（劳动卫生与环境卫生学专业论文）慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究.pdf

目录 缩略语表1 中文摘要0 00000 000000 o ooooo qooooo 2 英文摘要o oooo ooooood o i ooooooqooooo6 4 前言- ”“” 日u 舌”“一”“”“一“一”“”“” 一、研究目的1 0 二、研究内容与方法 2 1 技术路线1 0 2 2 研究现场选择1 1 2 3 研究对象选择1 1 2 4 流行病学调查1 3 2 5 体格检查1 3 2 6 生物样品采集与检测1 3 2 7 资料整理分析1 9 2 8 质量控制o ooooo 1 9 三、结果 3 1 车间空气汞污染状况2 1 3 2 研究对象一般情况比较2 2 3 3 研究对象汞接触情况比较2 4 3 4 汞暴露对肾脏功能影响的单因素分析2 6 3 5 不同年龄、工龄分层研究汞暴露对肾脏功能的影响2 9 3 5 1 按年龄分层分析o oo dooooo 3 0 3 5 2 按工龄分层分析o oodoo o00 ooooeo o00oooo oooqo 3 3 3 6 汞暴露对女工肾脏功能影响3 5 3 7 按人均月收入分层分析汞对肾功能影响3 7 3 8 按化妆品使用分层分析汞对肾功能影响3 8 3 9 汞对肾脏功能影响的多因素分析4 0 四、讨论 4 1 研究对象的组间比较和混杂因素的控制4 9 4 2 汞暴露指标的讨论o oo eooooo 5 0 4 3 汞暴露与肾功能之间的关系5 1 4 3 1 肾功能指标的意义5 1 4 3 2 汞暴露对肾功能的影响o o o oooooooio 5 2 4 4 本研究的不足5 6 五、结论o oooooooo 5 7 参考文献5 8 附录一：综述6 2 附录二：职工健康调查表7 4 附录三：职工体检表o oo ooo 8 0 致谢8 1 个人简历d o9 0 qo ooo 8 2 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 s c r b u n c c r q1 一m g r b p n a g c e i 缩略语表 血肌酐 ( s e r u mc r e a t i n i n e ) 血尿素氮 ( b l o o du r e an i t r o g e n ) 内生肌酐清除率 ( e n d o g e n o u sc r e a t i n i ec l e a r a n c er a t e ) ql 一微球蛋白 ( a l - m i c r o g l o b u l i n ) 尿视黄醇结合蛋白 ( r e t i n 0 1 b i n d i n gp r o t e i n ) 一一 尿n 一乙酰一1 3 一d 一氨基葡萄糖苷酶 ( n a c e t y l - 1 3 一d - g l u c o s a m i n i d a s e ) 累计暴露量 ( c u m u l a t i v ee x p o s u r ei n d e x ) - 1 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 研究生 导师 郑徽 金银龙 摘要 汞是一种具有严重生理毒性的化学物质，它在环境中的易迁移性、持久性和 高度的生物富集性，使之成为全球最引人关注的环境污染物之一。我国是目前全 球汞污染最为严重的地区之一，生产和生活环境中汞含量超标的现象在我国仍普 遍存在。慢性汞暴露对人群健康的损害受到广泛关注，肾脏是汞进入人体后蓄积 最主要的靶器官之一，本课题研究慢性汞暴露对人群肾脏功能的影响，为保护汞 接触人群健康提供科学依据。 本课题收集了温度计厂1 9 9 6 年一2 0 0 6 年间各工种生产期车间空气汞含 量监测资料，采集了全厂职工的发样、即时尿样和空腹血样，并对职工进行了体 格检查和流行病学问卷调查。通过问卷调查，了解职工的年龄、性别、文化程度、 家庭收入、吸烟情况、饮酒情况、职业接触史、中毒史、疾病史、家族史、药物 史、自觉症状等情况。选择既往工种变动小，且无肝肾疾病史、无高血压心脏病 史、无驱汞药物、抗生素及镇痛药等药物长期服用史的1 8 6 名职工作为本研究的 对象。根据该厂1 9 9 6 2 0 0 6 年生产车间空气汞监测数据为划分依据，以车间空气 中汞卫生标准( g b l 6 2 2 7 1 9 9 6 ) 中规定的车间空气中汞的最高允许浓度 o 0 2m g m 3 为依据，划分为对照组( 空气汞历次监测结果小于0 0 2m g m 3 ) 和暴 露组( 空气汞历次监测结果大于0 0 2m g m 3 ) 。对所有研究对象进行发汞、尿汞 的检测，并计算累计暴露量( c e i ) ，并对研究对象进行肾脏功能的检测，包括 血肌酐( s c r ) 、血尿素氮( b u n ) 、尿ql 一微球蛋白( a1 一m g ) 、尿视黄醇结合 蛋白( r b p ) 、尿n 一乙酰一b d 一氨基葡萄糖苷酶( n a g ) 及尿肌酐，并通 过公式计算得出内生肌酐清除率( c c r ) 。 