基础免疫学与疫苗学.ppt

2019/7/20,1,基础免疫学与疫苗学,梁燕明 / 主任兽医师 美国国家禽病兽医学院院士,英特威香港有限公司技术服务部,2019/7/20,2,禽类免疫系统的功能,抵御传染性疾病因子的入侵及其所造成的危害 免疫记忆能力 在某一特定致病因子再次入侵时产生更快、更为有效的免疫应答,2019/7/20,3,改善环境、强化生物安全措施 维持合理饲养密度,保溫,濕度,通風 公母比例恰当或分饲 環境衛生 鸡苗质量 营养平衡 减少应激 控制免疫抑制性疾病 正确免疫接种,影响禽类免疫系统的作用的因素,2019/7/20,4,免疫接种的目的,通过接种疫苗，使家禽免疫系统产生主动免疫，以防制某些特定传染性疾病，保障生产效益。 通过种鸡接种疫苗，传给下一代，预防介卵及早期感染。,2019/7/20,5,主动免疫 被动免疫,母抗能保护的疾病 不是全部疾病都可靠母抗防小鸡感染 主要靠母抗的传染病为 传染性贫血病(CAA） 禽脑脊髓炎（AE） 传染性法氏囊病（IBD）* 传染性呼肠孤病（REO）* 注：* 种鸡要打油苗,主动免疫,禽类免疫系统,2019/7/20,6,禽类免疫系统,一、体液免疫 (又称浆液或全身免疫) 产生循环性抗体（IgG / IgM)和分泌性 IgA抗体 中和或协助中和特定传染性致病因子 其他 干扰素 IgA 哈氏腺/肠粘膜表层分泌 IgM RPA 抗体 IgG HI / ELISA 抗体 抗体通过血液循环全身全身免疫,2019/7/20,7,禽类免疫系统,二、细胞免疫 吞噬作用 巨细胞对传染性因子的的清除 辅助T细胞对免疫应答的调节作用 杀伤性T细胞对某些病毒感染细胞的杀灭 天然杀伤性细胞对肿瘤细胞的消灭,2019/7/20,8,产生分泌性 IgA抗体抵抗病毒从呼吸道感染，免疫 持续期短分泌性 IgA，在双体上分泌小体或 J链，可通 过价链与粘膜的半脱氨酸的SH基相互作用，可形成保 护层，并易排除潜在的有害抗原 IgA能抑制细菌，吸咐到粘膜表层，产生溶菌作用,局部免疫的重要性,禽类免疫系统,2019/7/20,9,免疫器官 细胞免疫 体液免疫 胸腺 T细胞 + + 法氏囊 B细胞 + + 二次周边淋巴系统 脾 T+B细胞 + + 哈氏腺 T细胞 + + 盲肠扁桃体 T细胞 + 肠淋巴 T细胞 + 血液 T+B细胞 + +,禽类免疫系统,2019/7/20,10,胸腺、法氏囊原细胞转化为T细胞和B细胞的时间 法氏囊 Bursa of Fabricii: 胚胎孵化12天龄到14天龄的小鸡 胸腺 Thymus: 胚胎孵化12天到28天龄的小鸡,禽类免疫系统,2019/7/20,11,疫苗接种技术,正确的疫苗接种技术 确保免疫程序获得一致、成功的保护力 确保工作人员的安全 操作不当 免疫失败，导致灾难性后果,2019/7/20,12,免疫失败的原因,疫苗储存，使用不当，或稀释过度，或疫苗本身质量低劣 , 所造成的失败 家禽已经潜伏感染疫苗所要预防的疾病 家禽遗传特性和免疫反应的差异所至的失败 母源抗体的干扰 家禽已感染免疫抑制疾病,疫苗接种无法刺激鸡群产生相应的抗体或免疫反应,2019/7/20,13,影响滚动反应(Rolling Reaction)的因素,飼養管理的漏洞 非全進全出 環境衛生 生物安全体系的不全 鸡苗质量 通風/NH3 水/垫料 空栏期,母抗 应激 保溫 濕度 大腸杆菌及霉形体多發 免疫抑制因子 免疫接种日龄 免疫接种方法,2019/7/20,14,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则 接种前对疫苗质量进行检查，若有以下情形之一者， 