 2 n d 1 3 0 1 3 0 9 注：n d 表示不可测得( n o td e t e c t a b l e ) a ：杨志凌( 2 0 0 1 ) ；b ：s m i t h ( 2 0 0 0 ) 。 1 4 2 盐酸克伦特罗检测样品的前处理 盐酸克伦特罗检测样品的前处理是指样品的提取和净化。主要有溶剂萃取法、固相 萃取法、基质固相分散、透析法、超临界萃取法等。 溶剂萃取法液一液萃取法( s e l l p ) 是最早使用的一种方法，利用提取物的极性和 酸碱性，通过调节样品p h 值和溶液极性的方法来改变提取物在不同体系的溶解度和分 7 ， 2 ， 4 6 8 如 h 四 m 凹 剪 配系数，实现对样品的提取和纯化。在某些情况下，为获得良好的提取效果，需要用多 种有机溶剂。 固相萃取( s p e l ( g a i l l a r d y ，1 9 9 7 ；a e l e h n e r ，1 9 9 8 ；b r u i n sc h p ，1 9 9 9 ；g i a n c a r l o b i a n c o t t o ，1 9 9 9 ：b r u i n s ，1 9 9 9 ) 根据液相分离、解析原理达到分离、净化的目的，是 目前常用的样品净化手段。固相萃取操作简易，有机溶剂用量少，应用广泛。但固相萃 取柱价格较高。 膜分离双相渗析技术( g o z a l e a ，1 9 9 7 ；f e n t ec a ，1 9 9 9 ) 是一种半透膜分离技术， 适用于直接提取分子量相对较小的化合物。与溶剂萃取和固相萃取相比，具有操作简便、 省时等优点。 基质固相分散萃取( m s p d e ) b i 先将一定量的基质( 如动物肝脏) 均质，并与吸附剂( 如 c 8 键合硅胶颗粒) 混匀制成半固态后装柱、淋洗，m s p d e 的特点在于它将样品的均质 过程与待测物质的萃取和净化过程同步完成，减少了溶剂用量，节约了时间，提高了工 作效率，使现场检测成为可能。此外，m s p d e 减少了样品净化程序，更适于自动化分 析。 超i 临界流体萃取( s f e ) 是以超临界流体( s f ) 代替各种溶剂来萃取样品中的待测组 分的萃取方法( 0 k e e f f e ，1 9 9 8 ) 。超临界流体既具有液体的强溶解性能，又具有气体的 低粘度、高扩散性能、高传质速度，使得分析速度提高。 比较c l b 检测样品的各种前处理的这几种方法，溶剂萃取虽然溶剂使用量大，不 如其它方法净化效果好但其费用低，更易被多数实验室所采用。固相萃取处理的样品可 以使得检测限大为降低，今后随着囤相萃取柱价格的降低，其应用会越来越广泛。 1 4 3 盐酸克伦特罗的检测方法 为了保证畜牧产品的安全食用性，f d a 和w h o 规定了c l b 在动物体内的最高残 留限量为：肉0 2 u g k g ，肝脏0 6 u g k g ，肾脏0 6 u g k g ，脂肪0 2 u g k g ，奶0 0 5 u g k g 。我国农业部规定了c l b 的残留标准，马、牛肌肉0 1 u g k g ，肝脏、肾脏0 5 u g k ，牛奶o 0 5 u g k g ( 农牧发 1 9 9 7 1 7 号) 。 目前能够满足以上检测限的常用方法主要有：免疫分析法，高效液相色谱法及各种 联用技术分析法等。其中免疫分析法主要为酶联免疫分析法和放射免疫分析法。各种联 用技术分析法主要是气相色谱质谱法。 1 4 3 1 气相色谱一质谱联用法( g c m s ) 气相色谱一质谱联用法( g i a u l ta n d f o u r t i l l a n ，1 9 9 0 ；p o l e t t i n ie t a l ，1 9 9 1 ；l e v s s e i l se t 。8 a 1 1 9 9 1 ：m o n t r a d ee ta 1 , 1 以准确地对克伦持罗进行定性和定量分析，对免疫法初步检测得 到的阳性样品9 9 3 ；g o n z a l e ze ta l ，1 9 9 5 ；b a q o e n s ，1 9 9 6 ；w h a l e s ，m u r b y ，1 9 9 9 ；s p i s s o e t a l 。2 0 0 0 ) 灵敏度高，可可以进一步进行确认，是检测盐酸克伦特罗残留的最常用的方法 之一，也是目前国际上公认的c l b a 0 定的确认方法。