研究结果显示：1 ) 暴露组空气汞浓度、尿汞、发汞和累计暴露量显著高于对 照组( p o 0 1 ) ，各暴露指标之间均显著正相关( p 1 0 年的职工中，仅n a g 与尿汞呈显著正相关关系；5 ) 肾小球滤过功 能指标( s c r 和c c r ) 与反映机体长期汞接触的暴露指标( 发汞、c e i 、工龄等) 间相关性显著，而肾小管重吸收功能指标( al m g 、r b p 、n a g ) 与反映短期 暴露指标( 尿汞) 间相关性显著。 结论：1 ) 慢性汞暴露能够对人群的肾脏功能造成影响。在本研究的暴露水平 下( 尿汞6 8 2m g m 0 1 c r 、发汞6 0 1 【g g ) ，肾小球和肾小管均可出现亚临床的 功能改变。2 ) 肾脏功能可敏感的反映汞暴露对健康的影响，在慢性汞暴露人群 健康筛选时，s c r 和c c r 可作为肾小球功能损伤的敏感指标，尿n a g 可作为肾 小管功能损害的敏感指标。3 ) 肾小管损伤的效应指标可反映汞暴露对肾脏功能 的早期影响，而肾小球滤过功能指标能够反映汞暴露对肾脏功能的长期损害。4 ) 在本研究的暴露水平下，尿汞含量与肾小管损害存在一定的量效关系，尿汞每升 高1m g m m 0 1 c r ，尿n a g 活性增高0 5 1u m m 0 1 c r ，尿a1 一m g 含量增加 1 2 7m g m m 0 1 c r ，尿r b p 含量增加0 0 5m g m m 0 1 c r 。汞暴露与肾小球损害之间 未见明显的量效关系。 关键词：汞肾功能肾小球肾小管 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 a d v e r s ee f f e c t so fc h r o n i c e x p o s u r et om e r c u r y v a p o r o nr e n a lf u n c t i o n m sc a n d i d a t eh u iz h e n g t h e s i sa d v i s o r y i n l o n gj i n a b s t r a c t m e r c u r yh a s b e e nr e g a r d e da so n eo ft h em o s ti m p o r t a n te n v i r o n m e n t a lp o l l u t a n t s ， w h i c hi st h r e a t e n i n gt h ep u b l i ch e a l t h c h i n ai so n eo ft h em o s ts e r i o u s l ym e r c u r y p o l l u t e da r e a si nt h ew o r l d a n di ti sv e r yp r e v a l e n tt h a tt h ec o n c e n t r a t i o no fm e r c u r y e x c e e d st h eg u i d e l i n e sb o t hi nt h el i v i n ga n dw o r k i n ge n v i r o n m e n t n o wm o r ea n d m o r ea t t e n t i o nh a sb e e np a i dt ot h ec h r o n i cm e r c u r ye x p o s u r e f o rk i d n e yi so n eo f t h em a i nt a r g e to r g a n so fm e r c u r y , w es t u d i e dt h er e n a le f f e c t so fc h r o m em e r c u r y v a p o re x p o s u r ei no r d e rt op r o t e c tt h eh e a l t ho ft h ep e o p l ew h oc h r o n i c a l l ye x p o s e dt o m e r c u r y m e t h o d s ：t h ed a t a so fm e r c u r yc o n c e n t r a t i o ni n a i ro ft h ee a c hj o bc a t e g o r yi na t h e r m o m e t e rp l a n tf r o m1 9 9 6t o2 0 0 6w e r ec o l l e c t e d w o o e r s g e n e r a li n f o r m a t i o n s a n dh e a l t hw e r el e a r n e dt h r o u g hq u e s t i o n n a i r es u r v e ya n