MDR1和Ki67在胃癌中的表达及临床意义.doc

MDR1和Ki67在胃癌中的表达及临床意义 作者：杨志慧 刘玉龙何金徐毅刘惠敏【摘要】 目的 探讨MDR1和Ki67在胃癌中表达的临床意义。方法 应用免疫组织化学方法检测100例胃癌组织中MDR1及Ki67的表达。结果 MDR1和Ki67在胃癌组织中的表达高于癌旁组织，而与年龄、性别、组织学类型、浸润深度以及淋巴结转移均无相关性。MDR1与Ki67之间也无明显相关性。结论 MDR1和Ki67都不能作为胃癌病人判断预后和临床化疗耐药的单一指标。 【关键词】 胃肿瘤多药耐药MDR1基因P-糖蛋白Ki67 Expressions of MDR1 and Ki67 in Gastric Cancer and their Clinical Significance Abstract: Purpose To explore the expressions of MDR1 and Ki67 in gastric cancer and their clinical significance Method One hundred cases with gastric cancer were detected for MDR1 and Ki67 by immunohistochemistry technique. Results The expressions of MDR1 and Ki67 in cancer tissues were higher than those in cancer surrounding tissues and didnt correlated to the age, sex, histological type, depth of invasion and lymph node metastasis. There was no correlation between MDR1 and Ki67 either. Conclusion Neither MDR1 nor Ki67 serves as a single indicator to estimate prognosis and drug resistance in clinic. Key words: gastric neoplasms; multiple drug resistance; MDR1 gene; P-glycoprotein; Ki67 antigen 胃癌是临床最常见的肿瘤之一，手术后辅以化疗成为治疗的主要手段。然而由于肿瘤细胞耐药的产生，相当一部分病例化疗效果不理想。一般来讲增殖活性高的细胞群对化疗相对敏感，但有关肿瘤细胞增殖指数与肿瘤细胞耐药性之间的相关性研究，至今国内未见报道。本实验应用免疫组化方法探讨MDR1和Ki67在胃癌组织中表达的相关性，旨在为临床正确用药提供参考依据。 1 材料与方法 1.1 材 料 收集长征医院20032004年间手术切除胃癌标本共478例，选择诊断明确、病历资料完整、未经任何治疗的分化性管状腺癌和乳头状腺癌40例，低分化腺癌40例，黏液腺癌和印戒细胞癌20例，共100例。其中癌浸润至黏膜下层（早期胃癌）9例，浸润肌层21例，浸润浆膜层70例，有胃周淋巴结转移的81例，无胃周淋巴结转移的19例，男性68例，女性32例，年龄2682岁，中位年龄59岁。 1.2 方 法 所有标本经10中性福尔马林固定，石蜡包埋切片，免疫组织化学技术采用SP法，MDR1(P-gp)、Ki67单克隆抗体和即用型SP试剂盒均购自福州迈新公司，染色前组织抗原用高压修复，其余步骤按试剂盒说明操作，PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。 1.3 结果判断 MDR1(P-gp)以细胞浆和细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数5为阳性，5为阴性，Ki67以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数10为阴性，1030为（），3050为（），50为（）。 1.4 统计学处理 采用SAS统计软件，2检验。 2 结 果 2.1 MDR1和Ki67在胃癌组织和癌旁组织中的表达 MDR1阳性颗粒出现于细胞浆/膜，表达相对较弱，Ki67的阳性颗粒出现于细胞核，表达较强，在癌与癌旁组织中的表达情况见表1。结果表明MDR1阳性率，癌组织和癌旁组织比较有显著性差异（2=6.61，P0.05），Ki67表达于癌组织和癌旁组织阳性率经比较有显著性差异（2119.499，P0.01）。 2.2 MDR-1和Ki67表达的相互关系 MDR1和Ki67在癌组织中的表达情况见表2。结果表明Ki67各级表达与MDR1之间无相关关系（23.366，P0.05）。 2.3 胃癌组织中MDR1 和Ki67蛋白表达与临床 病理相关因素关系 MDR1和Ki67蛋白的表达与年龄、性别、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移与否，均无明显相关性（见表3）。 3 讨 论 多药耐药性（multiple drug resistance，MDR）是肿瘤进行有效化疗的主要障碍之一，MDR1是细胞产生MDR表型的分子基础，是一种具有能量依赖性药泵功能的跨膜糖蛋白，可主动将进入细胞内的抗癌药物泵出细胞外，降低细胞内药物的浓度，使肿瘤细胞产生耐药1，2。