HIV检测宣传.ppt

,HIV感染的检测3A组,检测的重要性,2,任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者甚至对家庭和社会都产生十分重要的影响艾滋病诊断的一项重要指标，也是控制HIV传播和控制艾滋病流行的重要手段,检测的目的,3,诊断为确定个体HIV感染状况，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。监测为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，检测的人群包括各类高危人群和一般人群血液筛查为防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。临床治疗和预后的判断疗效观察和耐药性监测,HIV感染的实验室检测,4,初筛试验：酶联免疫吸附（ELISA）、凝集试验、唾液、尿液检测卡以及斑点印迹试验等确认试验：免疫印迹法(WB)、免疫荧光试验(IFA)、条带免疫试验以及放射免疫沉淀试验(RIPA),常用HIV抗体检测方法：,其他：,CD4+/CD8+Tcell计数等,常用HIV病原学检测方法,5,由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和病毒核酸检测可用于临床诊断。,病毒抗原检测,6,窗口期：HIV感染人体后有一段窗口期，在这段时期病毒抗体不能被检出，但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。HIV-1感染机体后,感染者血液中最早出现的是病毒gag基因表达产物p24抗原,然后才出现相应的特异性抗HIV抗体,以后随抗体滴度的升高p24抗原含量呈逐渐下降的趋势以至检测不出。在病情发展到AIDS期，病毒大量复制，机体免疫力下降，所产生的抗体不足以中和病毒抗原时，p24抗原在血中又可检测出。,P24抗原检测,病毒抗原检测,方法：以P24单克隆抗体包被微孔板，加人待检标本孵育，待检标本中若存在P24抗原，则被“捕捉”结合于包被抗体，然后依次加入生物素化的抗HIV多克隆抗体、链亲合素化的辣根过氧化物酶和反应底物显色，最后用酶联免疫检测仪测定OD值判断结果。应用：血液及其他体液标本中P24抗原的检测可以缩短窗口期，有助于HIV-1的早期诊断、预后判断及评价抗病毒治疗的效果，具有良好的实际应用价值。,ELISA检测P24抗原,病毒抗原检测,结果报告和解释（局限性）,8,HIV-1P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认HIV-1P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应不能排除HIV感染,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,病毒核酸检测,10,病毒核酸检测,定性检测主要用途,11,病毒核酸检测,辅助诊断在一般情况下，HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断，但在特殊情况下，单纯抗体检测不足以完成明确的判定，如出现某些非典型的抗体反应形式，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。虽然单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否，但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时（3，000c/ml），感染发生的可能性非常大。病程监控根据HIV感染发生后病毒载量具有一定的变化规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因此定期进行病毒载量的检测有助于确定疾病发展的阶段，以确定相应的治疗方案。,定量检测主要用途,指导治疗方案及疗效判定临床实践证明，并非在任何情况下HIV感染者都应该进行抗病毒治疗。通常在病毒载量达到一定水平后（如3500050000c/ml）抗病毒治疗才具有良好的效果。在进行治疗后，通过病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常在治疗前后病毒水平降低0.5log以上才被认为临床有效。预测疾病进程HIV感染后疾病进程与病毒载量的关系十分密切，观察HIV感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。,12,HIV感染的实验室检测,13,初筛试验：酶联免疫吸附（ELISA）、凝集实验、唾液、尿液检测卡以及斑点印迹试验等确认试验：免疫印迹法(WB)、免疫荧光试验(IFA)、条带免疫试验以及放射免疫沉淀试验(RIPA),常用HIV抗体检测方法：,HIV抗体检测方法ELISA,酶联免疫吸附法（ELISA）,酶联免疫吸附（ELISA）,ELISA是最常用的HIV抗体检测方法，其试剂已经发展到第4代,solidphase,humansample,conjugate,HIVELISA试剂的发展过程,ELISA是最常用的HIV抗体检测方法，其试剂已经发展到第4代,HIV感染窗口期,4rd代,第四代ELISA试剂优缺点,优点：缩短了窗口期缺点：同时把抗原和抗体包被在反应板上，存在互相干扰的可能，检测的敏感性和特异性可能都会受到影响。