d p h y s i c a le x a m i n a t i o n o n e h u n d r e da n de i g h t ys i xw o r k e r sw i t h o u tt h eh i s t o r yo ft h el i v e rd i s e a s e ，r e n a ld i s e a s e ， h y p e r t e n s i o n ，c a r d i o p a t h y , e ta l ，w e r ec h o s e na ss u b j e c t s ，w h o s ej o bc a t e g o r i e ss h o u l d b er e l a t i v e l ys t a b l e t h e s es u b j e c t ss h o u l dn o th a v et a k e nt h em e d i c i n eo fr e d u c i n g b o d ym e r c u r yb u r d e n ，a n t i b i o t i c ，a n da n a l g e s i c a c c o r d i n gt om e r c u r yc o n c e n t r a t i o n i na i ri nw o r k s h o p s t h es u b j e c t sw e r ed i v i d e dt ot h ec o n t r o lg r o u p ( a i rm e r c u r y 1 0 0 2m g m 3 ) ( g b l 6 2 2 7 - - 1 9 9 6 ) t h e s a m p l e so fu r i n e ，h a i ra n db l o o dw e r ec o l l e c t e df r o me a c hs u b j e c t m e r c u r yi nh a i r a n du r i n ew e r ed e t e r m i n e da n dc u m u l a t i v ee x p o s u r ei n d e x ( c e dw a sc a l c u l a t e dt o s h o wt h em e r c u r ye x p o s u r e t h er e n a lf u n c t i o nw a se v a l u a t e db ys e r u mc r e a t i n i n e ( s o r ) ，b l o o du r e an i t r o g e n ( b u n ) ，al - m i c r o g l o b u l i n ( ai m g ) ，e n d o g e n o u sc r e a t i n i e c l e a r a n c er a t e ( c c r ) ，r e t i n o l - b i n d i n g p r o t e i n ( r b p ) ，n a c e t y l - b - d g l u c o s a m i n i d a s e 4 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 ( n a g ) r e s u l t s ：1 ) t h ea i rm e r c u r y , u r i n a r ym e r c u r y , h a i rm e r c u r ya n dc e ii nt h ee x p o s e d g r o u ph a db e e ng r e a t l yi n c r e a s e dt h a nt h a ti nc o n t r o l0 0 0 1 ) ，a n dt h e s ei n d i c a t o r s h a ds i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e ne a c ho t h e r ( p o 0 5 ) 2 ) i nt h ee x p o s e d g r o u p ，s c rw a s8 1 6 4 3 9 # t o o l l , a n dc c r w a s8 1 6 3 9 7 m l m i n i nt h ec o n t r o lg r o u p ， s c rw a s6 5 6 3 6 6 t m o l l , a n dt h ec c rw a s1 1 3 4 4 5 4m l m i n d a t aa n a l y s i s s h o w e dt h a ts c ri nt h ee x p o s e dg r o u pw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti nc o n t r o l g r