保健食品中75种非法添加化学药物的检测.doc

附件1保健食品中75种非法添加化学药物的检测BJS 2017101 范围本方法规定了保健食品中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸的液相色谱-串联质谱检测方法。本方法适用于片剂、口服液、硬胶囊和软胶囊保健食品中的利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸共75种非法添加物质的检测，同样适用于片剂、口服液、硬胶囊、软胶囊类声称具有保健功效的食品中上述75种物质的检测。2 原理试样经甲醇提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测。3 试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH)：色谱纯。3.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.3 甲酸（CH2O2）：质谱级。3.1.4 乙酸铵（CH3COONH4）：质谱级。3.1.5 0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵水溶液：精密量取甲酸（3.1.3）1 mL，称取乙酸铵（3.1.4）0.771 g，用水溶解并定容至1000 mL。3.2 标准品利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式和相对分子量见附录A表A.1，纯度均98%。3.3 标准溶液配制3.3.1 标准储备液：分别精密称取利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 01 g）于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，得到浓度为1 mg/mL的储备液，-20 避光贮存，有效期3个月。3.3.2 混合标准溶液：分别精密量取储备液（3.3.1）适量，用甲醇（3.1.1）稀释成混合标准中间液，其中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、尼莫地平、辛伐他丁、氨氯地平、洛伐他丁、美伐他丁、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、褪黑素、芬氟拉明、可乐定、卡托普利、苯乙双胍、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸和二甲双胍浓度为10 g/mL，洛伐他汀羟酸钠盐、呋塞米、氢氯噻嗪、司可巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、巴比妥和烟酸浓度为100 g/mL。再用初始流动相（见表1）稀释成混合标准使用液，上述物质浓度分别为100 ng/mL和1 g/mL，临用时配制。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2 分析天平：感量分别为0.001 g、0.000 1 g和0.000 01 g。4.3 离心机：转速4 000 r/min。4.4 超声波清洗器。5 分析步骤5.1 试样制备精密称取样品1 g（精确至0.000 1 g），置于50 mL容量瓶中，加甲醇（3.1.1）适量，超声提取15 min，放冷至室温，用甲醇（3.1.1）定容（若样品中含有油脂，则将样品提取液在-20 条件下放置2448 h，时间可视样品是否澄清而定），5 000 r/min离心5 min，上清液经微孔滤膜过滤(0.22 m，有机相)，取续滤液作为待测液。5.2 仪器参考条件5.2.1 色谱条件a）色谱柱：C18柱，1.8 m，2.1100 mm，或性能相当者。b）流动相：A为0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵（3.1.5），B为乙腈（3.1.2），参考梯度洗脱程序见表1。c）流速：0.3 mL/min。d）柱温：40 。e）进样量：5 L。表1 参考梯度洗脱程序时间/minA：0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵/%B：乙腈/%09010290102.16535465354.160406.5604072080920809.110905.2.2 质谱条件a）电离方式：电喷雾正负离子模式。b）检测方式：多反应检测（MRM）。c）雾化气：N2。d）干燥气流速：8 L/min。e）喷雾电压：500 V。f）气流温度：350 。g）毛细管电压：3500 V（+）3000 V（-）。h）鞘气流速：11 L/min。i）鞘气温度：250 。j）定性离子对、定量离子、碎裂电压、碰撞能量和离子化模式见表2。