应弃之不用 没有标签，无头份和有效期或不清者 疫苗瓶破裂或瓶塞松动者 生物制品质量与说明书不符，如色泽、沉淀发生变化，瓶内有异物或已发霉者 过了有效期者 未按产品说明和规定进行保存的疫苗,2019/7/20,15,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则 使用前认真阅读产品说明书、注意事项和疫苗生产商所推荐的使用方法 疫苗稀释，应按说明所规定或相应稀释液进行稀释，注意水的质量要求，稀释时应反复冲洗以防疫苗损失，并小心操作，避免疫苗漏失,2019/7/20,16,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则 器械消毒 疫苗接种用注射器、针头、镊子、滴管、稀释用的瓶子要事先清洗，并用沸水煮1530min消毒，切不可用消毒药消毒 一个注射器和针头注射一定数量禽只后，一定要换用新的，如果有疫情发生，宜一只禽只用一个针头,2019/7/20,17,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则 禽群的健康状况 有病或不健康禽群不宜接种 在恶劣气候条件下也不应该接种 免疫接种前后，加强饲养管理,2019/7/20,18,应按规定妥当保存疫苗,X,2019/7/20,19,疫苗的类型,活苗 可用多种方式接种 灭活苗 只能通过注射途径接种,2019/7/20,20,免疫接种方法,活苗 滴鼻(IN) 点眼(IO) 翅种(WW) 皮下(SC) 肌注(IM) 喷雾(Spray) 饮水(DW) 蛋内(In-ovo),灭活苗,皮下(SC) 肌注(IM),2019/7/20,21,主要活苗及接种方式,2019/7/20,22,点眼/滴鼻免疫,2019/7/20,23,点眼/滴鼻免疫,确保每只鸡都能得到准确的疫苗量 达到快速免疫 适用于任何年龄的鸡只 操作简单,但增加劳动强度,重要性及优点,2019/7/20,24,重要性及优点,-局部免疫：上皮粘膜免疫系统 建立第一道免疫屏障 -基础免疫 -针对性较强,点眼/滴鼻免疫,2019/7/20,25,缺点：,免疫持久性差 个体差异大 操作要求准确 劳动强度高,点眼/滴鼻免疫,2019/7/20,26,接种方法 以无菌稀释液溶解所需的疫苗量 （通常1000份疫苗使用30毫升稀释液） 通常在稀释液中加有着色剂，并附带一种专用滴嘴 使用標准滴嘴將1滴溶解好的疫苗溶液,自3厘米的高度滴入鸡的眼睛或鼻孔内 免疫时滴嘴不得接触眼球，以免损伤眼睛 滴鼻免疫时，用指头封住一侧鼻孔，以确保疫苗能更好地从另一侧鼻孔吸入,点眼/滴鼻免疫,2019/7/20,27,点眼/滴鼻免疫,接种过程中，要始终保持滴嘴绝对垂直，以确保每滴疫苗的接种剂量保持恒定 (注意疫苗瓶角度) 必须确保每只鸡都接种到正确的疫苗量 检查口中着色剂 注意接种过程中疫苗溫度,接种方法,2019/7/20,28,点眼/滴鼻免疫,常犯毛病,责任心不强 疫苗保存不当 操作不当 (漏免、剂量不准) (伤眼、过量、甩掉),要培训有很强的责任心 正确保存、使用 加强操作前培训 监督和考核 最重要是保证免疫质量 免疫前后检测抗体水平变化,如何避免以上毛病,2019/7/20,29,饮水免疫,2019/7/20,30,确保每只鸡都能得到疫苗 达到快速免疫 适用于任何年龄的鸡只 操作简便,重要性及优点,飲 水 免 疫,2019/7/20,31,飲 水 免 疫,缺点：,免疫持久性差 缺呼吸道局部免疫 个体差异大 每只鸡得到的疫苗量? 