Ki67抗原是典型的与细胞周期相关的核蛋白，于G1后期出现，S期和G2期逐渐增高，M期达到高峰，有丝分裂后迅速降解消失，与细胞的合成代谢有关，其表达水平能较全面客观地反映肿瘤细胞的增殖状态3。 关于MDR1在癌组织和癌周正常胃黏膜组织的表达率，文献报告相差悬殊，有人认为MDR1在癌组织中表达阳性率很高，而正常黏膜呈较低程度的表达4；有人却认为MDR1在癌组织与癌旁组织中的表达并无显著性差异5，作者分析造成这些不同结果的原因可能与应用的检测方法及操作技术不同有关。本组实验研究显示MDR1在癌周正常组织表达率为32，而在癌组织表达率为59，MDR1在癌组织中的表达率高于癌旁正常黏膜组织，两者具有差异性（P0.05），表明MDR1的表达仍然具有明显的肿瘤特异性，而且有一半以上的胃癌患者具有天然耐药性，使得进入细胞内的化疗药物在发挥作用之前就被泵出细胞外，从而降低了细胞内的药物浓度，提示这可能是胃癌患者临床化疗效果不佳的原因之一。MDR1表达主要对生物碱类、蒽环类和鬼臼类较为耐药，对烷化剂类药物较敏感，因此，为取得最佳疗效，可以根据肿瘤MDR1表达结果来选择化疗方案，避免使用与多药耐药有关的药物，同时还可作为选用MDR逆转剂治疗的指标。 本实验研究显示Ki67在癌旁正常组织表达只有11，阳性表达主要见于正常上皮的基底层细胞，而在胃癌组织中表达率高达91，两者比较有显著性差异（P0.01）。这一方面证明了癌组织的生长是异常、无序的失控性的生长，另一方面也提示Ki67阳性表达，尤其是高强度阳性表达对胃良恶性病变的鉴别诊断有一定参考价值。 Gottesman6认为肿瘤细胞MDR1的过度表达与肿瘤的浸润、转移及临床分期呈正相关，陈嘉毅等7、Czyzewska等8也提出Ki67阳性表达可以作为预测病人预后的一个客观指标。而本实验结果表明MDR1和/或Ki67与病人年龄、性别、组织学类型、浸润深度和淋巴结转移均无明显相关性（P0.05），因此认为MDR1 和Ki67均不能作为胃癌病人的预后判断指标。这与蔡颖等9、Oshima等 10等报道结果一致。 众所周知，细胞群体的增殖活性越高，化疗效果就越好，那么是不是意味着Ki67表达越高，MDR1的阳性率就越低呢？本实验结果显示，虽然在MDR1阴性表达组Ki67强阳性表达（39.0）高于MDR1阳性组（22.0），但统计学处理结果显示Ki67各级表达与MDR1的表达均无明显的相关性（P0.05），推测肿瘤细胞动力学的调控机制复杂多样，受到多种因素的综合作用，Ki67只是其中一项指标，并不能完全反映肿瘤细胞的增殖组分。因此，对Ki67阳性率高的肿瘤是否一定会对化疗药物敏感尚不能明确，需要进一步研究证实。 总之，由于肿瘤耐药机制涉及到多种因素参与，无论是Ki67还是MDR1都不能作为临床制定化疗方案的惟一指标，应综合多种因素以及胃癌本身的生物学特征来制定合理的治疗方案。【参考文献】 1 Li DQ, Wang ZB, Bai J, et al. Reversal of multidrug resistance in drug-resistant human gastric cancer cell line SGC7901/VCR by antiprogestin drug mifepristoneJ. World J Gastroenterol, 2004, 10(12):1722-1725.2 Woodahl EL,Ho RJ.The role of MDR1 genetic polymorphisms in interindividual variability in P-glycoprotein expression and functionJ. Curr Drug Metab,2004,5(1):9-11.3 Sawhney N,Hall PAKi-67-structure, function, and new antibodiesJ J Pathol, 1992, 168(2)：423-4284 黄爱民, 刘景丰. 胃癌多药耐药基因的表达及其意义J. 第四军医大学学报（J Porth Mil Med Univ）,2002,23(21):1952-1954.5 Lacueva J,Perez-Ramos M, Soto JL, et al. Multidrug resistance-associated protein (MRP1) gene is strongly expressed in gastric carcinomas. Analysis by immunohistochemistry and real-time quantitative RT-PCRJ. Histopathology, 2005, 46(4):389-395.6 Gottesman MM.How cancer cells evade chemotherapy:sixteenth Richard and Hinda Rosenthal Foundation Award LectureJ. Cancer Res, 1993, 53(4):747-754.7 陈嘉毅, 李莹杰, 田丽峰. 肿瘤增殖和凋亡相关因素在胃癌演进过程中的作用J. 临床与实验病理学杂志, 2003, 19（6）：604-607.8 Czyzewska J, Guzinska-Ustymowicz K, Lebelt A, et al. Evaluation of proliferating markers Ki-67, PCNA in gastric cancersJ. Rocz Akad Med Bialymst, 2004, 49