表2 非法添加化学药物的主要质谱参数序号化合物母离子（m/z）子离子（m/z）碎裂电压（V）碰撞能量（eV）离子化模式1利血平609.2448.113528+609.2397.1*13524+2格列喹酮528403*1357+52838613519+3羟基豪莫西地那非505487*13520+50537713520+4硫代艾地那非50544813520+505393*13520+5格列苯脲4953691356+495169*13518+6格列美脲4913521357+491126*13523+7豪莫西地那非48931113520+489113*13520+8伐地那非48929913520+489151*13520+9西地那非47537713520+475311*13520+10红地那非46742013520+467396*13520+11伪伐地那非460432*13520+46037713520+12那莫西地那非46037713520+460329*13520+13瑞格列奈45316213520+45386*13520+14那红地那非45340613516+453353*13524+15格列吡嗪4463471357+446321*1357+16洛伐他丁羟酸钠盐445343*13510+44517313530+17尼莫地平419343*13510+41930113520+18辛伐他汀41928513520+419199*13520+19氨氯地平40929413510+409238*13510+20洛伐他汀40528513520+405199*13520+21美伐他汀391185*13520+39115913520+22氨基他达拉非391269*13520+39126213520+23他达拉非39030213520+390268*13520+24佐匹克隆389.2245*13510+389.221713520+25尼索地平389239*13510+38919513520+26脱羟基洛伐他汀387199*13510+38717313510+27哌唑嗪384.1247.1*13528+384.113813528+28非洛地平383.935213510+383.9338*13510+29格列波脲367170*13510+36715213520+30尼群地平36132913520+361315*13510+31罗格列酮358135*13523+35810713523+32吡咯列酮357134*13523+35711913523+33罗通定356.4192*13530+356.416513520+34醋氯芬酸35525113510+355215.8*13520+35硝苯地平347315*1352+347245.91352+36三唑仑343.1314.913528+343.1308*13524+37青藤碱330.1180.913530+330.158*13540+38呋塞米329205*13530-32912613530-39咪达唑仑326.1291*13524+326.1243.913528+40格列齐特324127*13515+32411013519+41劳拉西泮321.1302.913512+321.1275*13520+42酚酞319225*13530+31910513530+43二氧丙嗪31716713530+31786*13520+44氯硝西泮316240.913530+316213.8*13540+45阿普唑仑309.1281*13524+309.1274.113524+46扎来普隆306.126413520+306.1236*13520+47氯氮卓300.1283*13512+300.124113512+48氢氯噻嗪296268.913520-296205*13520-49艾司唑仑295.1267*13524+295.119213520+50奥沙西泮287241*13520+287162.913530+51地西泮285.1257.113520+285.1222.1*13528+52硝西泮282.125413520+282.1236*13524+53西布曲明28013913530+280125*13530+54文拉法辛278.2120.913520+278.257.9*13510+55氯苯那敏275.1230.1*13510+275.1166.913535+56氯美扎酮274154*13520+27410313520+57甲苯磺丁脲27115513512+27174*13512+58阿替洛尔267.119013516+267.1145*13524+59N-单去甲基西布曲明26613913530+266125*13530+60N,N-双去甲基西布曲明25213913530+252125*13530+61沙丁胺醇24016613510+240147.9*13520+62司可巴比妥237194*1358-2378513520-63褪黑素233.1174.2*13510+233.115913520+64芬氟拉明232159*13530+23210913530+65苯巴比妥231188*1354-2318513520-66可乐定230212.8*13522+230159.613538+67异戊巴比妥225.1182*1354-225.18513520-68卡托普利2181721356+218116*13510+69苯乙双胍20610513523+20660*13515+70巴比妥183.1140.1*1354-183.18513520-71麻黄碱16614813530+166133*13530+72丁二胍15860*13510+1585713520+73氨甲环酸15895*13510+15867.113510+74二甲双胍1307113523+13060*13511+75烟酸1247813550+12452*13550+注：标*为定量离子5.3 定性判定按照上述条件测定待测液和混合标准使用液，如果试样待测液中色谱峰的保留时间与混合标准使用液中某一组分保留时间一致（变化范围在2.5%之内），试样待测液中色谱峰定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合标准使用液相对丰度一致，相对丰度（k）偏差不超过表3规定的范围，则可判定为试样中存在该成分。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（%）k50%50%k20%20%k10%k10%允许的最大偏差（%） 20 25 30 506 检出限当称样量为1 g时，75种非法添加化学药物的检出限见表4。