容易造成Rolling reaction IB/ILT反應大,2019/7/20,32,饮水器清洗,将饮水器清洗干净 48小时前禁用一切消毒剂和洗洁剂 饮水器具应放在阴凉处，避开强光线和热 在夏天，应选择清早进行,飲 水 免 疫,接种方法,2019/7/20,33,免疫前视天气情况停止饮水2小时，免疫后经1/2小时再正常供水,飲 水 免 疫,接种方法,停水,为确保免疫效果，应在2小时内让所有小鸡饮下足够的疫苗剂量,2019/7/20,34,必须保证饮用水的质量， 应使用清洁、不含氯和铁的自来水或雨水。,飲 水 免 疫,水的质量,接种方法,井水可能含有重金属，有机物, 地面流入的细菌或汚物，,2019/7/20,35,-3个一条龙企业 -每个企业采井水样100个农场 -选择最好的25个和最后的25个农场 -比较FCR/体重/成活率%/屠体废弃率% 水样分析 -阳离子: NH3/Ca/Mg/Na/K/Fe/Zn/Mn/Cu -阴离子: P/N/S/HCO3/CO4/Cl/NO3 -其他：硬度/溶氧/电导/ pH,美国阿肯色洲调查,2019/7/20,36,Hi Lo 差异 料肉比FCR 2.00 2.06 0.06 体重(g) 1859 1791 68 成活率% 96.5 95.7 0.8 屠体废弃率% 0.77 1.12 0.35 硝酸盐 3.8 7.0 3.2,美国阿肯色洲调查,2019/7/20,37,项目 体重 料肉比 成活率% 屠体废弃率% 硬度 0.11 -0.02 -0.01 0.09 钙 0.10 -0.15 -0.13 0.18 镁 0.18 +0.15 0.03 0.10 钾 -0.04 -0.01 -0.12 -0.05 硝酸盐 -0.14 -0.03 -0.08 0.13 溶氧 0.18 +0.10 0.10 0.11 碳酸氢盐 0.11 +0.03 0.02 0.02,美国阿肯色洲调查,2019/7/20,38,平均标准 最大接受标准 总菌数 0/ml 100/ml 大肠杆菌 0/ml 50/ml 硝酸盐 10mg/l 25mg/l 亚硝酸盐 0.4mg/l 4mg/l pH 6.8-7.5 - 硬度 60-180 - Ca 60mg/l - Cl 14mg/l 250mg/l Cu 0.002mg/l 0.6mg/l Fe 0.2mg/l 0.3mg/l Pb 0.02mg/l Mg 14mg/l 125mg/l Na 32mg/l - S 125mg/l 250m/l Zn 1.50mg/l,Ref: Poultry International June 1989,水的质量,2019/7/20,39,重型鸡或天气炎热时,饮水量应取上限,溶解疫苗所需的水量取决于鸡的日龄。大致的标准是：,飲 水 免 疫,水量,接种方法,2019/7/20,40,飲 水 免 疫,准备足够的饮水槽和饮水器,最好选择塑料类饮水器具， 不能通过乳头状饮水器供水的饮水系统进行活苗的免疫,钟式饮水器： 1个/100只鸡 乳头饮水器 ： 1个/15只鸡 杯式饮水器 ： 1个/30只鸡 6号饮水槽： 1个/150只鸡 8号饮水槽： 1个/200只鸡,肉鸡至少提供:,2019/7/20,41,飲 水 免 疫,疫苗的準备,加于水脱脂牛奶或脱脂奶粉，可提高病毒疫苗的稳定性 在水里开启疫苗瓶，以清洁的棒进行搅拌，将疫苗 和水充分混匀,2019/7/20,42,飲 水 免 疫,常犯毛病,责任心不强 疫苗保存不当 操作不当 饮水器清洗不干净 水的质量 停水不当 漏免、剂量不准,如何避免以上毛病,要培训有很强的责任心 正确保存、使用 加强操作前培训 监督和考核 最重要是保证免疫质量 