而我国已于2 0 0 1 年颁布了动物组织 中c l b 钡t j 定的行业标准n y 4 3 8 2 0 0 1 ，也推荐使用g c m s 。但是由于g c m s 要求样品有 较低的沸点且对热稳定，而c l b 极性大沸点高，不适宜直接用g c m s 法，因此需要将其 进行衍生化，使其适应g c m s 分析。因此，用此法分析检测前要对分子上的羟基、氨基 等极性基团衍生化，操作复杂，检测时间长，难于满足生产检测的需要。 1 4 。3 2 高效液相色谱法( h p l c ) 在检测c l b 时，h p l c 分析不需要将c l b 衍生化，且准确、快速、重复性好、假阳性率 低，适用于定量检测。h p l c 法可采用不同的检测器，有电化学检测器 ( h a u c k ，1 9 8 9 ；c h r i s t i n eb c r g g r e n e t a l ，2 0 0 0 ；c r e s c e n z lc e ta l ，2 0 0 1 ) 、紫外检测器 ( h o o i j e r i n k ，1 9 9 1 ；c a r d u c d i ，1 9 9 6 ；l a w r e n c e ，1 9 9 7 ；j a m e sf ，1 9 9 7 ) 、光电二极管阵列检测 ：器( t s a i ，1 9 9 4 ) 和质谱检测器( d a n i e l l ，1 9 9 6 ；e l b e r t a h e ta l ，1 9 9 8 ；l e h n e r a f2 0 0 1 ) 。 我国农业部颁布的行业标准n y 4 3 8 2 0 0 1 h p l c 推荐为饲料q 6 c l b 检测方法，最低检测 限为0 o l m g k g 。目前h p l c 的检测限一般只能达到1 1 0 0 u g 瓜g ，仪器价格昂贵、操作比 较繁琐，样品在测定前需进行前处理工作，而且处理成本高，耗时长。 1 。4 3 3 免疫分析法 1 4 3 3 1 放射免疫分析法( r 放射免疫分析法检测盐酸克伦特罗残留具有很好的特异性和高灵敏度。早在1 9 7 6 年，k o p i t a r 和z i m m e r 就首次报道了用r r a 法分析c l b 。但是由于所用仪器f 液体闪烁仪或 y 一放射仪) 价格较昂贵，实验条件要求比较苛刻，放射性同位素对工作人员有一定伤 害，并且放射性废弃物不易处理容易给环境造成污染。因此限制了它的广泛应用。 1 1 4 3 3 ，2 荧光免疫分析法 荧光免疫分析法同放射免疫分析法相比，克r t 放射免废分析法中的核辐射缺点； 与色谱法相比，具有对样品处理比较简单且一次能检测多个样品等优点。b a c i g a l u d om a 等( 1 9 9 5 ) 利用单抗技术与荧光免疫分析技术检测了盐酸克伦特罗在牛尿中的残留，检测 限l o p g g ，检测线性范围1 0 1 0 5 p g g o 但它对温度的强烈依赖性和荧光强度取决于激 发波长，因此应用较少。 1 4 3 3 3 酶免疫分析法( e 弧) 9 酶免疫分析法( y a m a m o l ol , 1 w a t a ，1 9 8 2 ：p l o u m e i a l ，1 9 9 1 ；p o u e l a l ，1 9 9 4 ；p o l e t t i e t a l ，1 9 9 5 ：h a s s n o o te ta l ，1 9 9 6 ；h a h n a e ta l ，1 9 9 6 ；h a a s n o o t e ta l ，1 9 9 8 ) 在上世纪7 0 年代由 e n g v a l l 等创建的。它较g c - 一m s 和h p l c 有其独特的优越性：样品前处理不复杂，检 测数据稳定、特异性强，检测速度快：设备费用不高，易于推广，灵敏度高，检测限低 于o 5 u e c k g ：英国r a n d o x l a b o r a t o r i e sl t d 公司、德国f b i o p h a r m 公司等已开发出商品 化的酶标仪和试剂盒进行检测。目前，我国对e t a 用于瘦肉精检测的研究报道较少其 中南京农大的陈继明等做了较多的研究。他们用自制的献酸克伦特罗抗血清建立了间接 抑制酶联免疫吸附法( e l i s a ) 方法。