o u p ，a n dc c rw a ss i g n i f i c a n t l y l o w e rt h a nc o n t r 0 1 w h e nh a i rm e r c u r yw a s i n c r e a s i n g ，s c rw a si n c r e a s i n ga n dc c r w a sd e c r e a s i n g 3 ) n a ga c t i v i t yi ne x p o s e d g r o u pw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti nc o n t r 0 1 m u l t i p l er e g r e s s i o na n a l y s i s s h o w e du r i n a r ym e r c u r yh a ds i g n i f i c a n ti n f l u e n c eo nt h ea l m gr b pa n dn a g , t h a t i s ，w h e nu r i n a r ym e r c u r yw a si n c r e a s i n g ，t h eal - m gr b p a n dn a gw e r ei n c r e a s i n g 4 ) w h e nt h ed u r a t i o no fe m p l o y m e n t w a sl o w e rt h a n2y e a r s ，al m gr b pa n d n a g p o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hu r i n a r ym e r c u r y , a n dd u r i n g3t o1 0y e a r s ，a l - m ga n d n a g p o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hu r i n a r ym e r c u r y , b u tw h e nd u r a t i o nw a sl o n g e rt h a n 1 0y e a r s ，t h e r ew a so n l yn a gp o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hu r i n a r ym e r c u r y 5 ) t h e i n d i c a t o r so ft h eg l o m e r u l a rd y s f u n c t i o ns u c ha ss c ra n dc c rs i g n i f i c a n t l yc o r r e l a t e d w i t ht h el o n g - t e r mm e r c u r ye x p o s u r ei n d i c a t o r ss u c ha s h a i rm e r c u r ya n dc e i ， h o w e v e rt h ei n d i c a t o r so ft h er e n a lt u b u l a rd y s f u n c t i o ns u c ha sal - m gr b pa n dn a g s i g n i f i c a n t l yc o r r e l a t e dw i t ht h e s h o r t t e r mm e r c u r ye x p o s u r ei n d i c a t o r ss u c ha s u r i n a r ym e r c u r y c o n c l u s i o n s ：c h r o n i ce x p o s u r et om e r c u r yv a p o rm a yi m p a c tt h er e n a lf u n c t i o n a t t h em e r c u r y e x p o s e dl e v e lt h a tu r i n a r ym e r c u r yw a s6 8 2m g m 0 1 c ra n dh a i rm e r c u r y w a s6 0 扣g g , b o t hg l o m e r u l a ra n dt u b u l a rc o u l ds h o ws u b c l i n i c a lc h a n g e s 1 ) i nm e d i c a le x a m i n a t i o n sf o rp e r s o n se x p o s e dt om e r c u r y , s c ra n dc c rc a nb e d e t e r m i n e da st h es e n s i t i v ei