CD44v6和PTEN表达与结直肠癌浸润和转移关系.doc

CD44v6和PTEN表达与结直肠癌浸润和转移关系【摘要】 目的 探讨CD44v6和PTEN蛋白表达与结直肠癌浸润和转移的关系。方法 应用免疫组织化学技术，检测90例结直肠癌、20例结直肠腺瘤和20例正常结直肠黏膜组织中的CD44v6和PTEN蛋白表达。结果90例结直肠癌组织中CD44v6和PTEN蛋白阳性表达率分别为75.6%和46.7%。结直肠癌组织中CD44v6表达阳性率显著高于结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织（2=27.60、35.22,P<0.05），而PTEN表达阳性率显著低于结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织（2=16.08,P<0.05）。CD44v6和PTEN表达与结直肠癌的浆膜浸润、淋巴结转移和肝脏转移相关（2=4.5913.60,P<0.05)。结直肠癌组织中CD44v6与PTEN表达呈负相关（2=14.46,P<0.05)。结论 CD44v6和PTEN表达与结直肠癌浸润转移密切相关，检测CD44v6和PTEN蛋白表达可作为判断结直肠癌预后的客观指标。 【关键词】 结直肠肿瘤；肿瘤转移；CD44v6；PTEN；免疫组织化学 ABSTRACTObjectiveTo study the the expressions of CD44v6 and PTEN in colorectal carcinoma and their correlation with the infiltration and metastasis of the disease.MethodsImmunohistochemical technique was used to detect the expressions of CD44v6 and PTEN in 90 cases of colorectal carcinoma,20 of colorectal adenoma and 20 of normal colorectal mucosa.ResultsThe expressions of CD44v6 and PTEN the carcinoma were 75.6% and 46.7%,respectively. CD44V6 in carcinoma was higher than that in the adenoma and normal colorectal mucosa (2=27.60,35.22,P<0.05), but PTEN was lower than that in adenoma and normal colorectal mucosa (2=16.08,P<0.05). The expressions of CD44v6 and PTEN were positively correlated with the serosa infiltration, lymph node and liver metastasis (2=4.59-13.60,P<0.05). CD44v6 showed negative correlation with PTEN in thecancer (2=14.46,P<0.05).ConclusionA close relationship exists between CD44v6, PTEN and infiltration as well as metastasis in colorectal carcinoma, these expressions may be used as prognostic indicators of the disease. KEY WORDSColorectal carcinoma; Tumor metastasis; CD44v6; PTEN; Immunohistochemistry 结直肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，其主要死亡原因是术后转移。大量研究表明，结直肠癌形成和转移的发生是一个多基因、多因子共同作用的结果。本研究应用免疫组织化学方法，探讨CD44v6和PTEN蛋白表达与结直肠癌浸润、转移的关系及CD44v6和PTEN蛋白表达之间的相关性，为预测结直肠癌浸润转移提供客观参考指标。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源 选取我院20002005年间手术切除的结直肠癌标本90例。90例病人中男51例，女39例，平均发病年龄（56.810.6）岁。以同期结直肠腺瘤和结直肠癌远癌切缘处正常黏膜组织(距癌灶>4 cm)各20例作为对照。标本均经40 g/L中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 m厚连续切片。 1.1.2 试剂 鼠抗人CD44v6和兔抗人PTEN抗体、LSAB试剂盒均为丹麦Dako公司产品。 1.2 方法 1.2.1 免疫组织化学染色 采用微波链霉菌素生物素(MWLSAB)免疫组织化学法和微波金属盐抗原修复技术。即切片常规脱蜡水化后,放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L，pH 6.0)内,用微波仪(YWY781A医用型)170 W辐射5 min,冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法,所不同者为三步抗原孵肓和正常血清封闭用微波仪130 W分别辐射5 min,保温2 min即可。实验用已知CD44v6和PTEN阳性胃癌组织作阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。H2O2DAB显色。 1.2.2 结果判断 CD44v6和PTEN染色阳性信号呈棕黄色,均以细胞质显示棕黄色颗粒为阳性。根据染色强度及显色癌细胞比例将两种蛋白表达状况分为4级：未见棕黄色颗粒为阴性（-);阳性细胞数<25%为弱阳性（+），阳性细胞数25%75%为阳性（），阳性细胞数>75%为强阳性（）。 2 结 果 2.1 CD44v6和PTEN蛋白在正常结直肠黏膜和良恶性病变组织中的表达 免疫组化染色结果显示，CD44v6和PTEN蛋白阳性产物呈棕黄色或棕褐色，定位于细胞质。