对饲料、尿样和肝脏等样品进行检测，检测范围 为1 5 6u 咖i 1 9 0 n g m l ，特异性较强，塞曼特罗和沙丁胺醇分别有1 0 和1 2 5 的交 叉反应，而肾上腺素和去甲肾上腺素无交叉反应。目前我国赫酸克伦特罗的检测也有了 快速、简便的商用e l i s a 试剂盒，如上海赛群生物科技有限公司研制的盐酸克伦特罗 酶联免疫检测试剂盒，经上海市高新技术成果转化项目认定办公室认定，上海市兽药饲 料检察所应用，其各项性能均达到了进口试剂盒的指标，认定可许代进口试剂盒。试剂 盒的使用更有利于该项检测的研究和推广。 2 有待研究的问题及试验目的意义 2 1 有待研究的问题 综上所述，在盐酸克伦特罗的残留分析方面，国外的研究动物多采用牛、羊和鸡丽 对猪的研究少见报道，我国的畜产品主要以猪为主因此有必要对猪进行研究；在检测 样品的采集方面，国内的检测基本上都是用宰前屠畜的尿液作为检样，采用尿液作为检 样有定的局限性，而在宰后采集合适的组织进行检测更可靠。召：盐酸克伦特罗的残留 检测方法方面：h p l c 、g c - m s 等操作烦琐、检测成本高，使得难于普及，采用较简便 利于操作的检测方法，同时降低检测成本有待研究： 2 2 本试验的目的意义 通过本研究，希望达到以下儿方面的目的： 2 2 1 了解猪各组织器官的残留状况： 2 2 2 探讨机体各组织器官的病理变化； 2 2 3 以心脏、肝脏、j 擗! 脏、肺脏、肾脏、肌肉作为捡样，寻找宰后检测的最佳组织： 2 2 4 用所建立的方法在实际生产的运用。 意义：对c l b 在动物组织中的残留分析为组织检样的选择提供依据：机体各组织的 病理变化的研究，为感官检验提供科学依据，同时辅以e u s a 法，可及时在宰后检验过 l o 程中检出盐酸克伦特罗猪肉，防止漏检错判和中毒事件的发生，具有重要的生产实践意 义。 3 材料与方法 3 1 试验设计 试验采用两种不同种属的动物小白鼠和猪分别进行试验。同批同龄的4 0 9 左右的小 白鼠随机分为4 个处理组，对照组，试验l 组、试验2 组和试验3 组采用每天两次的 口服给药方式，给药剂量见表3 。1 4 k g 左右的断奶仔猪随机分为3 个处理组。对照组、 试验1 组和试验2 组。试验组同样采用每天两次的口服给药的方式，给药剂量分为七个 递增的阶段进行见表4 。 表3 小自鼠试验给药剂最 腿 表4 猪试验给药剂量 m g 对照l ! f l试验1 纽 试验2 纽 第一阶段 第二二阶段 第三阶段 第四阶段 第五阶段 第六阶段 第七阶段 l6 21 3 2 4 0 4 8 5 6 6 4 给药总时问( d )3 5 3 53 5 注：每一阶段为5 d 。 4 6 8 o 2 4 6 2 7 4 6 7 8 9 o 0 0 o o 0 o 3 2 试验动物及给药方式 3 2 1 小白鼠 选用华西医科大学的健康试验小白鼠。预试5 d ，观察小白鼠生活状况和精神，确认 其健康后，将与小白鼠的食道大小合适的软管，取代2 - 5 m l 的注射器的针头，并用此注 射器取适量( 按表1 ) 的已溶解于蒸馏水的盐酸克伦特罗溶液，再将软管插入小白鼠的 食道处，将盐酸克伦特罗溶液灌入其食道中( 见版图1 ) 。对照组仅灌入同体积的蒸馏水。 3 2 j 猪 试验动物猪来自四川农业大学动物营养所的长白太湖二元杂交健康仔猪。预示5 d 后给药，给药方式与小白鼠相同，只是所用的软管和注射器与猪的食道合适( 见版图2 ) 。 3 3 饲养管理 小白鼠试验在四川农业大学食品实验室进行，小白鼠单笼饲养，饲料为华西医科大 学专用小白鼠全价料，自由采食和饮水，每天清换一次垫料。室内温度1 8 2 7 。c ，湿度 4 2 7 5 ，自然通风。 猪试验在为四川农业大学动物营养所实验场进行。猪单笼饲养，饲料为l 四) j l 农业大 学动物营养所配制的仔猪料。自由采食和饮水，每天清扫饲养笼，室内温度1 8 2 7 。c ， 湿度4 2 - 7 5 ，自然通风。 3 4 样品的采集与保存 3 4 1 小白鼠样品的采集 待试验3 0 d 后，将小白鼠活体解剖，分别取肝脏、肺脏、肾脏、肌肉，用塑料袋密 封后放入一2 0 冰箱中待检。 3 4 2 猪样品的采集 试验3 5 d 后，将猪只屠宰放血，开膛，分别取出心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、 肌肉，用塑料袋密封后放入一2 0 冰箱中待检。 