宫颈癌筛查与HPV检测ppt课件

2014年终工作总结,之江生物HPV检测产品2019/12/10,HPVHarmonia,HPVVenus,1,宫颈癌筛查的意义,与HPV感染的关系,HPV检测及意义,宫颈癌筛查方法,目录,1,竞品分析及计划,2,宫颈癌的病因,1ICOInformationCentreonHPVandCancer：HumanPapillomavirusandRelatedDiseasesReport(China)，VinDecember18th,20142Dunneetal.JAMA.2007;297(8):813-819,HaraldzurHausen2008年诺贝尔医学和生理学奖,宫颈癌患者伴有HPV感染1,一过性感染,通过自身免疫在两年内清除2,90%,99.9%,HPV感染,宫颈癌发生,必要非充分,99%,高危型HPV感染,+,10,高危型HPV持续性感染,3,人乳头瘤病毒HPV属于乳多空病毒科（papovaviridae）乳头瘤病毒属。HPV呈球形，无包膜，双链DNA病毒。核壳呈对称20面体，由72个壳粒组成，壳粒由L1、L2两种衣壳蛋白组成2。HPV基因组长8000bp，编码8个主要开放阅读框，分为3个功能区，即早期转录区（E区），晚期转录区（L区）与长控制区（LCR）。E区编码E1、E2、E4、E5、E6、E7等早期蛋白，参与病毒的复制、转录、翻译调控和转化等功能；L区编码主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2。L1约占衣壳蛋白的80%，高度保守，L2含量较少，变异较多。LCR含有HPV基因组DNA的复制起点和HPV表达所需要的调控元件，调控病毒的转录与复制3。,病毒结构,4,目前已有HPV基因型别100余种，进33%的基因型与生殖道损伤有关。感染生殖道的HPV可分为两种：低危型（LR）和高危型（HR）。其中，HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68是常见的HPV高危型感染，与宫颈癌由密切联系；而HPV6、HPV11则为HPV低危型。HPV16、HPV18在HPV高危中最为常见，研究表明全世界有70%的宫颈癌与HPV16、18感染有关。HPV6、11与大多数的生殖器瘤样病变有关。持续HPV高危感染可进展为宫颈癌。在一些研究中表明，不同的高危HPV基因型有不同的致癌风险。所以，HPV基因分型对临床有重要意义。,5,BlavsteinspathologyoftheFemalegenitaltract.5thed.NewYork,Springer-Berlag,2002Cancer64:2184,1989,/acs/groups/content/epidemiologysurveilance/documents/document/acspc-027765.pdf,AnnInternMed113:214,1990BMJ293:659,1986Lancet2:779,1984,ObstetGynecol74:838,1989BMJ290:1543,1985JClinEpidemiol41:21,1988,筛查降低宫颈癌发病率,6,6,中国每年约有15万宫颈癌新发病例，每年约有10万人死于宫颈癌，平均每6分钟就有一名妇女死于宫颈癌。宫颈癌早期治疗的5年生存率为100%，晚期治疗5年生存率仅为2050%。,早诊断、早治疗是防治宫颈癌的关键,7,宫颈癌诊断方法,细胞学,组织学,免疫学,核酸检测,巴氏涂片（PapSmear）液基细胞学技术（TCT）特点：最常用的初步筛方法，操作简单，成本低；易受取材、染色、生理状况及细胞病理医生的主观判断等因素的影响,肉眼观测：涂抹醋酸（VIA），碘试验阴道镜检查组织活检特点：人员素质要求高，病人痛苦程度大,HPV抗原检测HPV抗体检测特点：免疫原性较弱，灵敏度低,杂交捕获（HC2）：不分型PCR杂交：不分型实时荧光PCR：分型特点：敏感度和阴性预测值高，,16,8,2015年，ASCCP和SGO：采用HPV检测开展宫颈癌一线筛查。,HPV检测可作为宫颈癌筛查的首选方法,9,20-24岁开始明显增多40-44岁达到峰值,市场潜力,3,2014年卫生和计划生育委员会开展了针对54.6万农村妇女的HPV筛查试点项目国内育龄妇女有1.6亿，筛查年龄是20-60岁，每35年市场可观。