n d i c a t o r sf o rt h eg l o m e r u l a rf u n c t i o n ，a n dt h en a g f o rt h et u b u l a rf u n c t i o n 2 ) t h ei n d i c a t o r so ft h er e n a lt u b u l a rd y s f u n t i o nm a ys h o wt h ea d v e r s ee f f e c t so f m e r c u r yo nt h ek i d n e y si nt h ee a r l ys t a g e ，o nt h eo t h e rh a n dt h eg l o m e n l l a r 5 慢性汞暴露对人群。肾脏功能影响的研究 d y s f u n c t i o ni n d i c a t o r sm a y s h o wt h ec h r o n i cr e n a le f f e c t so fm e r c u r y 3 ) a tt h em e r c u r ye x p o s e dl e v e lo fo u rs t u d y , t h e r em a yb ec e r t a i nd o s e - e f f e c t r e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h eu r i n a r ym e r c u r ya n dt h er e n a lt u b u l a rd y s f u n c t i o n w h e n u r i n a r ym e r c u r yi n c r e a s e sb y 1 m g m m 0 1 c r , n a ga c t i v i t i e s i n c r e a s e sb y 0 51u m m 0 1 c r ，t h ec o n c e n t r a t i o no ft h eu r i n a r yal m gi n c r e a s e sb y 1 2 7m g m m 0 1 c r ，a n dr b pi n c r e a s e sb y0 0 5m g m m 0 1 c r h o w e v e r , t h e d o s e e f f e c t r e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h e m e r c u r ye x p o s u r ea n d t h eg l o m e r u l a r d y s f u n c t i o ni sn o tf o u n di nt h i ss t u d y k e yw o r d s ：m e r c u r y r e n a lf u n c t i o nr e n a lg l o m e r u l u sr e n a lt u b u l e 6 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 前言 汞是一种广泛存在于自然界中的高毒性有害金属，在自然界中它以多种物理 和化学形态存在：元素汞或汞蒸气( h 酽) 、无机汞盐( h g + h 9 2 + ) 和有机汞化 合物( 甲基汞、芳香基汞) 。人体可以通过空气、食物和饮水等途径摄入汞，当 体内蓄积的汞达到一定剂量时就会产生毒作用，影响机体健康。 随着近代工业的大发展，汞和汞化合物在工业、农业、医药和日常生活中的 应用日益广泛，约有8 0 多种工业需要用汞作为原料或辅助材料。目前，汞污染 已遍及全球，生产和生活中排放出的大量含汞污染物正在威胁着人类的生存环 境。2 0 0 3 年联合国环境规划署( u n e p ) 在内罗毕发表的“全球汞状况评估”的报 告指出，自工业革命以来，汞在全球大气、水和土壤中的含量已增加了3 倍左右， 工业区附近汞的含量更高f 1 1 。据估计，各种人为污染源每年向大气中排汞1 9 0 0 2 2 0 0 吨。我国经济正处在高速增长期，但资源消耗量大、污染严重的粗放型发 展模式仍然是我国经济增长的重要特点。2 0 0 0 年世界汞产量约2 0 0 0 吨，而中国 汞的年使用量达9 0 0 多吨，进口占7 0 左右，为世界上用汞量最大的国家。同时， 中国也是全球汞污染最为严重的地区之一，大气中每年汞平均值为5 2 2 吨，平 均沉降值大于7 0f l g m 2 ，重庆、北京、长春、沈阳等工业城市大气汞含量是纽约 布鲁克斯、曼哈顿市区的数倍甚至上百倍( 2 0 0 2 年u n e p 的评估报告【2 】) 1 3 l 。在 我国，汞的使用涉及众多产业和部门，主要有化工、电池、黄金选冶、电光源、 烧碱业、水银法电解食盐、含汞农药和医疗器械等行业。目前尽管缺乏全国性系 统的调查数据，但根据一些学者的研究结果显示，我国生产环境汞污染状况不容 忽视。