3 5 样品的前处理 3 5 1 试剂和仪器 试剂：5 0 m mh c l ：1 m n a o h 5 0 0 m m 磷酸二氢钾缓冲液( p h 3 0 ) ；5 0 m mt r i s 缓冲液( p h 8 5 ) ；庚烷( h e p t a n e ) 。 仪器：5 0 m l 、1 0 m l 离心管，巴氏德吸管若干； h y - 5 调速多用振荡器( 江苏省金坛市医疗仪器厂) ； l d 5 2 a 型离心机( ： 4 0 0 0 转分) ( 北京医用离心机厂) ： 1 2 b f c 2 0 0 0 型氮气吹干仪( 北京八方世纪科技有限公司) 3 5 1 心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的前处理( 见版图3 ) 将5 克研碎的样品与2 5 m 1 5 0 m m h c l 混合，振荡1 5 h ，匀浆；称6 9 匀浆物，加入 离心管，1 0 1 5 以4 0 0 0 转分，离心1 5 m i n ；将上清液转移到另一离心管中，加 3 0 0 u l l m n a o h 混合1 5 m i n ，后加入4 m 1 5 0 0 m m 磷酸二氢钾缓冲液( p h 3 o ) ，简单混合 后放置于4 c 的冰箱过夜；次日取出又于1 睢1 5 以4 0 0 0 转分，离心1 5 r a i n ，转移全部 上清液于l o m l 试管中，在6 0 * ( 2 下氮气吹干。将干燥的样品管密封后，放入一2 0 冰箱 中待测。 3 5 2 肌肉的前处理 因为肌肉中所含脂肪较心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织多，故样品前处理中 增加提脂步骤。 将5 克研碎的样品与2 5 m 1 5 0 m m t r i s 缓冲液( p h 8 5 ) 混合，振荡0 5 h ，匀浆；后加 入1 5 m l 庚烷( n h e p t a n e ) 振荡5 m i n 去脂；1 0 1 5 以4 0 0 0 转分，离心5 m i n ，用巴氏 德吸管除去上面的庚烷层及中间薄薄的脂肪层i 再用1 5 m l 庚烷( n h e p t a n e ) 重复以上 操作；然后称6 9 匀浆物，加入离心管中；以后的操作按3 5 1 进行。 3 6 样品的残留检测 3 6 1 试剂和仪器 试剂：6 个c l b 的标准液( 浓度分别为0 ，0 1 ，0 3 ，0 9 ，2 7 ，8 1 n g m 1 ) ，c l b 过氧化物酶标记物，酶反应底物，显色剂，反应终止液，p b s ，p b s t 洗液( 由上海赛 群生物有限公司提供) 。 仪器：m u l t i s k a nm k 3 酶联免疫检测仪( 上海雷勃分析仪器有限公司) ；2 0 u l ，5 0 u l ， 1 0 0 u l ，2 0 0 u l 微量加样器。 3 6 2 测定 首先将待测定的样品对应酶联免疫检测试剂盒的9 6 个微孔编号( 见表5 ) ，以保证 样品于后期酶联免疫检测仪所出数据一一对应。 寸一 。卿嚣靶制崆n iii。1【馥gii。n寸博崾如爨廿1器鬲蜓q豁避哒一n0嚣崾iii=怔蝼议曾p。，冷村状如骤武恹哥晶器丽一j8_【最嶂如煦 h一墨禳圃吲冥s世毯哒舆障一区世涨蜊悯蛞疑g导1器皲豆晾导罱恹a(罨。旺母挺岛导1壬永凿稍氓增肇墨靶靶q螺*签埘哪匿球菸婆基疑蛊七b鬲丑草u一兽n怔竣p。，nn箍世1圭挺丽器蹭蜷髓一j8_【曩障(僻氓v廿器窨皿雄两罐婪 s虫剐文锰燃姑蜷蛊一n0n o 0 5 ) 。但从表中可 以看到，对照组的平均增重为8 k g ，试验1 组的平均增重为1 0 1 k g ，比对照组增加2 6 2 5 ； 试验2 组的平均增重为1 0 6 2 k g ，比对照组增加3 2 7 5 。显示出试验组体重增加的幅度 大于对照组。而从采食量来看，对照组总采食量为2 6 7 1 4 k g ，试验1 组总采食量为 2 5 1 0 4 k g ，比对照组下降6 0 2 ；试验2 组总采食量为2 4 8 5 1 k g ；比对照组下降6 9 7 。 4 2 3 剖检变化 4 2 3 1 小白鼠剖检变化 在活体解剖后( 见版图1 3 1 7 ) ，可以看到对照组脂肪明显多于试验组，而试验组的 剂量越高，皮下脂肪层越薄。对照组皮下血管较淡，肾脏、心脏、腹腔周围脂肪明显， 肠系膜网膜脂肪明显，腿部肌肉上有一层白膜；而试验组皮下血管明显，肾脏、心脏、 腹腔周围无腊肪，肠系膜网膜薄，腿部无脂肪。 