细菌感染的检测方法与防治原则.ppt

医学微生物学,细菌感染的检测方法与 防治原则,2,本章重点与难点,细菌感染性标本的采集原则 细菌感染的实验室检验程序 常用的血清学诊断方法 适应性免疫的获得方式 人工免疫的概念和常用的免疫制剂 细菌感染的治疗原则,3,4,细菌感染的实验室检验方法,5,一.临床标本的采集与运送原则,6,7,（一）细菌的形态学检查,暗视野 显微镜,相差 显微镜,主要用于检查在生活状态下细菌的动力及其运动情况,不染色 标本,8,细菌的染色,革兰 染色,抗酸 染色,荧光金胺O染色,其他 特殊染色,9,10,革兰染色,葡萄球菌（革兰染色阳性）,大肠埃希菌（革兰染色阴性）,10,细菌检查的一般程序,(二) 细菌分离培养与鉴定,11,细菌的分离培养,培养基的成分 pH 培养时间 温度 气体环境,在血平板上的肺炎链球菌菌落,12,生化试验,肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应,13,血清学鉴定,利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌 对细菌进行种、群、型的鉴定 沙门菌血清学鉴定 摘自 临床微生物检验（第五版）人民卫生出版社,14,药物敏感试验,纸片扩散法、稀释法、E-test法 最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC） 能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度 最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC） 能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度,15,纸片扩散法,含有定量抗生素的纸片贴在已接种待检病原菌的琼脂平板上，纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散，形成了逐渐减小的药物浓度梯度。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现抑制病原菌生长而形成的大小不同的抑菌环。根据抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感。,16,稀释法,以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。 稀释法 琼脂稀释法使用琼脂培养基 肉汤稀释法使用肉汤培养基,17,抗生素连续梯度法（E-test法）,将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度（MIC）。,18,将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。 摘自 临床微生物检验（第五版）人民卫生出版社,19,自动微生物鉴定及药敏分析系统,自动微生物鉴定及药敏分析系统,药敏检测原理,微型化的肉汤稀释试验 根据CLSI标准得到相应敏感度：敏感、中度敏感和耐药,微生物数码鉴定原理,计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和,性能特点,自动化程度较高、检测速度快、可鉴定细菌种类及药敏试验种类多、数据处理软件功能强大、结果准确可靠,系统组成,测试卡（板）、菌液接种器、培养和监测系统、数据管理系统,自动微生物鉴定及药敏分析系统,20,（三）细菌抗原的检测,21,（四）细菌核酸的检测,22,（五）生物芯片技术,将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。,23,生物芯片的分类 基因芯片（gene chips），又称DNA芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 糖芯片,24,生物芯片的用途 微生物感染的快速诊断：对某些病原体，如细菌、真菌和病毒进行多重快速检查与鉴别； 微生物变异机制和耐药机制的研究； 微生物基因分型及分子流行病学的调查； 微生物基因组及后基因组的研究：可研究病原体基因的序列、转录表达、抗原的表达及细菌糖键的特异性研究； 抗微生物感染药物的研制等。,25,三、细菌感染的血清学诊断,用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以作为感染性疾病的辅助诊断。 由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常称为血清学诊断（serological diagnosis）。 一般适用于抗原性较强的细菌，以及病程较长的感染性疾病。