第四代试剂检测p24抗原的敏感度(20100pg/ml)，单独检测p24抗原试剂的敏感度(3.510pg/ml)。,快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）,19,原理：将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。,快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）,结果判读,快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）,21,对照粒子的反应图象为纽扣状凝集，致敏粒子的反应图象为环状凝集，则判为阳性。无论对照粒子呈何种图象，只要致敏粒子的反应图象显示为纽扣状凝集时即判为阴性。若对照因子反应图象为纽扣状凝集，致敏因子反应难以确定则判定为可疑。对于对照粒子和致敏粒子均显示可疑或阳性以上的样品，要在完成吸收实验的基础上进行在实验，或用其他试剂检测；结果为阳性或不确定样本，应用该试剂和其他试剂重复检测，如果仍为阳性需用蛋白印迹法确诊试验。,快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）,22,PA是一种简便的HIV血清抗体免疫学检测方法。由于操作简便，无需特殊仪器设备，很适合对少量标本的检测。但由于其灵敏度和特异度不及ELISA，故不宜用于献血员和大规模常规检测。,优缺点,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,其他快速诊断方法,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,免疫斑点和免疫层析,免疫胶体金（或胶体硒）,唾液、尿液检测卡,1,2,1,1,2,1,2,1,2,1,3,1,1,2,1,2,1,2,1,2,1,2,1,2,1,2,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,快速诊断方法的特点,敏感度、特异度低于ELISA，且价格贵,快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证,适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊、手术前检查,快速、不需特殊仪器,HIV感染的实验室检测,25,初筛试验：酶联免疫吸附（ELISA）、凝集实验、唾液、尿液检测卡以及斑点印迹试验等确认试验：免疫印迹法(WB)、免疫荧光试验(IFA)、条带免疫试验以及放射免疫沉淀试验(RIPA),常用HIV抗体检测方法：,免疫印迹法（WB）,常用的确认实验方法是免疫印迹法（WB）免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型，一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测HIV病毒蛋白用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,把分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品与硝酸纤维素膜一起孵育，恒温震荡，使其充分接触反应，血清中若含有抗HIV抗体，就会与膜条上的带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，即可使有反应的抗原-抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果。,HIV抗体诊断WB结果判定标准（我国）,HIV抗体诊断WB结果判定标准（我国）,WB检测的优缺点,WB不确定结果,当出现任何HIV病毒特异条带，但不足以被判断为阳性则判定为不确定结果。不仅初筛阳性的标本可以出现不确定的结果，初筛阴性的标本经WB检测也有大约15%出现针对一个或几个抗原的不确定结果。WB不确定结果的出现确实给临床诊断带来困难，需要更多的时间和实验进一步确认，也会对受试者造成额外的心理负担。从另一方面而言，WB不确定结果确是受试者真实的血清学反应。,WB出现不确定结果的原因,检测对象：HIV及相关感染：早期血清学转换、AIDS晚期、早产感染、HIV缺失株感染、免疫静止型AIDS、HIV-2感染、散发HIV/SIV(猴免疫缺陷病毒)其它逆转录病毒感染：山羊关节炎-脑炎病毒其它临床状态：自身免疫疾病（系统性红斑狼疮，原发性干燥综合征）、麻风病、恶性肿瘤、高胆红素、高核蛋白、高类风湿因子无感染：HIV阳性母亲所生的正常婴儿、未筛查血液制品的接受者、疫苗试验志愿者、保持WB结果不变的供者,WB出现不确定结果的原因,检测试剂：宿主细胞蛋白残留、判断准则、试剂盒的条件优化/稳定性实验操作：交叉污染、试验程序、仪器设备、样本处理及溶血,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,免疫荧光试验(IFA),放射免疫沉淀试验(RIPA),条带免疫试验,其他HIV抗体确认实验,34,其他：,CD4+/CD8+Tcell计数等,与艾滋病相关的免疫细胞检测,