4 2 3 2 猪剖检变化 猪在屠宰后，测得各试验组的组织器官的重量( 见表1 0 ) ( 见版图1 8 ) 。从表1 0 中可以看到试验组的各器官均大于对照组，呈现一定的规律性。特别是试验2 组脾脏较 对照组重6 3 5 ，心脏重2 3 3 ，其次为肾脏重2 0 5 ，肺脏重1 6 o ，肝脏重8 7 。 从剖检分析来看试验组肝脏体积大于对照组，轻微肿大；试验组的肺脏有膨胀现象，体 积较大，明显产生间质水肿，出血和炎症；对照组的脾脏质地细腻，试验组与对照组比 2 1 较脾脏边缘外翻且粗糙。同时解剖腹股沟深淋巴结，发现对照组正常，而试验1 组充血， 试验2 组出血：解剖腹股沟浅淋巴结，发现对照组、试验1 组都正常，试验2 组出血。 表1 0 猪各组织器官的重量g 5 分析与讨论 5 1e l i s a 方法检测克伦特罗的优点 本试验采用的盐酸克伦特罗残留酶联免疫检测试剂盒，购自上海塞群生物科技有限 公司，并由上海市科委组织专家鉴定，上海市兽药饲料监察所实践验证，其灵敏度高， 平均检测下限为o 1 n g 。回收率为：9 0 1 5 ，特异性强，与盐酸克伦特罗同类药物 无交叉反应，测试数据可靠。 本试验采用e l i s a 方法对c l b 在猪各组织的残留情况作了系统的研究，发现此法相 对g c m s 等方法有三大优点：一是检测样品的前处理采用溶剂提取的方法，不复杂，容 易掌握，仅需要h c l 、n a o h 、磷酸二氢钾缓冲液、t f i s 缓冲液、庚烷( n h e p t a n e ) 几种 常用试剂，污染小：二是所需的设备便宜，一台g c m s 仪需要上百万元人民币，而酶联 免疫检测仪仅3 4 万元。这就可满足县级以下单位对肉中盐酸克伦特罗残留的检测。三 是从采样到出结果整个过程仅需5 6 h ，这将大大提高对盐酸克伦特罗非法使用的检测 力度，对我国畜牧业的发展和保障人民的健康具有重要的意义。 5 2 盐酸克伦特罗在动物各组织器官的残留规律 本研究表明：对不同种属的两种动物( 小白鼠和猪) ，采用口服的饲喂方法，饲喂 不同剂量的盐酸克伦特罗3 0 d 和3 5 d 后，盐酸克伦特罗在动物体内的残留在一定程度上 呈现一致的规律性。即组织器官的c l b 残留量均随饲喂剂量的增加而增加：不论c l b 剂量的高低，同一饲喂剂量机体的组织器官中的肺脏和肝脏有较高的残留，高于肾脏， 而远远高于心脏、脾脏和肌肉。 5 2 1 盐酸克伦特罗在动物心脏的残留规律 本研究仅对猪的心脏中的c l b 残留进行了检测。本研究的结果显示猪对照组、试 2 2 验1 组、试验2 组的心脏残留量分别为未检出、5 9 1 n g g 、7 1 o n g g 。试验1 组、试验2 组的用药剂量逐渐加大，而结果显示其残留量也逐渐升高，表明残留量有随用药剂量增 大而增大的趋势。但心脏中的最高残留也仅7 1 o n g g ，较肝脏3 5 0 8 n g g 、肺脏4 1 5 5 n g g 、 肾脏2 3 2 3 n g g 低。因此，盐酸克伦特罗在动物心脏的残留较其它组织低。故在许多的 残留研究中，对鸡( m a l u c e k k i ，1 9 9 4 ) 、羊( e l l i o t ，1 9 9 3 ) 、猪( b r a m b i l l a ，1 9 9 4 ；杨志凌， 2 0 0 1 ) 都很少把心脏作为研究对象。 5 2 2 盐酸克伦特罗在动物肝脏的残留规律 本研究显示小白鼠对照组、试验1 组、试验2 组、试验3 组中的残留量分别为未检 出、1 0 3 8 n g g 、1 8 1 7 n g g 、2 4 2 8 n g g ；猪对照组、试验1 组、试验2 组的残留量分别为 未检啦、3 3 8 4 n g g 、3 5 0 8 n g g ；小白鼠肝脏的c l b 残留量与用药剂量呈极显著正相关 ( p 0 0 1 ) ，猪肝脏的c l b 残留量有随用药剂量增大而增大的趋势。两种动物试验均 表明在同一剂量下，肝脏较其它组织有较高的残留，其残留量仅次于肺脏。这与杨志凌 ( 2 0 0 1 ) 、b r a m b i l l a ( 1 9 9 4 ) 和s m i t h ( 2 0 0 0 ) 的报道相一致。 肝脏有较高的残留可能一是因为肝脏中药物代谢酶齐全，含量丰富是药物代谢的主 要器官；二也可能是由于肝脏中含有大量的结合蛋白，对药物具有强的结合和滞留能力， 并且血流充沛的缘故。