表4 非法添加化学药物的检出限编号名称口服液检出限（g/g)硬胶囊检出限（g/g)软胶囊检出限（g/g)片剂检出限(g/g)1利血平0.0240.220.0690.222格列喹酮0.0250.370.110.373羟基豪莫西地那非0.110.880.270.884硫代艾地那非0.0540.810.250.815格列苯脲0.0550.230.240.246格列美脲0.0230.330.100.337豪莫西地那非0.0360.530.160.538伐地那非0.0170.250.0780.259红地那非0.230.830.260.8310西地那非0.0250.380.120.3811伪伐地那非0.0760.260.080.2612那莫西地那非0.0351.80.261.813瑞格列奈0.0250.370.110.3714那红地那非0.060.880.270.8815格列吡嗪0.0250.380.120.3816洛伐他汀羟酸钠盐1.20.644.54.517尼莫地平0.0240.360.110.3618辛伐他汀0.160.360.110.3619氨氯地平0.0240.360.110.3620洛伐他汀0.0430.350.340.3521美伐他汀0.0330.490.420.4922氨基他达拉非0.0410.610.190.6123他达拉非0.030.450.140.4524佐匹克隆0.0180.270.0840.2725尼索地平0.0260.390.300.3926脱羟基洛伐他汀0.100.640.170.6427哌唑嗪0.0240.360.110.3628非洛地平0.120.480.150.4829格列波脲0.0490.640.170.6430尼群地平0.490.320.260.4931罗格列酮0.0280.410.130.4132吡咯列酮0.0240.360.110.3633罗通定0.0240.320.0920.3234醋氯芬酸0.0250.350.110.3535硝苯地平0.0240.340.100.3436三唑仑0.0240.320.0840.3237青藤碱0.0350.330.100.3338呋塞米9.47.02.79.439咪达唑仑0.0270.390.120.3940格列齐特0.0230.340.10.3441劳拉西泮0.0430.350.110.3542酚酞0.0270.400.120.4043二氧丙嗪0.0250.370.120.3744氯硝西泮0.0350.380.120.3845阿普唑仑0.0240.340.110.3446扎来普隆0.0260.380.120.3847氯氮卓0.0910.350.160.3548氢氯噻嗪3.73.52.13.749艾司唑仑0.0270.40.120.4050奥沙西泮0.0240.360.110.3651地西泮0.0270.40.120.4052硝西泮0.0240.360.110.3653西布曲明0.0230.350.110.3554文拉法辛0.0250.360.110.3655氯苯那敏0.0240.350.110.3556氯美扎酮0.390.860.260.8657甲苯磺丁脲0.0250.370.110.3758阿替洛尔0.0580.350.110.3559N-单去甲基西布曲明0.0660.980.300.9860N,N-双去甲基西布曲明0.0380.350.110.3561沙丁胺醇0.060.880.270.8862司可巴比妥7.15.12.97.163褪黑素0.0280.420.130.4264芬氟拉明0.060.900.280.9065苯巴比妥5.56.7151566可乐定0.130.350.110.3567异戊巴比妥2.01.53.93.968卡托普利0.0960.320.0840.3269苯乙双胍0.0570.850.260.8570巴比妥399.0123971麻黄碱0.573.20.843.272丁二胍0.0490.640.170.6473氨甲环酸0.0460.350.110.3574二甲双胍0.0490.640.170.6475烟酸5.05.82.85.8附录A75种非法添加化学药物标准品信息表A.1 75种非法添加化学药物标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式和相对分子量序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量1利血平Reserpine50-55-5C33H40N2O9608.682格列喹酮Gliquidone33342-05-1C27H33N3O6S527.213羟基豪莫西地那非Hydroxyhomosildenafil139755-85-4C23H32N6O5S504.604硫代艾地那非Thioaildenafil856190-47-1C23H32N6O3S2504.675格列苯脲Glibenclamide10238-21-8C23H28ClN3O5S494.006格列美脲Glimepiride93479-97-1C24H34N4O5S490.227豪莫西地那非Homosildenafil642928-07-2C23H32N6O4S488.228伐地那非Vardenafil224785-90-4C23H32N6O4S488.229红地那非Hongdenafil831217-01-7C25H34N6O3466.5810西地那非Sildenafil139755-83-2C22H30N6O4S474.5811伪伐地那非Pseudovardenafil 