免疫前后检测抗体水平变化,2019/7/20,43,皮下注射 肌肉注射,2019/7/20,44,确保每只鸡都能得到准确的疫苗量 达到快速免疫 适用于任何年龄的鸡只,重要性及优点,皮下/肌肉注射,2019/7/20,45,缺点：,应激大 操作要求准确 劳动强度高 缺呼吸道局部免疫 局部反应 产蛋鸡的影响,皮下/肌肉注射,2019/7/20,46,注射器,注意事项 接种过程中应定时调校连续注射器(calibration)，杜绝连续注射器滴漏现象/气泡出现 注射器具严格消毒，剔除钝卷针头，一般用18G(国际单位)针头，针头长短视接种鸡群个体大小而异 针头注射一定数量(100-500只)禽只后，一定要换用新的， 如果有疫情发生，宜一只禽只用一个针头 注射器的维修保养,定期更换易损配件,皮下/肌肉注射,2019/7/20,47,疫苗,注意事项 接种前将灭活苗升温至25300C，并充分摇匀 接种过程中应不时摇动疫苗 疫苗开启后要在24小时内用完 灭活苗剂量宁多勿少 疫苗分装不可打开瓶盖直接倾倒，以免污染 (可用连续注射器抽注),皮下/肌肉注射,2019/7/20,48,多采用颈部皮下注射法 本方法适用于活苗/灭活苗 屠体废弃率少只处理颈部,较经济,皮下注射,2019/7/20,49,皮下注射,接种方法,接种时，用手轻轻提起鸡的颈部皮肤，将针头从 颈背侧中段以下，接种方向宜朝远离头部的方向 刺入，使疫苗注入皮下，皮肤与肌肉之间 注意勿伤及肌肉，血管，神经和骨头,2019/7/20,50,肌肉注射,腿肌注射法 适用于笼养的商品蛋鸡群 抓住鸡脚，朝身体方向刺入外侧腿肌 应小心避免刺伤腿部血管、神经和骨头,2019/7/20,51,肌肉注射,胸肌注射法 如果注射疫苗对胸肌的影响不是至关重要，而注射剂量又要求十分准确时，可采用此法 在龙骨外侧胸部1/3处，以18G针头成300倾斜，朝背部方向刺入胸肌 切忌垂直刺入胸肌，以免刺穿胸腔,2019/7/20,52,肌肉注射,胸肌注射法 同时应避免刺得过深伤及骨膜 进针太前易入嗉囊 太靠后易伤及内脏 在翅膀靠近肩部无毛处的翼下内侧肌肉注射 比较确实,2019/7/20,53,肌肉注射,尾部肌肉注射 由于肌肉加工的需要，或者由于多次接种的原因，限制使用颈部、胸部、腿部和翅膀注射的方法，可采用尾部肌肉注射 将针头朝着头部的方向沿着尾骨的一侧刺入尾部 为防止疫苗渗漏，不能过拨出针头,2019/7/20,54,翼翅刺种法,2019/7/20,55,确保每只鸡都能得到准确的疫苗量 达到快速免疫 免疫力佳 适用于任何年龄的鸡只 操作简便,但增加劳动强度 针对性较强,重要性及优点,翼翅刺种法,2019/7/20,56,缺点：,操作要求准确 劳动强度高,翼翅刺种法,2019/7/20,57,翼翅刺种法,多用于鸡痘及AE+POX接种 适用于各种年龄的家禽 细胞免疫 英特威疫苗采用特殊的接头与稀释液混合溶解;及特殊的双针槽的刺种针,2019/7/20,58,翼翅刺种法,将接种针充分插入疫苗溶液中，待针槽充满药液后，将针轻靠小瓶内壁，除去附在针上的多余药滴。 轻轻展开鸡翅，将针插入鸡翅翼膜内侧。 刺种针勿接触鸡羽,接种方法,2019/7/20,59,翼翅刺种法,刺种时，应小心拨开鸡羽，注意勿伤及肌肉、关节、 血管、神经和骨头 给2周龄以下小鸡接种时，最好每接种一瓶疫苗(500-1000鸡)换一枚刺种针 勿用不合适的针接种疫苗; 注意针槽勿向下 免疫后7-10天检查结节Check takes,2019/7/20,60,翼翅刺种法,免疫后7-10天无结节的因素,-免疫接种不当 -鸡痘2nd 免疫接种 -已感染野毒/强毒,2019/7/20,61,翼翅刺种法,注意勿污染疫苗瓶及刺种针: 