因此，肝脏具有体积大，采样既方便又容易，运送与处理都较方 便，c l b 残留量高的特点，可作为监测盐酸克伦特罗残留的主要器官。 5 2 3 盐酸克伦特罗在动物脾脏的残留规律 本研究仅对猪的脾脏c l b 残留进行了检测。本研究的结果显示猪对照组、试验1 组、试验2 组的脾脏残留量分别为未检出、6 3 1 n g g 、7 8 3 n g g 。试验1 组、试验2 组的 用药剂量逐渐加大，而结果显示其残留量也逐渐升高，表明用脾脏c l b 残留量有随药 剂量增大而增大的趋势。但脾脏的最高残留量也仅为7 8 3 n g g ，较肝脏3 5 0 8 n 【g g 、肺脏 4 1 5 5 n g g 、肾脏2 3 2 3 n g g 低。因此，脾脏中的残留相对少很少将其作为c l b 残留研究 对象。 5 2 4 盐酸克伦特罗在动物肺脏的残留规律 本研究显示小白鼠对照组、试验1 组、试验2 组、试验3 组中的残留量分别为未检 出、1 1 4 s n g g 、1 9 6 1 n g g 、2 6 3 3 n g g 、：猪对照组、试验1 组、试验2 组的残留量分别 为未检出、3 8 6 3 n g g 、4 1 5 5 n g g ；小白鼠肺脏的c l b 残留量与用药剂量呈极显著正相 关( p 0 0 1 ) ，猪肺脏的c l b 残留量有随用药剂量增大而增大的趋势。研究显示不论 小白鼠还是猪肺脏都是残留最高的内脏器官，这可能因为肺脏对c l b 有较强的亲和力 的缘故。这与杨志凌( 2 0 0 1 ) 在对猪混饲盐酸克伦特罗( 5 m g k g ) 3 0 d 后，盐酸克伦特 罗在肺脏中的残留最高为4 7 6 0 n g g ，m e y e r 和r i n k e ( 1 9 9 1 ) ，s m i t h ( 2 0 0 0 ) 的报道相一致。 5 2 5 盐酸克伦特罗在动物肾脏的残留规律 本研究显示小白鼠对照组、试验1 组、试验2 组、试验3 组肾脏中的残留量分别为 未检出、4 9 7 n g g 、9 0 4 n g g 、1 2 0 o n g g ；猪对照组、试验1 组、试验2 组的残留量分别 为未检出、1 9 8 8 n g g 、2 3 2 3 n g g ：小白鼠肾脏的c l b 残留量与用药剂量呈极显著正相 关( p o 0 1 ) ，猪肾脏的c l b 残留量有随用药剂量增大而增大的趋势。肾脏中的残留 较高( 仅次于肺脏和肝脏) ，这可能是由于肾脏组织是药物的排泄器官并且其含有大量 的结合蛋白，对药物具有强的结合和滞留能力的缘故。 5 2 6 盐酸克伦特罗在动物肌肉的残留规律 本研究显示小白鼠对照组、试验1 组、试验2 组、试验3 组中的残留量分别为未 检出、1 0 5 n g g 、1 7 9 n g g 、2 3 8 n g g ；猪对照组、试验1 组、试验2 组的残留量分别为 未检出、7 0 3 n g g 、8 1 7 n g g ：小白鼠肌肉的c l b 残留量与用药剂量呈极显著正相关( p 0 0 5 ) 。但在小 白鼠试验中，试验2 组、试验3 组的平均增重呈负增加，且采食量呈下降趋势，这可能 反应出c l b 影响了小白鼠f 常的生长，对小白鼠造成了毒性作用。猪试验1 组、试验 2 组的平均增重比对照组分别增加2 6 2 5 、3 2 7 5 ，试验1 组、试验2 组的采食量比 对照组分别下降6 0 2 、6 9 7 ，这可能正是由于c l b 对猪的抑制脂肪沉积，增加蛋白 质沉积的作用，从而不需要采食太多的能量，提高平均增重。这说f ! j j 本试验采用的c l b 剂量约为o 1 6 o 6 4 m g k g b w ，已达到了生产中应用以提高猪生产性能的剂量而猪的 各组织均表现出了不同程度的病理变化，这表明在畜牧生产中非法添加c l b 在达到提 高生产性能目的时，可能已经造成了猪自身的毒害。 5 4 实际生产中防止盐酸克伦特罗的漏检的方法 本研究发现，口服盐酸克伦特罗的猪在体态和生活行为均发生异常。并且在猪肝脏、 肺脏、脾脏和淋巴结等组织器官发生了肉限可见的病理变化，同时证明了肝脏、肺脏、 肾脏有较高的残留。这表明：在实际生产中可仔细观察屠畜的体态和行为，并在屠宰动 物时剖解肝脏、肺脏、脾脏和淋巴结等组织如发现病理症状就可即时及时检出疑似盐 酸克伦特罗猪肉，防止漏检错判和中毒事件的发生，具有重要的生产实践意义。 