金黄色葡萄球菌检测（课件）解读

,食品中金黄色葡萄球菌的检验,2012级食品安全学实验课程要求,上课要求：上课前穿好白大褂，不迟到，不吃东西，桌面无杂物。实验结束后，每人将自己做实验的操作台整理干净。 分组要求：根据学号分组，位置固定，不得私自调离 值日要求：根据学号分组 本课程课件放在公共邮箱里，请同学们自行下载 。 公共邮箱： 密码： 2012shian 每周的实验报告由学习委员收齐后送到食品学院B231 考试成绩按以下公式计算： 平时（50）作业（50）,学习食品中金黄色葡萄球菌的基本检测方法,实验目的,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。有“嗜肉菌“的别称。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，革兰氏染色 阳性，显微镜下排列成葡萄串状。 无芽胞、鞭毛， 大多数无荚膜。,基本原理,金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到,感染可引起皮肤化脓性炎症。 如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，可引起急性胃肠炎。 最容易感染金黄色葡萄球菌的食物有:肉类、禽类、蛋类、水产类、奶制品等等。,革兰氏阳性 BP（Baird-Parker）平板上特征菌落 血平板上特征菌落 产血浆凝固酶 产耐热DNA酶 产金黄色葡萄球菌肠毒素,鉴定指标,BP平板主要成分及作用： 胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏:普通营养 氯化锂、甘氨酸:抑制非致病性葡萄球菌的生长 丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长 亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金葡菌还原为碲盐 呈黑色 卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪。由于金葡产卵磷酯酶，其菌落周围可出现一明显的沉淀环。,金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态,金黄色葡萄球菌在BP平板上，菌落直径为2mm-3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶尔会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。,血琼脂培养基（BAP）主要成分及作用,牛肉粉、蛋白胨、氯化钠:普通营养 脱纤维羊血（或兔血）:金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。,在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑突起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。,金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落形态,血浆凝固酶试验,血浆凝固酶试验 原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血浆凝固酶，能使血浆中的纤维蛋白原转变成纤蛋白，附着于细菌表面，产生凝固。 现象：呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。,12,培养基和试剂： 7.5%氯化钠肉汤、营养琼脂斜面 Baird-Prker琼脂平板、血琼脂平板、 BHI（脑心浸出液肉汤）、兔血浆 实验器材：酒精灯、移液枪、试管、锥形瓶、 培养皿、接种环、试管架、恒温 培养箱、冰箱、灭菌锅等。 实验样品：污染牛奶等。,实验材料,操作步骤,金黄色葡萄球菌的定性检测程序：,操作步骤,1.样品的处理 2.增菌:在7.5%氯化钠肉汤液于37培养1824h。 3.分离：将上述培养物，分别划线接种到BP平板和血平板，37 培养1824h或4548h。 4.鉴定 -血浆凝固酶试验： 新鲜配置兔血浆0.5 mL ，加入 BHI 培养物 0.2 mL0.3 mL ，振荡摇匀，置 37温箱内，每半小时观察一次，观察 6 h。,1.鉴定致病性金黄色葡萄球菌