不同生长季节玳玳果中总黄酮的定量分析研究.doc

不同生长季节玳玳果中总黄酮的定量分析研究作者：刘永静，陈丹，邱红鑫，叶梦屏【摘要】目的研究不同生长季节玳玳果中总黄酮的含量差异，以便更有效地利用玳玳果总黄酮。方法以柚皮苷为对照品，运用紫外可见分光光度法对不同生长季节的玳玳果中总黄酮含量进行定量分析，检测波长为284nm。结果建立了玳玳果总黄酮的含量测定方法，结果表明不同生长季节的玳玳果中总黄酮含量存在一定的差异。结论所建立的含量测定方法精密度、稳定性及重复性良好，准确度高，可做为玳玳果总黄酮的定量分析方法，且玳玳青果中总黄酮的含量最高。【关键词】玳玳果；总黄酮；生长季节；定量分析Abstract：ObjectiveTostudythecontentoftotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruitsgatheredindifferentseasonsforeffectiveutilization.MethodsThecontentwastotalflavonoidsanalyzedbyultravioletspectroscopy.Thenaringinwasusedasthechemicalreferencesubstanceandthedetectionwavelengthwassetat284nm.ResultsThedeterminationmethodoftotalflavonoidswasestablished.Thecontentofthetotalflavonoidsgatheredindifferentgrowingperiodswasevidentlydifferent.ConclusionThemethodissensitive,accurate,reproducibleandcanbeusedtocontrolthequalityofthetotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits,andthequalityofgreenfruitsisthebest.Keywords：CitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits；Totalflavonoids；Growingseasons；Quantitativeanalysis玳玳又称代代CitrusaurantiumL.vardaidai，是芸香科柑桔亚属植物，为酸橙的变种，在我国福建、四川、浙江等地都有栽培。玳玳的未成熟果实称玳玳花枳壳或苏枳壳，幼果有被当作枳实入药，具有理气宽中、行滞消胀的功效，主要用于胸腹满闷胀痛、食积不化、痰饮、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等病症1,2。实验证明，玳玳果中含黄酮、生物碱、挥发油等活性成分，其中黄酮类成分以柚皮苷等为主要成分，具有良好的抗氧化活性35，而不同采收期的玳玳果中总黄酮含量不同。为了确保玳玳药材的质量稳定性和对药材的合理利用，本研究以玳玳果总黄酮中代表性成分柚皮苷为指标成分6，分析比较了不同生长季节的玳玳果中总黄酮的含量。1仪器与试药1.1仪器BP-211D型电子分析天平(德国Sartorius公司)；FA2004电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；UV-4802双光束紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)。1.2试药玳玳果(福建恒馨天然香料有限公司提供；福建中医学院中药鉴定教研室范世明高级实验师鉴定)；柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110722-200610)；甲醇等试剂均为分析纯。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称定柚皮苷对照品5.08mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.1016mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备取新鲜晾干的玳玳幼果果皮、青果果皮、橙果果皮分别低温烘干，粉碎，过20目筛，即得玳玳果皮粗粉。精密称取玳玳果皮粗粉50g，置250ml锥形瓶中，用6倍量的75%的乙醇回流提取，共回流提取3次，每次2h，合并提取液，回收乙醇使成浸膏，减压干燥呈橙色粉末，即得玳玳幼果、青果、橙果果皮醇提粉末。分别精密称取玳玳幼果、青果、橙果醇提粉末各20.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。2.3测定波长的选择分别取对照品溶液和供试品溶液，以甲醇为溶剂空白，在230400nm波长范围扫描，结果显示，对照品溶液和供试品溶液的吸收光谱图基本一致，最大吸收波长均在284nm，故测定波长选择284nm。结果见图1。1.玳玳果醇提液2.柚皮苷对照品图1吸收光谱图2.4标准曲线的制备与线性关系的考察分别精密吸取柚皮苷对照品溶液0.4，0.7，1.0，1.3，1.6，1.9，2.1ml于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，以甲醇为空白，在284nm波长处测定吸光度。以浓度(C，mg/ml)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为A=3.634101C-4.60910-3，r=0.9998，柚皮苷在0.0040640.021336mg/ml范围内呈良好的线性关系。标准曲线见表1，图2。2.5精密度实验分别精密吸取同一供试品溶液6份，按“样品含量测定”项下同法操作，计算。结果见表2。表1线性关系测定结果图2标准曲线表2精密度实验结果2.6稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，放置0，30，60，90，120，150min后，按“样品含量测定”项下同法操作，测定，计算。结果表明供试品在150min内稳定。结果见表3表3稳定性实验结果2.7重复性实验分别取同一批玳玳果(青果)醇提粉末6份制备供试品溶液，按“样品含量测定”项下同法操作，测定，计算。结果见表4。2.8回收率实验精密称取玳玳青果醇提粉末10mg(含量为0.113mg/mg)，置50ml量瓶中，按高、中、低3个浓度水平，分别精密加入柚皮苷对照品溶液(1.03mg/ml)适量，用甲醇稀释至刻度，按“样品含量测定”项下同法操作，测定，计算。结果见表5。表4重复性实验结果表5回收率实验结果2.9样品含量测定精密吸取供试品溶液1.0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。以甲醇为空白，在284nm波长处分别测定其吸光度，计算总黄酮含量(以每毫升生药中所含总黄酮量计)。结果见表6。表63批样品含量测定结果3讨论实验结果表明，不同生长季节的玳玳果中总黄酮的含量存在一定的差异：玳玳青果中的总黄酮含量>；玳玳橙果中的总黄酮含量>；玳玳幼果中的总黄酮含量。用分光光度法测定玳玳果醇提物中总黄酮的含量准确度高，重复性好，可以作为其中玳玳果总黄酮控制的方法，且为更有效地在最佳季节采摘玳玳果提取分离玳玳果总黄酮有效部位提供了实验依据。【参考文献】1冉先德.中华药海M.哈尔滨：哈尔滨出版社，1993：964.2国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草(第4卷)M.上海：上海科学技术出版社，1999：884.3陈丹，刘永静，黄剑钧，等.闽产代代果中化学成分的分离分析J.福建中医学院学报，2007，17(1)：18.4