综上所述，本试验采用e l i s a 方法对小白鼠的肌肉和肝脏、肺脏、肾脏等内脏器 官，猪的肌肉和心脏、肝脏、脾脏、肿脏、肾脏等内脏器官中赫酸克伦特罗的残留情况， 做了系统全面的分析，找出了适合的检测器官和方法。研究了小自鼠和猪对黼酸克伦特 罗的毒性表现，并进行了相应的剖检分析，为官观检验提供了科学依据。目前，就盐酸 克伦特罗对动物毒性方面的研究报道较少，本研究为其积累资料。具有重要意义。 6 结论 6 1 在猪的各组织器官的中肺脏和肝脏有较高的残留，高于肾脏，而远远高于心脏、脾 脏和肌肉。 6 2 猪在肝脏、肺脏、脾脏、肾脏和淋巴结等组织均发生了轻微肿火、膨胀、间质水肿， 出血和炎症等肉眼可见的病理变化。 6 3 肝脏、肺脏都具有残留量高体积大，采样既方便又容易，运送与处理都较方便的 优点，因此，是可食组织中检测盐酸克伦特罗残目的主要器官。 6 a 在屠宰检验过程中，若发现肝脏、肺脏、肾脏和淋巴结等组织出现上述肉眼可见的 病理变化的胴体，可初步判定为c l b 残留疑似病猪，即时检出，再辅以e l i s a 检测， 能有效地防止漏检错判和中毒事件的发生，具有重要的生产实践意义。 参考文献 陈琼，连玉华2 0 0 0 某肉联厂屠宰猪“瘦肉精”残留的检测畜牧与兽医3 2 ( 4 ) ：3 1 3 2 陈忠熙一起克伦特罗食物中毒的调查中国卫生监督杂志2 0 0 1 8 ( 5 ) ：2 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a td e p o s i t i o ni nl a m b s j a n i t a ，s c i 5 9 ：1 3 5 6 - 1 3 6 4 b a l l a r i n ig ，m o l i n ol ，m u n a f o a 1 9 7 8 p r e l i m i n a r yf i n d i n g so nt h eu s eo ft h eb e t a 一2 一m i m e t i c ( a d r e n e r g i c l a g e n tc l e n b u t e r o lt os u p p r e s su t e r i n ec o n t r a c t i o n si nt h ec o w c i i n i c av e t e r i n a r i a 1 0 1 ( 1 ) ：1 1 1 6 ； b a t j o e n se ，c o u r t h e y nd ，b r a b a n d e rh f 1 9 9 6 g a sc h r o m a t o g r a p h i c - t a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r i ca n a l y s i s o fc l e n b u t e r o lr e s i d u e si nf a e c e s j c h r o m a t o g r a 7 5 0 ( 1 2 ) ：1 3 3 - 1 3 9 b e e r m a n nd ，h ，b u t l e rw r ，h o u g u ed e ，f i s h e l lv l k ，d a l r y m p l er h ，r i c k sc a a n d c g , s c a n e s 1 9 8 7 c i m a t e r o l i n d u c e dm u s c l e h y p e r t r o p h y a n da l t e r e de n d o c r i n e s t o t u si n l a m b s j a n i m s c i 6 5 ：1 5 1 4 1 5 2 7 b i o l a t t ib ，c a s t a g n a r om ，b o l l oe ，a p p i n os 1 9 9 4 g e n i t a ll e s i o n s f o l l o w i n gl o n g t e r ma d m i n i s t r a t i o no f c l e n b u t e r o li nf e m a l ep i g s v e t e r