适龄（中国推荐30岁以上，美国推荐25岁以上）普通女性。筛查间隔为3年。随着HPV疫苗上市（2016年），会拉动HPV检测市场。HPV的市场容量预估5个亿,10,高危型人乳头瘤病毒（HPV）分型核酸测定试剂盒,之江生物HPVVenus,HPV检测试剂中的高端产品、品牌产品,11,与罗氏诊断共同参与由郎景和院士、乔友林教授主持的适合中国农村地区的宫颈癌筛查基础与示范研究重大专项。,参与国家重大专项,12,病因,筛查,诊断,治疗,有效浓缩高风险人群，避免过度诊断和治疗，为区分HPV持续感染提供依据,提供治疗和疗效的判断依据,5,判定高危型HPV的持续感染,HPV检测具有更高的敏感度和阴性预测值,产品功能,13,HPVVenus高危型HPV分型检测,实时荧光PCR技术,实时荧光PCR技术是利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。,6,14,HPV分型检测原理,通过多对特异性引物仅对样本中15种致癌危害最大的HPV型别的特异性DNA核酸片段进行扩增，分别用不同标记的特异性荧光探针进行检测,7,HPVVenus高危型HPV分型检测,15,HPVVenus可避免因区域片段基因丢失造成的假阴性,因L1区域发生缺失变异，以L1段为靶区域的PCR方法漏检率占CIN3和宫颈癌病例的6.3%，且包括HPV16、HPV18感染病例,HPVVenus检测位点位于E基因区段，有效避免漏检,16,HPV相对定量检测,宫颈上皮细胞无法进行等量采样，样本中细胞数含量将影响评估结果单拷贝MNBH作为校正，结果更具临床价值,细胞量,核酸载量,MNBH,Q1,Q2,MNBH为人单拷贝基因，其含量可作为校正宫颈上皮细胞的参照,对样本中宫颈上皮细胞数量进行监控，避免假阴性结果,在相同的细胞数上比较HPV载量，更具临床价值,11,当测定的核酸载量相同而细胞量不同时，患者的HPV感染程度是显著不同的,HPVVenus高危型HPV分型检测,17,之江生物HPVVenus,对15种高危型HPV分型、单型别相对定量检测的荧光定量PCR检测试剂，适用于宫颈癌筛查、高危型持续性感染判定，“分层管理”，疗效评价及HPV疫苗使用指导和评价。,18,产品卖点,19,临床沟通篇,20,临床适用指征：宫颈癌筛查（若阴性，提示3年内无致癌可能）不正常阴道出血、性交后出血宫颈糜烂，尤其是重度糜烂TCT细胞学检查提示有ASCUS及以上病变的HPV阳性，治疗随访宫颈病变行诊断性锥切、治疗性手术术后随访宫颈癌术后随访,高危型HPV核酸分型检测,21,高危型HPV核酸分型检测的意义,1、HPV的分型检测为HPV持续感染、多重感染的判断依据。案例：如第一次检测16型；第二次检测为18型；说明不是持续感染，病人有足够免疫力清除病毒。病毒感染可以呈现出同一亚型持续、不同亚型新感染、不同亚型反复感染、多个亚型同时感染。同一高危亚型持续感染或多个亚型同时感染的风险显著增加，只有通过分型才能浓缩高风险人群。,22,高危型HPV核酸分型检测的意义,2、不同亚型致癌能力不同，HPV16,18,33,58等致病力较强，易导致宫颈高度病变及宫颈癌的发生。国内高度病变型别中58、52、33均高于18，存在国内外差异，细胞与病毒的亲和力是有不同的。（北京朝阳医院数据）,23,高危型HPV核酸分型检测的意义,3、通过分型检测，对患者进行个体化评估，预测宫颈病变发生的风险度，实现分级管理，从而决定筛查的间隔、临床处理及治疗方案的选择与制定等。,24,高危型HPV核酸分型检测的意义,4、HPV基因分型检测及定量结果对宫颈病变病人手术前后随访提供依据；如术后HPV仍呈阳性，有两种情况1）若治疗后HPV仍为同一亚型阳性，复发的可能性大；2）如果是其它亚型阳性，则为重复感染，手术病灶切除干净。,25,高危型HPV核酸分型检测的意义,5、指导疫苗的使用和评价国内外HPV感染的亚型有差异，国内HPV感染亚型以16，52，58，18和33为主，而国外则以16，18，45，31等亚型为主。目前国外研制的疫苗以预防16，18感染为主，并不完全符合国内情况。因此，进行HPV分型检测可了解中国不同地区的HPV感染亚型分布，研发出适合中国国情的HPV疫苗。