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PTEN在乳腺癌中的表达及其与转移的关系 作者：赵刚 韩冰 杨明 范志民 赵光程【摘要】 目的 通过检测PTEN基因在乳腺癌组织中的表达探讨其临床病理意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测PTEN在40例乳腺癌中的表达。结果 乳腺癌组织与正常乳腺组织和癌旁组织PTEN的表达有显著差异（P0.01，P0.05）。PTEN在早期浸润性癌和晚期浸润性癌阳性表达率差异显著（P0.05）；在淋巴结转移组与无淋巴结转移组检出阳性率差异显著（P0.01）。结论 PTEN表达与乳腺癌临床病理特征和生物学行为存在密切关系；PTEN基因是乳腺癌细胞增生活跃的重要影响因素。 【关键词】 乳腺癌；癌基因；抑癌基因乳腺癌是我国死亡率较高的恶性肿瘤，其发生发展是一个多基因、多阶段的变化过程。其中癌基因突变激活及抑癌基因失活起重要作用。PTEN基因为抑癌基因,其蛋白产物具有磷酸酶活性,调节细胞周期和增殖活性。国外学者近年研究发现PTEN基因及其蛋白表达与一些恶性肿瘤发生发展、生物学行为和预后有密切关系110。本实验拟采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)分析并研究乳腺癌组织及淋巴结中PTEN表达及其与乳腺癌转移的关系，为乳腺癌诊治提供临床依据。 1 材料与方法 1.1 标本及临床病理资料 我院20062007年间乳腺外科收治手术切除女性乳腺癌标本60例，年龄4873（平均57.8）岁。肿瘤直径2 cm 者21例，25 cm者32例，5 cm者7例。浸润性特殊癌2例(乳头状癌1 例、黏液腺癌1例)；浸润性非特殊癌51例(浸润性导管癌42 例、浸润性小叶癌6例、髓样癌2例、硬癌1例)；早期浸润性癌7例(早期浸润性导管癌6例、早期浸润性小叶癌1 例)；期19例，期32例，期9例；淋巴结转移38 例，无淋巴结转移22 例。另取20例年龄4570（平均55.7）岁女性乳腺癌根治术后癌旁腺体组织(距肿瘤边缘 2 cm)和10例年龄4468（平均53.4）岁乳腺良性肿瘤术后正常腺体组织(距肿瘤边缘1 cm) 作对照组。标本离体后立即置于-80冰箱冻存。全部标本均经病理诊断证实。病人术前均未接受过化疗或放疗。 1.2 主要试剂 总RNA提取试剂盒（Trizol）、逆转录试剂盒系Invitrogen产品均购自大连Takara公司。按GenBank的（PTEN）EST序列设计引物，PTEN基因（具体由大连宝生生物工程技术公司合成）上游引物：5CAC AGA ATT CCA GAC ATG ACA GCC ATC ATC3，下游引物：5GTG GAT CCT CAT GGT GTT TTA TCC CTC TTG3，扩增片段为1 209 bp2。内参actin上游引物:5ACA CTG TGC CCA TCT ACG AGG3，下游引物：5AGG GGC CGG ACT CGT CAT ACT3，扩增片段为627 bp。PTEN登录号：NM058076。 1.3 方法 采用RTPCR方法。按照试剂盒说明书提取RNA后对提取物进行含量及纯度分析。RNA浓度的测量OD260在0.40.6之间。OD260/OD280=2.1。取24 g RNA进行逆转录，逆转录根据RT试剂盒（大连宝生生物技术公司）说明进行。PTEN基因的PCR扩增条件为：变性温度94，45 s；退火温度55，1 min；延伸温度72，2 min。共35个循环，72，10 min作终延伸。取PCR产物经15 g/L琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外光下照相。actin在所有RTPCR扩增产物琼脂糖电泳检测结果中均为一条单独闪色区带，避免了假阴性的发生；同时RTPCR扩增产物片段与预期大小相一致1，2，分析转录产物，反映特定基因的mRNA表达情况，证明PCR产物无假阳性发生。 1.4 统计学处理 应用SPSS11.0软件包进行率的2检验。 2 结 果 2.1 RTPCR扩增产物琼脂糖电泳检测结果 1 209 bp处有一明亮的条带为PTEN PCR产物（见图1），与文献报道一致3，4。 M：DNA分子标记；N：正常乳腺组织；T1、T2 ：乳腺癌组织;P1、P2：乳腺癌癌旁组织 图1 RTPCR分析PTEN基因在乳腺癌组织中的表达 2.2 乳腺癌的PTEN表达与临床病理特征关系 正常乳腺组织组和癌旁组织组PTEN表达阳性率明显高于乳腺癌组（P0.05，P0.01）。在早期浸润性癌和晚期浸润性癌中PTEN阳性率差异显著（P0.05）。PTEN阳性表达率在淋巴结转移组和无淋巴结转移组差异显著（P0.01）（见表1）。表1 乳腺癌病理类型,分级及转移状况与PTEN表达的相互关系 3 讨 论 肿瘤发生与多个癌基因及抑癌基因异常表达有关。发现并研究癌基因和抑癌基因、了解其产物在信号传导通路中的作用，将有助于阐明癌变机制及寻找肿瘤药物治疗靶点。有研究表明，PTEN基因不同程度地参与肿瘤发生和转移26。 PTEN (phosphatase and tension homologue deleted on chromosome ten)为Steck（1997年）发现并命名的具有磷酸酶活性的抑癌基因，其抑制酪氨酸磷酸化的作用，从而对细胞增殖和细胞周期起调控作用5。