90例结直肠癌组织中CD44v6和PTEN蛋白表达阳性率分别为75.6%和46.7%；在20例结直肠腺瘤和20例正常结直肠黏膜组织中CD44v6阳性表达率分别为20.0和0，而PTEN蛋白均呈不同程度阳性反应（100）。结直肠癌组织CD44v6阳性表达率显著高于结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织（2=27.60、35.22,P<0.05），而PTEN蛋白阳性表达率显著低于结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织（2=16.08,P<0.05）。 2.2 CD44v6和PTEN蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系 CD44v6和PTEN蛋白阳性表达与结直肠癌肿瘤部位、大小和分化程度无关（P>0.05)。CD44v6高表达及PTEN低表达均与结直肠癌浆膜浸润、淋巴结转移和肝脏转移相关（2=4.5913.60,P<0.05)。见表1。表1 90例结直肠癌CD44v6和PTEN蛋白表达与临床病理参数的关系略 2.3 结直肠癌组织中CD44v6与PTEN表达关系 在CD44v6组织阳性表达的68例结直肠癌组织中，PTEN阳性表达24例(35.3%)，在CD44v6阴性表达的22例结直肠癌组织中，PTEN阳性表达18例(81.8%)，结直肠癌组织中CD44v6与PTEN表达呈负相关（2=14.46,P<0.05)。 3 讨 论 CD44是一种近年来很受关注而分布极为广泛的细胞表面黏附分子，CD44根据基因外显子表达方式的不同编码两种不同类型的蛋白，即标准型CD44s和变异型CD44v。在不同的细胞上CD44由于结构的不同而介导不同的功能，CD44s在生理状态下主要参与细胞与细胞、细胞与间质之间的粘连;介导淋巴细胞的归巢及细胞的迁移。CD44v则主要出现在机体的病理过程，特别是肿瘤的发生发展过程中。 CD44v的出现改变了肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能，使肿瘤细胞侵袭与转移的能力增强。CD44v6是CD44的一种拼接变异体，其表达可改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能，有助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6促进转移的作用机制可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与淋巴管或血管内某一配体结合，使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长，有效形成转移瘤。近年研究证实，CD44v6和转录分子水平的过量表达与乳癌、胃癌、食管癌等的发生发展、侵袭和转移密切相关13。 PTEN基因是1997年在染色体1023上克隆到的一种新型抑癌基因。通过对其结构预测显示，PTEN与细胞骨架蛋白和张力蛋白高度同源，提示PTNE可能参与细胞骨架重组并影响细胞迁移能力。PTEN抑癌基因突变或缺失可能构成一个新的信号转导途径，在调节细胞的增殖和死亡、细胞的转移和粘连等方面均起重要作用，与人类恶性肿瘤的发生、发展关系密切46。PTEN突变或缺失可促进血管内皮因子形成，使血管内皮细胞增殖和肿瘤微血管形成，从而使肿瘤侵袭转移能力增高7。 本研究结果显示，在结直肠癌组织中CD44v6蛋白阳性表达率显著高于结直肠腺瘤组织和正常结直肠黏膜组织，PTEN蛋白阳性表达率显著低于结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织。随着结直肠癌浆膜浸润、淋巴结转移和肝脏转移，CD44v6表达阳性 1期谷化平，尚培中. CD44v6和PTEN表达与结直肠癌浸润和转移关系5 率亦显著增高，而PTEN阳性表达率显著降低。表明CD44v6在结直肠癌的发生、临床进展和转移过程中起着重要促进作用，PTEN在其过程中起着抑制作用。因此，我们认为在临床病理活检中检测其基因蛋白表达，不仅有助于深入了解肿瘤的发生发展，而且可为诊断、预后判断和临床基因治疗提供依据及新思路。 在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说，认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各阶段，至少有两个或两个以上功能不同的异常激活的基因各自发挥不同作用，并在时间和空间上相互配合，协同促进了细胞的癌变。本文结果显示，在结直肠癌组织中CD44v6与PTEN表达呈负相关。结果表明，在结直肠癌的系列病理过程中，CD44v6与PTEN可能具有负调节的协同作用。深入探讨它们之间的作用机制，可能对阐明和阻断肿瘤转移的形成具有重要价值。 【参考文献】 1CHEN J Q, ZHAN W H, HE Y L, et al. Expression of heparanase gene, CD44v6, MMP7 and nm23 protein and their relationship with invasion and metastasis of gastric carcinomasJ. World Gastrienterol, 2004,10(6):776782. 2YAMAGUCHI A, GOI T, YU J, et al. Expression of CD44v6 in advanced gastric cancer and its relationship to hematogenous metastasis and longterm prognosisJ. J Surg Oncol, 2002,79(4):230235. 3魏志敏,姜天福,孙显路,等. 子宫内膜样腺癌p53、cerbB2、CD44v6和雌孕激素受体联合检测的临床意义J. 青岛大学医学院学报, 2004,40(1):4243. 4HUANG J, KONTOS C D. PTEN modulates vascular endothelial growth factor mediated signalin