也可用于调查人群对某病原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的预防效果。,26,细菌性感染的血清学诊断,27,28,机体获得特异性免疫力的方式,自然免疫,人工免疫,主动免疫：疫苗或类毒素等 被动免疫：抗毒素或丙种球蛋白等,主动免疫：隐性或显性感染 被动免疫：获得母体的Ab(胎盘/初乳),29,30,一、人工主动免疫,人工主动免疫（artificial active immunization）是将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于特异性预防。 采用人工主动免疫方法通常称为预防接种（prophylactic inoculation）或疫苗接种（vaccination）。,30,疫苗的种类 死疫苗：伤寒疫苗、霍乱疫苗 活疫苗（减毒活疫苗）：卡介苗（BCG） 亚单位疫苗：肺炎链球菌荚膜多糖 基因工程疫苗 载体疫苗 核酸疫苗,31,死疫苗,死疫苗（killed vaccine）：用物理、化学方法杀死病原微生物，但仍保持其免疫原性的生物制剂。 常用的有：伤寒、霍乱、流行性脑膜炎、钩端螺旋体病等灭活疫苗。,32,活疫苗（减毒活疫苗）,减毒活疫苗（attenuated vaccine）是通过毒力变异或人工选择法（如温度敏感株）而获得的减毒或无毒株，或从自然界直接选择出来的弱毒或无毒株经培养后制成的疫苗。 常用的有：BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎、麻疹等减毒活疫苗。,33,活疫苗与死疫苗的比较,34,新型疫苗,亚单位疫苗,基因工程疫苗,核酸疫苗,重组载体疫苗,35,亚单位疫苗,利用微生物的保护性抗原制成的不含有核酸、能诱发机体产生免疫应答的疫苗，称为亚单位疫苗（subunit vaccine）。 举例 肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌表面的荚膜多糖，钩端螺旋体的外膜蛋白等。,36,基因工程疫苗,利用基因工程技术把编码病原体保护性抗原表位的目的基因，导入原核或真核表达系统后，用表达的保护性抗原所制成疫苗称为基因工程疫苗（gene engineered vaccine）。,37,重组载体疫苗,将编码某一蛋白抗原的基因转入减毒的病毒或细菌而制成的疫苗。转入的目的基因可整合到细菌或病毒的基因组上或以质粒的形式存在。,38,核酸疫苗,核酸疫苗（nucleic acid vaccine）也称DNA疫苗。是将编码保护性抗原的基因重组到质粒真核表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到宿主体内，外源基因在体内所表达的抗原能刺激机体产生免疫应答。,39,类毒素,外毒素经0.3%0.4%甲醛处理后，失去了毒性但仍保持免疫原性的生物制品。加入吸附剂（佐剂）氢氧化铝后便制成精制类毒素（toxoid）。 吸附剂可延缓类毒素在体内的吸收时间，刺激机体产生足量的抗毒素。 举例：白喉类毒素、破伤风类毒素,40,二、人工被动免疫,人工被动免疫（artificial passive immunization）是输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程，可用于某些急性传染病的紧急预防和治疗。,41,抗毒素(antitoxin),将类毒素或外毒素给马进行多次免疫后，待马匹产生高效价抗体后采血，分离血清，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制剂。 主要用于外毒素所致疾病的治疗和紧急预防。临床常用的有破伤风、白喉精制抗毒素、肉毒抗毒素以及气性坏疽多价抗毒素等。 使用这种异种抗毒素时应注意避免型超敏反应的发生。,42,丙种球蛋白,血清丙种球蛋白是从正常人血浆中提取的丙种球蛋白制剂。 胎盘丙种球蛋白是从健康产妇的胎盘或婴儿脐带血液中提制而成，主要含有丙种球蛋白。 主要用于对某些疾病的应急预防及烧伤患者预防细菌感染。,43,两种人工免疫方法的比较,44,45,主要采用抗菌药物来治疗细菌感染。 抗菌药物一般是指具有杀菌或抑菌活性的药物以及由微生物合成的抗生素类药物。 正确合理应用抗菌药物是提高疗效、降低不良反应发生率以及减少或减缓细菌耐药性发生的关键。,46,抗菌药物治疗性应用的基本原则,诊断为细菌性感染者，方有指征应用抗菌药物； 尽早查明感染病原，根据病原种类及细菌药物敏感试验结果选用抗菌药物； 按照药物的抗菌作用特点及其体内过程特点选择用药； 抗菌药物治疗方案应综合患者病情、病原菌种类及抗菌药物特点制订。,47,复习思考题,取脑脊液进行细菌感染的检查，用什么免疫学方法可以进行快速诊断？ 检查病原菌抗原和血清中的特异性抗体选用的免疫学方法相同吗？为什么？ 自动微生物鉴定