PTEN失活则促进肿瘤进行性生长和肿瘤细胞增殖活性增加6。PTEN负调控细胞周期及多种信号途径，抑制细胞黏附、细胞迁移、细胞分化、细胞衰老和细胞凋亡等多种生理活动。PTEN基因突变在某些肿瘤中突变率高，但在多数肿瘤中突变率不高，PTEN蛋白在多数肿瘤中有失表达或表达减少，提示存在翻译或翻译后水平的调控机制。近年，国外学者较广泛地研究了PTEN基因及其蛋白产物在多种恶性肿瘤和正常组织中的表达，发现PTEN蛋白表达与一些恶性肿瘤的发生发展，生物学行为和预后有密切关系，阳性表达者多分化好、生长速率低、不易发生转移和预后良好7，8。本组资料发现，PTEN蛋白在乳腺癌中表达率明显低于正常乳腺组织及癌旁组织（P0.05），在早期浸润性癌中PTEN阳性率明显高于晚期浸润性癌（P0.05）。区域淋巴结未转移者阳性率明显高于淋巴结转移者（P0.05）。其结果与国外一些文献报道相似9，10，说明PTEN表达与乳腺癌临床病理特征，生物学行为和预后评估有密切关系。本实验证明，PTEN基因表达是反映乳腺癌发生发展、生物学行为和预后的重要生物学标记物之一。癌基因的激活或抑癌基因的失活或突变是恶性肿瘤发生和发展的分子学基础，因此检测PTEN在乳腺癌中表达,可提高对乳腺癌恶性表型判断的准确性，有助于深入了解肿瘤发生发展机制，并可为鉴别诊断、判断预后和基因治疗提供依据。人们对PTEN的研究刚刚开始，尤其是其表达蛋白的研究，很多问题需进一步研究，如PTEN在肿瘤抑制及信号途径中的功能，还需探讨。同时，收集更多的资料，定期随访，也是下一步应用本研究结果为乳腺癌预后进行评估的重点。【参考文献】 1 Wang SE，Narasanna A，PerezTorres M,et al.HER2 kinase domain mutation results in constitutive phosphorylation and activation of HER2 and EGFR and resistance to EGFR tyrosine kinase inhibitorsJ.Cancer Cell，2006；10(1):2538.2 Tsutsui S，Inoue H，Yasuda K,et al.Reduced expression of PTEN protein and its prognostic implications in invasive ductal carcinoma of the breastJ.Oncology，2005；68(46):398404.3 Tang Y，Nakada MT，Kesavan P,et al.Extracellular matrix metalloproteinases inducer stimulates tumor angiogenesis by elevating vascular endothelial cell growth factor and matrix metalloproteinasesJ.Cancer Res，2005；65(8):31939.4 Jagodic M，Vrhovec I，Borstnar S,et al.Prognostic and predictive value of cathepsins D and L in operable breast cancer patientsJ.Neoplasma，2005；129 (17)：415970.5 Nahta R，Yu D，Hung MC,et al.Mechanisms of disease：understanding resistance to HER2targeted therapy in human breast cancerJ.Nat Clin Pract Oncol，2006；3(5)：26980.6 Smith I，Procter M，Gelber RD,et al.2year followup of trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2positive breast cancer：a randomised controlled trialJ.Lancet，2007；369(9555):2936.7 Nahta R，Yuan LX，Zhang B,et al.Insulinlike growth factorI receptor/human epidermal growth factor receptor 2 heterodimerization contributes to trastuzumab resistance of breast cancer cellsJ.Cancer Res，2005；65(23):1111828.8 Robinson AG,Turbin D，Thomson T,et al.Molecular predictive factors in patients receiving trastuzumabbased chemotherapy for metastatic diseaseJ.Clin Breast Cancer，2006；7(3):25461.9 Xia W，Bisi J，Strum J,et al.Regulation of survivin by ErbB2 signaling：therapeu