乳酪状渗出物 污染 LT及鸡痘免疫反應 (特别是火鸡) 鸡痘眼,2019/7/20,62,喷雾免疫,2019/7/20,63,操作简便 达到快速免疫 适用于任何年龄的鸡只 局部免疫: 上皮粘膜免疫系统 建立第一道免疫屏障,重要性及优点,噴霧免疫,2019/7/20,64,缺点：,易免疫反應大Rolling reaction ILT反應大 操作要求高,噴霧免疫,2019/7/20,65,喷 雾 免 疫 命 名,喷雾 结膜 鼻腔 气管上部,气雾 鼻腔 气管 气囊 肺脏,噴霧免疫,2019/7/20,66,喷雾免疫,喷雾免疫 vs 气雾免疫 雾滴直径80-120微米 -雾滴直径7日龄雏鸡可用,2019/7/20,67,监测的解剖学部位 不同接种途径疫苗病毒的分布 饮水免疫 滴眼免疫 泄殖腔免疫 喙 100 0 0 口腔 100 100 0 喉头 0 0 0 气管 0 0 0 鼻腔 28* 100 0 鼻孔 40 0 0 眼 0 100 0 泄殖腔 100* 100* 100 法氏囊 0 0 100 *部分着色 *由肾排除而着色 0=无着色,噴霧免疫,2019/7/20,68,家禽呼吸系统防御机制,机械性机制 免疫学机制 纤毛 粘膜 淋巴组织 抗体生成细胞 巨噬 细胞 哈德氏腺 - - + + ？ 泪管 - + ？ ？ 鼻腔 + + + 气管 + + -* - - 支气管 + + +* + - 细支气管 + 肺 - - +* +,*病毒或MG感染，呈现淋巴细胞侵润 *散在性淋巴细胞侵润,所以深部免疫反应比较强,噴霧免疫,2019/7/20,69,Figure 1.Anatomy of the respiratory tract of the chicken,ventral view(Grau,1943),气囊 (300毫升),2019/7/20,70,干微粒沉降与直径的关系,雾滴直径(微米) 沉降(CM/秒) 降落1米所需时间 0。1 2。9X10-5 41天 1。0 2。9X10-3 10小时 10。0 2。9X10-1 6分钟 50。0 7。2 14秒 100。0 28。8 3。5秒,(J。 VAN ECK， PHI DOON， 1990),噴霧免疫,2019/7/20,71,在21度C下雾滴寿命与其直径的关系和相对湿度的关系,雾滴大小(微米) 雾滴寿命(秒) RH*=50% RH*=75% RH*=95% 20 1。8 1。7 10 50 5 10。4 62。5 100 20 41。7 250,(J。 VAN ECK， PHI DOON， 1990),噴霧免疫,2019/7/20,72,(J。 VAN ECK， PHI DOON， 1990),雾滴的平均沉降和完全挥发前的沉降距离与雾滴大小的关系,雾滴直径(微米) 平均沉降(CM/秒) 完全挥发前的沉降距离 20 0。6 1 M 50 3。6 37 CM 100 14。4 6 CM,噴霧免疫,2019/7/20,73,喷雾免疫,1日龄雏鸡的喷雾免疫 全自动喷雾免疫 最常用的疫苗是ND,IB,和Cox 局限在孵化室内使用 用来稀释疫苗的水量取决于喷雾器的类型及型号 每小时可免疫近万只鸡,2019/7/20,74,喷雾免疫,1日龄雏鸡的喷雾免疫 使用可调节喷嘴的人工喷雾器免疫 1000D疫苗+200毫升水（200C） 水质要非常好，最好用蒸馏水或去离子水，疫苗瓶要在水中开启，以便溶解疫苗 喷雾器应绝对清洁，一定不能有消毒剂或洗涤剂残留 喷雾时要调节好喷嘴大小，使雾滴大小合适，喷雾中定期检查及调节喷嘴 喷雾前，把装有雏鸡的雏鸡盒互相靠在地上排成一行，绝不能放在靠近热源的地方；喷雾过程中，将喷嘴维持离地面约40厘米高度 