苦参汤对豚鼠心室肌细胞电生理效应的影响.doc

苦参汤对豚鼠心室肌细胞电生理效应的影响 作者：王雪芳 刘艳明 温晓竞【摘要】 【摘要】 目的：探讨苦参汤对豚鼠心室肌细胞电生理效应的影响。方法：应用常规玻璃微电极细胞内记录技术，观察苦参汤对豚鼠心室肌细胞动作电位0相幅值（APA），动作电位时程（APD），50%复极化时间（APD50），90%复极化时间（APD90）的影响作用。结果：（1）用20mg/mL的苦参汤灌流后与正常对照组相比动作电位0相幅值（APA）下降（P<0.05），（2）用40mg/mL的苦参汤灌流后与正常对照组相比动作电位0幅值（APA）下降（P<0.05），50%复极化时间（APD50）下降（P<0.05），（3）用80mg/mL的苦参汤灌流后与正常对照组相比动作电位0幅值（APA）下降（P<0.01），50%复极化时间（APD50）下降（P<0.01），90%复极化时间（APD90）下降（P<0.05），10min左右达到最大效应。结论：苦参汤能抑制豚鼠心室肌细胞动作电位0幅值，缩短动作电位时程。 【关键词】 苦参；肌细胞/心脏；电生理学技术/心脏 【ABSTRACT】 Objective:To study the electrophysiology Effect of Sophora flavescens. Ait on Ventricles muscle cell of rats.Methods:The action potentials by conventional intracellular microelectrode technique were recorded and the amplitude of action potential(APA)，date action potentials(APD)，50% and 90% of duration of action potential(APD50)and（APD90）on Ventricles muscle cell of rats that were perfused with Sophora flavescens. Ait were observed.Results:(1)Comparing the rats perfused with 20mg/mL Sophora flavescens. Ait with control,the amplitude of action potential(APA)decreased(P<0.05),(2)Comparing the rats perfused with 40mg/mL Sophora flavescens. Ait with control,the amplitude of action potential(APA)decreased(P<0.05),date action potentials(APD50)decreased(P<0.05),(3)Comparing the rats perfused with 80mg/mL Sophora flavescens. Ait with control,the amplitude of action potential(APA)decrease(P<0.01),date action potentials(APD50)decreased(P<0.01),(APD90)decreased(P<0.01).Conclusion:Sophora flavescens. Ait makes the Ventricles muscle cell of rats amplitude of action potential(APA)decreased and date action potentials(APD)decreased. 【KEY WORDS】 Sophora Flavescens.Ait,Myocytes/Cardiac,Electrophysiologic Techniques/Cardiac 本草经百种录称中药苦参“此以味治也，苦入心，寒除火，故苦参汤专治心经之火”。近年来，对中药苦参汤的实验研究证实，其具有多种抗实验性心律失常的作用1，而其单独对心室肌细胞的电生理影响报道甚少，我们为了研究苦参汤对心室肌细胞电生理效应的影响，设计了本实验。 1 材料与方法 11 标本制备 选用0.250.5kg豚鼠，雌雄不拘。击颅致昏后迅速开胸取出心脏，冲洗。至于(360.5)的改良O2饱和的K-H液，其离子成份分别为：NaCl 69g/L，KCl 3.5g/L，CaCl2 2.8g/L，MgCl2 1.4g/L，NaHCO3 21g/L，KH2PO4 1.6g/L，Glucose 1.4g/L。取10倍浓度的NaCl母液及KCl、CaCl2、MgCl2、NaHCO3、KH2PO4混合母液各100mL，加蒸馏水定容至1 000mL混匀，以NaOH调节pH值至7.27.4，然后加入Glucose 1.4g。配制好的营养液(NaCl 0.118mol/L，KCl 0.4710-2 mol/L，CaCl2 0.2510-2mol/L，MgCl2 0.1210-2mol/L，NaHCO3 0.1810-2 mol/L，KH2PO4 0.1210-2 mol/L，葡萄糖0.810-2mol/L，pH 7.27.4)当天使用。从主动脉瓣的左瓣与后瓣之间剪开主动脉壁并向下将左心室剪开，并以此为宽度，向下切取约8mm的心室肌组织除去周围多余组织，制成实验标本。标本心内膜向上，制好的标本以不锈钢针固定于灌流槽内的硅胶上，恒温、恒速灌流，流速为10mL/min。标本在灌流液中稳定30min后开始实验。 12 电位引导 玻璃微电极充以3mol/L KCL电极液后直流电阻为1020。使用刺激器引导出细胞的动作电位，使微电极稳定于同一细胞内，记录其动作电位图形。细胞内玻璃微电极引导的电信号经型微电极放大放大后，一路输入监听器监听，另一路经高速数模转换器输入微机，采样存储动作电位并分析其各项参数指标。 13 观测指标 动作电位0相幅值（APA），动作电位时程（APD），50%复极化时间（APD50），90%复极化时间（APD90）。 14 实验过程和分组 待刺激触发的心室细胞动作电位稳定后，开始采集一组正常的心室肌细胞动作电位做对照，然后改用不同浓度苦参汤药液灌流。分组：（1）20mg/mL苦参汤组（n=8）;（2）40mg/mL苦参汤组（n=8）;（3）80mg/mL苦参汤组（n=8） 15 统计学处理 应用Excel统计软件进行，动作电位的各观察数据均用x+s表示，给因素前后各项指标采用自身配对t检验。表1 苦参汤对豚鼠心室肌细胞电生理效应的影响（注：与对照组相比*P<0.05，*P<0.01 2 结果(见表1） 3 讨论 苦参出自本草经百种录，苦参碱是苦参汤的有效成分。动物实验和临床观察均证明苦参汤在治疗心律失常方面具有肯定而明显的作用2,3。近年来，对中药苦参汤的实验研究证实，苦参汤具有多种抗实验性心律失常的作用，对多种原因所致的心律失常均有良好的疗效，而无临床上应用的抗心律失常化学药物常出现的各种对人体的不良反应和毒副作用，患者长期服用耐受性好4，且研究发现苦参汤与西药联合运用的疗效明显优于单用西药。本研究证实，用20mg/mL的苦参汤灌流后与正常对照组相比APA下降（P<0.05），用40mg/mL的苦参汤灌流后与正常对照组相比APA下降（P<0.05），APD50下降（P<0.05），用80mg/mL的苦参汤灌流后与正常对照组相比APA下降（P<0.01），APD50下降（P<0.01），APD90下降（P<0.05），也可看出苦参汤对心室肌细胞的电生理作用有明显的浓度依赖性。有研究表明5，苦参汤可以明显提高心肌舒张期兴奋阈值(DET)，明显延长有效不应期(ERP)，提高DET能降低心肌心肌细胞自律性减少触发活动，延长ERP可使折返落入有效不应期而终止心律失常，提高DET和延长ERP是苦参汤抗心律失常的作用机制，膜片钳技术研究证实6，苦参汤可显著减少心室肌细胞的钠离子通道电流，且呈现剂量依赖性。钠离子通道电流是影响心肌兴奋性、传导性和舒张去极化速率的重要离子流，当苦参碱阻断钠通道使钠通道电流降低时，可使心肌兴奋性、传导性和舒张去极化速率的改变得到纠正而实现其抗心律失常的作用。应用膜片钳全细胞记录技术对豚鼠心室肌细胞膜的研究观察苦参汤对L-型钙离子通道电流的影响7，结果表明苦参汤可浓度依赖性地增加L-型钙离子通道电流，但不改变激活电位、峰值电位和反转电位，对钙离子通道的失活曲线无明显影响，提示