张艳淑【4 】等人调查某灯管厂，4 0 份车间空气样品的汞浓度范围为0 0 1 6 0 1 m g m 3 ，最高超标5 倍( 车间空气汞最高允许浓度o 0 2m g m 3 ，g b l 6 2 2 7 - - 1 9 9 6 ) ；某温度计厂不同作业点3 0 多份空气样品，平均超标9 5 倍，最高超标3 5 倍，空气汞超标率达到9 1 4 【5 】o 不同形态的汞在体内的代谢特点和毒性作用有一定差异。金属汞主要经呼吸 道进入体内，一旦吸入，可迅速通过肺泡膜弥散，几分钟内即被吸收，约占吸入 汞量的7 5 8 0 。金属汞的弥散性和脂溶性很强，使其易透过血一脑屏障和胎盘 屏障，随血液分布于全身各脏器和组织1 6 1 ，在组织内金属汞被氧化成h 9 2 + 后不易 慢性汞暴露对人群。肾脏功能影响的研究 被运出而在组织内蓄积1 7 l 。随汞的形态、接触时间、接触剂量的不同在各组织间 的分配也不同，但肾和脑是体内汞蓄积的两个最主要的靶器官。汞在全身的半衰 期为6 5 - - 7 5 天，当人体汞负荷处于稳定状态时，粪便和尿的排汞量约为总负荷 量的1 ，发汞含量约为体内汞负荷量的1 0 。此外指甲、乳汁等途径也可排汞。 因此，发汞和尿汞可以作为生物标志物反映体内汞的负荷【8 1 。 长期接触汞及其化合物可以对神经、免疫、生殖、消化、皮肤、泌尿等系统 产生不同程度的影响。特别是神经系统和肾脏功能的早期改变引起了人们的广泛 关注。 神经系统损害是汞及其化合物的主要毒性表现之一，各种形态的汞及其化合 物都具有神经毒性。吸收入血的金属汞，在从血液至组织的过程中逐渐氧化为汞 离子( h 9 2 + ) ，一旦进入脑组织后，转化的h 9 2 + 与组织蛋白结合不易再穿透血脑 屏障，排出甚慢。动物实验表明，停止汞染毒6 个月，动物脑中尚存留2 0 的 汞【9 1 。据2 0 3 h g 的动物示踪研究显示，2 0 3 h g 侵入脑部，以小脑、脊髓、延髓、脑 桥和中脑蓄积最多，并且汞在小脑内集中于普肯也细胞及齿状核细胞中，导致金 属汞中毒出现四肢震颤核阵孪等症状。此外，有人利用气相色普一原子吸收联用 技术发现，入侵人体的金属汞不仅发生无机态的分子转化( h 9 2 + ) ，同时也可以 发生有机态的分子转化( 甲基汞) 1 0 】，甲基汞的神经毒性较金属汞大许多倍。 目前，大量人群流行病学研究提示，在尚未出现汞中毒临床表现时，神经行为的 变化是低浓度汞接触最突出的健康损害之一，表现为机体的神经运动速度、记忆 力、手工敏捷度、注意力等方面会发生下斛1 卜1 3 】。但神经行为测试这一指标受 个体主观因素影响较大，不同的测试环境，不同的主试人会造成测试结果的很大 差异，而且该指标由于受被测试对象的文化程度、理解能力以及计算机操作的熟 练程度的影响，难以进行量化。因此，将神经行为改变作为早期健康损害诊断依 据还有待于其测试方法的进一步改进。 肾脏是体内汞蓄积和解毒排泄的重要器官，以不同方式进入体内的各种形态 的汞都会在肾脏组织内大量蓄积，引起不同程度的肾损伤，其中以金属汞和无机 汞的肾脏损害较为显著，动物试验表明，体内金属汞和无机汞约有5 0 - - 9 0 蓄 积在肾脏【1 4 1 。有机汞也会对肾脏产生危害，但其损害程度低于无机汞和汞化合 物。z a l u p s 1 5 】等研究发现，肾脏吸收和蓄积汞非常迅速，低剂量( 0 5 比m o l k g ) 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 接触无机汞的小鼠几小时后就可以发现有5 0 的汞已在肾脏内蓄积。反映肾脏 功能的指标有很多，目f j 常用的有血中肌酐( s c r ) 、血清尿素氮( b u n ) 、内生肌 酐清除率( c c r ) 、al 一微球蛋白( ql m g ) 、视黄醇结合蛋白( r b p ) 和尿n 一乙酰一b d 一氨基葡萄糖苷酶( n a g 酶) 等。其中，s c r 、b u n 和c c r 是反映 肾小球滤过功能的指标，肾小球受损可导致血中s c r 、b u n 含量上升，c c r 下降。 当肾小管受损时，尿中ql m g 、r b p 含量上升，n a g 酶活性增强1 1 6 】。 汞的肾毒性研究，既往多集中在高浓度汞接触引发的急性( 亚急性) 中毒层 面上，而实际上人们在自然环境和生产环境中所接触的汞一般达不到急性中毒剂 量，暴露的长期性、反复性是人群汞接触的主要特点。大量的环境流行病学研究 表明，长期生活在受到污染的环境中，可使一些有毒的污染物在体内蓄积，发生 中毒的病例只是整个暴露人群的冰山一角，而更多的人虽未发生中毒，但部分健 康指标与对照人群相比已产生显著变化。然而，目前慢性汞接触所导致的肾脏损 害，特别是中毒症状发生以前肾功能指标出现的亚临床改变的研究尚存在一些争 议，如在汞致肾损伤中肾小球和肾小管的损害表现在既往流行病调查中结果尚不 一致【1 7 1 钔，同时研究方法多以急性、亚急性动物实验为主，人群流行病学研究 相对较少。因此从人群流行病学角度，开展慢性汞暴露对肾脏功能影响的研究是 十分必要的。 