喷雾至雏鸡感到潮湿，但又不能淋湿它们为好 免疫后，应让雏鸡在盒内停留1015分钟,2019/7/20,75,喷雾免疫,较大鸡只的喷雾免疫 农用喷雾器械等 1000D疫苗+500毫升优质水,2019/7/20,76,Figure 8. Improving the effectiveness of spraying by extending the spraying lance and attaching a branch to the end.,2019/7/20,77,喷雾免疫,较大鸡只的喷雾免疫 气雾法 使用时散发一种非常细的薄雾/浓雾 雾滴直径20微米 采用此技术必须在鸡群处于最理想的健康状态时才可使用，缺乏操作经验的人员不要采用这种技术 进行气雾操作的人员必须戴上防护面罩,2019/7/20,78,喷雾免疫,注意事项 喷雾免疫应在封闭的鸡舍内进行，有通风设备的鸡舍，要关闭通风设备一段时间后，再进行免疫。开放式鸡舍应该用防风窗帘封闭再喷雾，否则是没用的 喷雾时，鸡舍内光线应该暗些，有窗户的鸡舍宜在黄昏进行喷雾免疫 免疫后，要彻底清洗接种器械的内外部，最好用热水 操作人员最好使用防护面罩，保护口鼻,2019/7/20,79,噴霧免疫,2019/7/20,80,马立克疫苗接种,2019/7/20,81,影响马立克疫苗接种成效的因素 疫苗品质 解冻稀释及接种过程 注射器材的清潔殺菌方式,接种鸡群爆发马立克病的最常见因素为 对小鸡注射前的準備工作，疫苗的混合 及处理方式不適当,马立克疫苗接种,2019/7/20,82,马立克冷冻疫苗产品的準备,稀释及注射 自液态氮中取出疫苗时， 每次只能取出即刻要用的 一瓶， 其他的疫苗都必须全部马上再放回液态氮筒中 当疫苗取出后及与稀释液混合的这段期间， 如果超过2分半钟则其效价可能完全消失,马立克疫苗接种,2019/7/20,83,当安瓶(疫苗)自液态氮取出时， 应立即以温度适当 的水来加以解冻 水的温度很重要， 应当维持在18-25 C 之间,用来解冻疫苗的水温度对於马立克疫苗效价的影响,水温 疫苗效价 25C 100% 40C 75% 18C 80%,马立克疫苗接种,2019/7/20,84,安瓶(疫苗)的解冻以及疫苗与稀释液混合的操作 其整个过程应在60秒之内完成,马立克疫苗在水中解冻时搁置时间对疫苗效价的影响,搁置时间 疫苗效价 在水中30秒(对照) 100% 5分钟 83% 10分钟 68% 15分钟 47%,马立克疫苗接种,2019/7/20,85,稀释液应当随时维持在室温(18-25C)来与疫苗混合， 稀释液在与疫苗混合时,绝不可先冰冻过,稀释液的温度 疫苗效价 对照(室温) 100% 冰冻过的稀释液(4C) 78%,马立克疫苗接种,稀释液的温度对马立克疫苗效价的影响,2019/7/20,86,抗生素的添加,有很多种抗生素都对疫苗中的病毒有害, 即使是未完全破坏它,马立克疫苗接种,2019/7/20,87,每次都应以全新的塑胶无菌针筒，用18G/1.5” 针头,以便将安瓶中的疫苗吸取并注入稀释液中,抽取少量的稀释液到针筒中， 用以洗涤安瓶， 上述过程应再重覆2-3次 洗涤安瓶的措施可回收剩余达14%的疫苗病毒,马立克疫苗接种,2019/7/20,88,疫苗混合及接种完毕， 应在30分钟内完成， 可保留疫苗之效价免受损失达9%,马立克疫苗接种,吸取疫苗的动作应缓慢温和, 混合的过程得温柔地操作， 以免内含疫苗病毒的细胞受破坏,2019/7/20,89,马立克疫苗接种,要经常检查连续注射器及自动注射器是否有漏水 注射器避免潮湿或骯