细菌的荚膜染色实验PPT课件.ppt

细菌的荚膜染色,1,.,实验目的与要求,继续学习微生物制片方法学习并掌握荚膜染色的基本原理和方法,2,某些细菌生长到一定阶段，在一定营养条件下可向细胞壁表面分泌一层松散透明、疏松、柔软、粘液状或胶质状的物质，即为荚膜（Capsule）。荚膜的化学成分：主要是多糖、多肽、蛋白质、脂以及由它们组成的复合物脂多糖、脂蛋白等。荚膜的功能：是细胞外碳源和能源性贮藏物质，能保护细胞免受干燥的影响，同时能增加某些病原菌的致病能力，抵御宿主吞噬细胞的吞噬。细菌荚膜与生产生活：葡聚糖、黄原胶的提取，龋齿、面包发粘，等。,细菌的荚膜,3,染色原理与说明,荚膜的化学成分对染料结合力很弱，不容易着色，而且可溶于水，易在水洗时被除去。所以，一般采用衬托染色法（负染色法）使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈（即荚膜）。荚膜很薄，涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形。荚膜富含水分（90%以上），制片时应自然干燥，不可加热固定，以避免荚膜受热失水收缩而变形，影响观察。,4,材料,细菌培养物：胶质芽孢杆菌（或钾细菌）染色液与试剂：Tyler染色液、绘图墨水（必要时滤纸过滤后再用）、复红染色液、黑素、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、20%CuSO4水溶液、香柏油、二甲苯器材：载玻片、盖玻片、接种环、擦镜纸、吸水纸、显微镜、废液缸、等。,5,方法,负染色法湿墨水法干墨水法Tyler法,6,负染色法,制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。干燥：将涂片放在空气中晾干，或用电吹风冷风吹干。染色：在涂面上加复红染色液染色23min。水洗：用水洗去复红染液。干燥：将染色片放空气中晾干，或用电吹风冷风吹干。涂黑素：在染色涂面左边加一小滴黑素，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素，使黑素沿玻片边缘散开，然后向右拖展，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。结果：背影灰色，菌体红色，荚膜无色透明。,7,制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。,湿墨水法,8,制菌液：加1滴6%葡萄糖液于洁净载玻片一端，挑少量菌与其充分混合，再加1环墨水，充分混匀。制片：左手执载玻片，右手拿一边缘光滑的盖玻片，使其一边与菌液接触、菌液沿玻片接触处散开，然后以30度角，迅速而均匀地将菌液拉向玻片的一端，使菌液铺成一薄膜。干燥：空气中自然干燥。固定：用甲醇浸没涂片，固定1min，立即倾去甲醇。干燥：在酒精灯上方，用文火干燥。染色：用甲基紫染12min。水洗：用蒸馏水轻洗，自然干燥。镜检：先用低倍镜再高倍镜观察。结果：背景灰色，菌体紫色，荚膜呈一清晰透明圈。,干墨水法,9,涂片：按常规法涂片，可多挑些菌体与水充分混合，并将粘稠的菌液尽量涂开，但涂布的面积不宜过大。干燥：在空气中自然干燥。染色：用Tyler染色液染57min。脱色：用20%CuSO4水溶液洗去结晶紫，脱色要适度（冲洗2遍）用吸水纸吸干立即加12滴香柏油于涂片处，以防止CuSO4结晶的形成。镜检：先用低倍镜再用高倍镜观察。结果：背景蓝紫色，菌体紫色，荚膜无色或浅紫色。,Tyler法,10,涂片方法,11,加盖玻片时不可有气泡，否则会影响观察。应用干墨水法时，涂片要放在火焰较高处并用文火干燥，不可使玻片发热。在采用Tyler法染色时，标本经染色后不可用水洗，必须用20%CuSO4冲洗。,注意事项,12,