,26,高危型HPV核酸定量检测,宫颈上皮细胞无法实现等量采样不等量的宫颈上皮细胞采集，导致无法准确评估患者的感染程度在进行有效的HPV病毒载量评估前应调整标本中的细胞数内参校正基因，校正宫颈细胞数到相同水平进行病毒载量比较,27,高危型HPV核酸定量检测,荧光PCR法高危分型HPV核酸检测可对患者体内HPV含量进行相对定量，更真实反映感染状态。,如何判断HPV感染水平？,28,高危型HPV核酸定量检测的临床意义,1、监控假阴性，对样本采集质量作出判断2、混合感染，通过定量可以判断优势型别3、相对定量结果可以反应HPV病毒载量动态变化，明确病毒是在清除还是大量复制过程，从而为筛查的间隔提供依据，准确监测病毒感染的进展，为随访提供参考依据4、治疗：通过定量提供治疗疗效判断依据，更直观的表现出治疗效果，为患者后续随访提供依据，更利于医患的沟通。,29,说明：1、高危型HPV基因分型检测可以反映宫颈病变进展，关键是做到早期筛查。2、Ct值表示受检者感染HPV真实的病毒载量，Ct值越小表示病毒感染程度越高。Ct值30（+）轻度感染；30Ct值20（+）中度感染；Ct值20（+）重度感染。3、不同HPV亚型的致病能力不同，各型别的Ct值大小不具有可比性。4、若检出一种或多种高危HPV亚型阳性，应按医生指导定期复查或做进一步检出。5、此结果仅对标本负责，结果供临床医师参考。6、本报告单应妥善保管，以便跟踪两次检验期间的感染程度变化。,30,HPVVenus卖点,功能即卖点！15种高危型别，可覆盖99%以上的宫颈癌可分型、可单个型别相对定量，为临床提供诊疗依据当天出报告,31,检验科/病理科沟通篇,32,高危型HPV检测主流方法,4,杂交捕获（HC2）,PCR-核酸交法,实时荧光PCRRealTimePCR,33,高危型HPV检测方法分类比较,PCR-膜杂交法PCR-流式微球技术,RealTimePCR,HC2,是否扩增,信号检测方式,扩增,非扩增,非实时,实时,检测灵敏度,防污染能力,104copies,10copies,闭管反应，有效避免交叉污染,PCR扩增与杂交显色两步完成,13,34,检测方法分类比较（产品优势）,8,35,实时荧光PCR法与PCR-膜杂交法的比较,实时荧光PCR法,PCR-膜杂交法,36,检测方法分类比较,9,37,检测方法分类比较,10,38,欧盟CE认证,CFDA认证,变更说明：新增66型：WHO认定为致癌证据2B级的HPV型别，已有美国FDA注册产品的临床数据支持。新增82型：WHO认定为致癌证据2B级的HPV型别，国内具有感染阳性率较高。,39,目前适合临床HPV分型最准确分子技术平台,独立的闭管PCR检测,有效避免因开盖造成的标本间交叉污染,检测时间短,上机1.5h出结果，快速简便，满足临床需求,对15种高危型精确分型,一个反应，15个结果，仪器自动报告结果,定量,质控采样、核酸提取及PCR过程，可真实反应病人的感染程度，满足临床需求,12,当天检测当天出结果,HPVVenus卖点,40,优势分型，可单个型别分别定量。相对定量。出报告及时（1.52小时）。操作简单。可实现一个样本多项检测。,之江生物高危型HPV核酸分型检测,1.获得欧盟CE认证2.参加郎景和、乔友林主持的科技部重大专项,41,我们的产品,34,EX2400,Autrax,42,35,我们的客户（部分）,天津人民医院,空军总医院,四川省人民医院,湖南省肿瘤医院,成都市妇女儿童中心医院,北京地坛医院,43,之江产品与新CFDA技术评审指导原则,国家食品药品监督管理总局人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型、试剂技术审查指导原则：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种高危型别，26、53、66、73、82等5种中等风险型别，共18种HPV型别的检测临床价值明确。除此之外的型别则需提出明确的理由和依据，且应得到国际有关权威机构的文献支持。至2016年1月，CFDA批准了：12个可检测13种以内的高危HPV（包括只检验16、18的产品）-不全22个可以检测种型的产品1318（注册技术评审指导原则）-14个产品可检测多于18种型别的HPV检测试剂,44,之江产品为什么