224788-34-5C22H29N5O4S459.5612那莫西地那非Norneosildenafil371959-09-0C22H29N5O4S459.5613瑞格列奈Repaglinide135062-02-1C27H36N2O4452.2714那红地那非Noracetildenafil 949091-38-7C24H32N6O3452.5615格列吡嗪Glipizide29094-61-9C21H27N5O4S445.5316洛伐他汀羟酸钠盐Lovastatin Hydroxy Acid, Sodium Salt75225-50-2C24H37NaO6444.5417尼莫地平Nimodipine66085-59-4C21H26N2O7418.4418辛伐他汀Simvastatin79902-63-9C25H38O5418.5719氨氯地平Amlodipine88150-42-9C20H25ClN2O5408.8820洛伐他汀Lovastatin75330-75-5C24H36O5404.5421美伐他汀Mevastatin73573-88-3C23H34O5390.5122氨基他达拉非Aminotadalafil385769-84-6C21H18N4O4390.3923他达拉非Tadalafil171596-29-5C22H19N3O4389.4024佐匹克隆Zopiclone43200-80-2C17H17ClN6O3388.1025尼索地平Nisoldipine63675-72-9C20H24N2O6388.4126脱羟基洛伐他丁Dehydro Lovastatin109273-98-5C24H34O4386.5327哌唑嗪Prazosin19216-56-9 C19H21N5O4383.4028非洛地平Felodipine72509-76-3C18H19Cl2NO4383.0729格列波脲Glibornuride26944-48-9C18H26N2O4S366.4830尼群地平Nitrendipine39562-70-4C18H20N2O6360.3631罗格列酮Rosiglitazone122320-73-4C18H19N3O3S357.1132吡咯列酮Pioglitazone111025-46-8 C19H20N2O3S356.4433罗通定Tetrahydropalmatine2934-97-6 C21H25NO4355.4334醋氯芬酸Aceclofenac89796-99-6C16H13Cl2NO4354.1835硝苯地平Nifedipine21829-25-4C17H18N2O6346.3436三唑仑Triazolam28911-01-5C17H12Cl2N4342.0437青藤碱Sinomenine115-53-7C19H23NO4329.1638呋塞米Furosemide54-31-9C12H11ClN2O5S330.0139咪达唑仑Midazolam59467-70-8C18H13ClFN3325.7740格列齐特Gliclazide21187-98-4C15H21N3O3S323.1341劳拉西泮Lorazepam846-49-1C15H10Cl2N2O2320.0142酚酞Phenolphthalein77-09-8C20H14O4318.3343二氧丙嗪Dioxopromethazine13754-56-8C17H20N2O2S316.4244氯硝西泮Clonazepam1622-61-3C15H10ClN3O3315.0445阿普唑仑Alprazolam28981-97-7C17H13ClN4308.0846扎来普隆Zaleplon151319-34-5C17H15N5O305.1347氯氮卓Chlordiazepoxide58-25-3C16H14ClN3O299.0848氢氯噻嗪Hydrochlorothiazide58-93-5C7H8ClN3O4S2297.7449艾司唑仑Estazolam29975-16-4C16H11ClN4294.0650奥沙西泮Oxazepam604-75-1C15H11ClN2O2286.0551地西泮Diazepam439-14-5C16H13ClN2O284.0752硝西泮Nitrazepam146-22-5C15H11N3O3281.0753西布曲明Sibutramine106650-56-0C17H26ClN279.8554文拉法辛Venlafaxine93413-69-5C17H27NO2277.2055氯苯那敏Chlorphenamine132-22-9C12H5N7O12439.2156氯美扎酮Chlormezanone80-77-3C11H12ClNO3S273.7457甲苯磺丁脲Tolbutamide64-77-7C12H18N2O3S270.1058阿替洛尔Atenolol29122-68-7C14H22N2O3266.3459N-单去甲基西布曲明N-Monodesmethyl Sibutramine168835-59-4C16H24ClN265.8360N,N-双去甲基西布曲明N,N-Didesmethyl Sibutramine84467-54-9C15H22ClN251.1461沙丁胺醇Salbutamol18559-94-9C13H21NO3239.3162司可巴比妥Secobarbital76-73-3C12H17N2O3237.2863褪黑素Melatonine73-31-4C13H16N2O2232.1264芬氟拉明Fenfluramine458-24-2C12H16F3N231.1265苯巴比妥Phenobarbital50-06-6C12H12N2O3232.0866可乐定Clonidine4205-90-7C9H9Cl2N3229.0967异戊巴比妥Amobarbital57-43-2C11H18N2O3226.1368卡托普利Captopril62571-86-2