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 一、研究目的 本课题选择x x 温度计厂职工作为研究对象，通过健康体检、问卷调查、尿 汞检测、发汞检测和肾功能指标检测等方法，研究慢性空气汞暴露对人群肾脏功 能的影响，为保护汞接触人群健康提供科学依据。 二、研究内容与方法 2 1 技术路线 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 2 2 研究现场的选择： 选择原则： 1 ) 车间内主要为汞污染，职工生产过程中毒物接触种类较单一； 2 ) 有定期的车间空气监测历史资料和职工体检资料； 3 ) 部分车间空气汞含量超出国家标准( o 0 2 m g m 3 ) ； 4 ) 根据既往体检资料，部分车间工人尿汞增高( 高于职业性汞中毒诊断标准尿 汞正常参考值o 0 1 m g l ) 。 x x 温度计厂建厂于1 9 5 0 - - - 1 9 6 0 年，有近半个世纪的生产历史，水银体温 计是该厂主要产品，其生产原料主要为玻璃和汞。该厂在生产过程中除汞以外， 其他毒物接触较少。在生产过程中该温度计厂以手工操作为主，生产工艺过程主 要为：量眼一拉颈一接泡一封泡一注汞一涨真空一缩喉一修紧松一倒空气一复溢 一封头一定点一印刷一包装，其中汞暴露工种主要包括涨真空、缩喉、修松紧， 检修、检验、渗印、洗汞、退应力，封头，复溢、定点、量眼等。该厂各工种生 产车间空气汞监测资料和职工体检资料较齐全。据监测资料显示，该厂部分车间 历年空气汞检测均超标。该厂职工中，有5 0 常年工作在空气汞超标的车间，无 口罩等防护措施，历次职业体检中，均发现有部分职工尿汞超过o o l m g l 。因 此根据上述的选择原则和x x 温度计厂的实际情况，本研究选择该厂作为研究现 场。 2 3 研究对象的选择： 2 3 1 选择原则： 1 ) 对照组未接触过高汞作业； 2 ) 暴露组在高汞环境中工作至少1 年以上； 3 ) 无肾脏疾病及其他泌尿系统疾病史； 4 ) 无肝脏病史； 5 ) 无高血压、心脏病、糖尿病等疾病史； 6 ) 无驱汞药物服用史，无抗生素、镇痛药等药物长期服用史。 2 3 2 研究对象的分组g 根据该厂1 9 9 6 2 0 0 6 年生产车间空气汞监测数据，以车间空气汞卫生标准 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 ( g b l 6 2 2 7 - - 1 9 9 6 ) 中规定的最高允许浓度o 0 2m g m 3 为依据，划分为对照组 ( 空气汞历次监测结果均小于0 0 2m e d m 3 ) 和暴露组( 空气汞历次监测结果均 大于0 0 2r a g m 3 ) 。 对照组：接内管、拉颈、接泡、综合、包装、刮喇叭、办公室。 暴露组：定点、封头、检验、检修、量眼、缩喉、渗印、注汞、洗汞、退 应力。 2 3 3 样本量的估计 应用公式n = 2 2 计算样本量 采用单侧检验，a - - o 0 5 ，u a = 1 6 4 5 ；户= 0 1 0 ，坳2 1 2 8 2 s c r ：本课题取s - - 8 ，d = 1 8 经计算得出每组样本量为n = 6 9 人 b u n ：本课题取s - - 4 7 ，d = 1 0 3 经计算得出每组样本量为n = 8 3 人 c c r ：本课题取s = 9 ，d = 1 7 2 9 经计算得出每组样本量为n = 6 4 人 ql m g ：本课题取s - - 1 3 9 ，d - - 2 6 7 经计算得出每组样本量为n = 6 4 人 r b p ：本课题取s - - 0 0 9 ，d - - 0 1 9 经计算得出每组样本量为n = 7 7 人 n a g ：本课题取s - - 4 6 5 ，d - - 7 1 3 经计算得出每组样本量为n = 4 1 人 按公式分别计算每个效应指标所需要的样本量，选择样本量最大者作为本研 究所需要的样本量。经计算，本研究每组研究对象样本数约为8 3 人。 本课题采用整群抽样的方法，在研究现场内所有符合条件的职工均作为本次 1 2 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 调查的研究对象，共计1 8 6 人，其中对照组8 5 人，暴露组1 0 1 人。 2 4 流行病学调查 2 4 1 调查问卷内容 调查问卷自行设计，主要分为以下几个部分： 一般情况：包括年龄、性别、文化程度、家庭收入、吸烟情况、饮酒情况等； 污染物接触情况：包括职业接触史、中毒史等； 健康状况：包括疾病史、家族史、药物史、自觉症状等； 2 4 2 调查员培训 选择具有流行病学调查经验、责任心强的地方工作人员作为调查员。进行统 一讲解，统一调查方法和调查标准，说明问卷的填写方法和注意事项，使调查员 明白调查目的，熟悉问卷内容，掌握一定的调查技巧。 2 4 3 调查方式 由经过严格培训的调查员对所选的研究对象进行面对面询问调查。问卷由 本人回答，调查前由回答者签署知情同意书。调查员据实填写，调查完毕后立即 检查，确认无错项、漏项后交督导员审查。 