i n a r yp a t h o l o g y 3 l ( 1 ) ：8 1 - 9 2 b l e c h a e 1 9 9 8 i m m u n o m o k u l a t i o n ：am e a n so fd i s e a s e p r e v e n t i o n i ns t r e s s e d l i v e s t o c k j a n i ms c i6 6 ：2 0 8 4 2 0 9 5 b r a i n s ，c h p ，e ta 1 1 9 9 9 o n l i n ec o u p l i n go fs o l i d p h a s ee x t r a c t i o nw i t hm a s ss p e c t r o m e t r yf o rt h e a n a l y s i so fb i o l o g i c a ls a m p l e s i d e t e r m i n a t i o no fc l e n b u t e r o l i nu r i n e j o u r n a lo fc h r o m a t o g r a p h y a 8 6 3 ( 1 ) ：1 1 5 1 2 2 b e r g g r e nc ，, b a y o u d hs ，s h e r r i n g t o nd ，e n s i n gk 2 0 0 0 u s eo fm o l e c u l a r l yi m p r i n t e ds o l i d - p h a s e e x t r a c t i o n f o r t h es e l e c t i v ec l e a n - u p o f c l e n b u t e r o l f r o m c a l f u r i n e j c h r o m a t o g r a 8 8 9 0 - 2 ) ：1 0 5 一1 0 c r e s c e n z lc ，s b a y o u d h ，ea 6 c o n n a c k e ta 1 2 0 0 1 d e t e r m i n a t i o no fc l e n b u t e r o li nb o v i n el i v e rb y c o m b i n i n gm a t r i xs o l i d p h a s ed i s p e r s i o na n dm o l e c u l a r l yi m 鲫i n t e ds o l i d p h a s ee x t r a c t i o nf o l l o w e db y l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，e l e c i r o s p r a y i o n t r a pm u l t i p l e - s t a g e m a s s s p e c t r o m e t r y a n a l c h e m 7 3 ：2 1 7 1 - 2 1 7 7 d u m c a nnd w i l l i a m sd a 2 0 0 0 d e l e t r i o u se f f e c t so fc h r o n i cc l e n b u t e r o lt r e a t m e n to ne n d u r a n c ea n d s p r i n te x e r c i s ep e r f o r m a n c ei nr a t s c l i n i c a l s c i e n c e 9 8 3 3 9 - 3 4 7 e i s e m a n nj h 1 9 8 8 。e f f e c t so fd i e t a r yc l e n b u t e r o lo nm e t a b o l i s mo ft h eh i n d q u a r t e r si ns t e e r s ja n i ms c i ， 6 6 ( 2 ) ：3 4 2 - 3 5 3 e l b e r 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