2 5 体格检查 体检项目：身高、体重；血压：肝、脾触诊；肾区扣诊；神经系统检查；口腔 炎症检查，等。 按照内科诊断学和相关标准，由经验丰富的临床医生检查。 2 6 生物样品采集和检测 2 6 1 生物样品的采集与保存 发样：采集研究对象耳后贴头皮1 厘米处发样1 2m g ，信封保存； 血样：采集研究对象空腹静脉血2 m l ，现场离心( 1 5 0 0 转1 0 分钟) ，取血清l m l ， 3 0 分钟内送实验室检测； 尿样：采集研究对象即时尿5 0 r a l ，离心，取上清液，- - 2 0 保存。 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 2 6 2 检测指标 发样：发总汞含量 血样：检测血清肌酐( s c r ) 和血尿素氮( b u n ) ，并根据检测结果计算内生肌酐 清除率( c c r ) 尿样：尿汞、尿肌酐、尿ql 一微球蛋白( q1 一m g ) 、尿视黄醇结合蛋白( r b p ) 、 尿n 一乙酰一1 3 一d 一氨基葡萄糖苷酶( n a g ) 2 6 3 检测方法： 1 ) 发汞含量测定： 主要仪器 a w c g - - 2 0 2 微分测汞仪 b 1 0 m l 汞发生管 c 1 0 0 m l 三角瓶 d 漏斗 e s x m l - 1 5 4 a 型数显电热板 主要试剂 a 硝酸，优级纯。 b 硫酸，优级纯。 c 高氯酸，优级纯。 吉林市北光分析仪器制造厂 北京中兴伟业仪器有限公司 d 5 高锰酸钾溶液：称取5 9 优级纯高锰酸钾溶于1 0 0 m l 去离子水中。 e 1 0 盐酸羟胺溶液：称取分析纯盐酸羟胺1 0 9 溶于去离子水中，并稀释至 1 0 0 m l 。 f 3 0 。6 0 氯化亚锡溶液：取3 0 9 氯化亚锡( s n c l 2 2 h 2 0 ) ，加1 0 m l 浓盐酸，溶解后 用去离子水稀释至1 0 0 m l 。 g 汞标准液：购自国家标物中心( g b w0 8 6 1 7 ) ，浓度为1 0 0 u g m l 。临用前做 1 ：1 0 0 0 稀释，精确配成0 1 u g m l 的汞标准使用液。 实验步骤 a 发样准备：将发样浸入中性洗液( 5 的金鱼洗涤灵) ，在超声清洗机中洗涤 2 0 - - - ，3 0 分钟，取出后，先用自来水清洗2 3 遍，再用去离子水清洗至清洁无泡 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 沫。自然风干后，用手术剪将发样剪成2 - - - 3 m m 的片断备用。 b 发样称量：用万分之一电子天平称取发样约5 0 m g ( 记录准确称重量) 置于 1 0 0 m l 锥形瓶。 c 样品消化：在锥形瓶中加入硝酸5 m l ，再放入一些小玻璃珠，放在电热板上， 温度控制在1 3 0 以下，加热5 r a i n 。然后加硫酸5 m l 继续加热1 0 m i n ，再加高氯 酸l m l ，温度控制在2 5 0 左右，加热约5 m i n ( 有白色烟雾出现) 取下。冷却后 加入少量去离子水，滴加5 高锰酸钾呈紫红色，将此溶液洗入2 5 m l 具塞比色 管备用。( 每次消化要同时加空白样和标准品。) d 样品测定：往消化液中加入1 0 盐酸羟胺0 2 5 m l ，使高锰酸钾的紫色消失。 取出1 0 m l 溶液加入3 0 氯化亚锡l m l ，振荡，立刻测定，读取测得值，从标准 曲线上查出汞含量。 e 标准曲线制作：取0 1 0l ag m l 汞标准使用液0 ，0 1 ，0 3 ，1 0 ，1 2 ，1 5 ，2 0 m l 。 分别置于1 0 m l 汞发生管中，加入少量去离子水，然后加入l m l 硫酸，1 滴高锰 酸钾，用去离子水稀释到1 0 m l ，加入1 0 盐酸羟胺0 2 5 m l ，使高锰酸钾的紫色 消失，加入l m l3 0 氯化亚锡，进行测定。以测得值为纵坐标，汞含量为横坐标， 制备标准曲线。 ： f 计算： 发总汞以曲= ( 查出的汞含量似曲2 5 ( m 1 ) ) ( 样品重量1 0 ( m 1 ) ) 2 ) 尿汞检测方法：冷原子吸收光谱测定方法之酸性氯化亚锡还原法 3 ) 累计暴露量( c e i ) 的计算： c e i 作为暴露指标可反映工人汞的历史接触水平，它是以该工人历年从事的 各工种汞接触时间( 年数) ，与相应年份空气汞浓度乘积的总和表示。即： 累计暴露量= ( 某工种接触时间x 相应的空气汞浓度算术均数) 注：某工种接触时间为工作时间，即：每天工作8 小时，扣除双休日，每年工作2 6 1 天。含 汞空气吸入量按每天工作8 小时吸入5 n 1 3 计算。 ( 公式来源：江俊康、薛寿征、傅慰祖、江汝勉等人在进行汞作业接触效应、尿汞与接触的 关系及其在汞中毒诊断上的使用价值、职业性接触汞蒸气的剂量反应关系等研究中均采 用过本公式 2 0 - m l 。) 慢性汞暴露对人群肾脏功能影响的研究 4 ) 尿肌酐检测方法：苦味酸两点法 5 ) 血肌酐( s e r ) 检测方法：碱性苦味酸法 6 ) 血尿素氮( b u n ) 检测方法：尿酸酶