课件：骨髓细胞形态学检验.ppt

第三节 血细胞形态学特征,一、血细胞发育过程中形态学演变的一般规律 血细胞发育：从原始到成熟有一定的规律性 1、细胞体积 （1）胞体由大到小（普通规律） （2）特殊规律：早幼粒大于原粒细胞 巨核细胞体积增大,2、细胞质： （1）量由少到多 （2）染色由深蓝到浅蓝 （3）颗粒：从无有嗜天青颗粒特异性颗粒 3、细胞核： （1）大小：由大到小，由规则到不规则（巨核细胞核由小到大） （2）染色质：细致疏松粗糙成块 4、核/质 比例：由大到小。,二、血细胞的形态学特征 1、红细胞系 （1）原红（normoblast）：1522um （2）早幼红（basophilic normoblast）：11-20um （3）中幼红（polychromatic normoblast）：8-18um （4）晚幼红（ortho-chromatic nurmblast）：7-12um （5）网织红（RC）： 7.4um （6）成熟RBC（RBC）：7.4um,2、粒细胞系统： （1）原粒细胞（myeloblast）：11-18um （2）早幼粒（promyelocyte）：12-22um （3）中幼粒（myelocyte） 中性中幼粒（neutrophilic myelocyte）：10-18um 嗜酸性中幼粒（eosinophilic myelocyte）：15-20um 嗜硷性中幼粒（basophilic myelocyte）：10-15um,（4）晚幼粒细胞（metamyelocyte）：10-16um 中性 嗜酸 嗜硷 （5）杆状核粒细胞（stab granulocyte、 bandgranulocyte） 中性 嗜酸 嗜硷 （6）分叶核粒细胞（segmented granulocyte） 中性 嗜酸 嗜硷,3、淋巴细胞系统 （1）原淋巴细胞（Lymphoblast）：10-18um （2）幼淋巴细胞（prolymphocyte）：10-16um （3）淋巴细胞（lymphocyte） 大淋巴细胞 小淋巴细胞,4、浆细胞系统： （1）原浆细胞（plasmablast）：15-20um （2）幼浆细胞（proplasmacyte）：12-16um （3）浆细胞（plasmacyte）：8-20um,5、单核细胞系统： （1）原单核细胞（monoblast）：15-25um （2）幼单核细胞（promonocyte）：15-25um，核可见凹陷，切迹，扭曲或折叠 （3）单核细胞（macrophage）：12-20um：核呈肾形，马蹄形，笔架形及“S”形。 （4）吞噬细胞（macrophage）：单核细胞组织细胞巨噬细胞或吞噬细胞,6、巨核细胞学： （1）原巨核细胞（megakaryoblast）：15-30um （2）幼巨核细胞（promegakaryocyte）：30-50um （3）颗粒型巨核细胞（granular megakaryocyte）：50-70um （4）产板巨（thronbocytogenous megakaryocyte）。 （5）巨核细胞裸核（naked nucleus）,7、其它细胞 （1）网状细胞 （3）纤维细胞 （2）内皮细胞 （4）组织嗜硷 （5）成骨细胞 （6）破骨细胞,三、细胞化学染色 概念： （1）细胞形态学为基础 （2）对骨髓片按一定程序染色 （3）显微镜下观察（细胞化学成分及其变化）,（一）过氧化物酶染色 1、原理：细胞中的POX（peroxidase）H2O2O2氧化联苯胺呈蓝色+亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒。 2、结果： （1）阴性：无颗粒 （2）弱阳性：细小颗粒分散 （3）强阳性：颗粒粗大而密集 3、意义： （1）急粒：强阳性 （2）急单；弱阳性 （3）急淋：阴性,（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色 1、原理：NAP（neutrophil alkaline phosphatase）的显示方法有偶氮偶联法： NAP（PH9.4-9.6）-磷酸茶酚钠-茶酚+重氮盐形成灰黑色沉淀（定位于酶活性处）。,2、结果： （1）5级分类 0级阴性 1级+ 2级+ 3分+ 4分4（+） （2）阳性率报告：计数100NC中阳性细胞分率。 （3）积分报告：100NC细胞的累积分数,3、参考区间：NAP：阳性率：10-40% 积分：40-80分 4、临床意义： （1）感染性疾病的诊断：鉴别细菌或病毒感染 （2）CML和类白血病鉴别 （3）AA与PNH鉴别,（三）酸性磷酸酶染色 1、原理：ACP（acid phosphatase）： ACP（PH5.0）甘油磷酸钠磷酸钠+硝酸铅磷酸铅沉淀+硫化铵反应棕黑色硫化铅沉淀。 2、结果：胞质内出现棕黑色颗粒为阳性反应。,3、意义： （1）多毛细胞白血病（hairy cell leukemia，HCE）诊断：HCL为阳性不被L-酒酶抑制 （2）T-B淋巴细胞鉴别：T阳性，B阴性 （3）协助鉴别Gaucher病与Niemann-Pick病：Caucher阳性，Niemann-Pick阴性 （4）单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞ACP阴性。,（四）氯化醋酸AS-D茶酚酯酶染色 1、原理： AS-D（SE）氯化醋酸AS-D茶酚AS-D+重氮盐GBC偶联红色沉淀定位于胞浆中 2、结果：粒系阳性或强阳性反应 单核阴性或弱阴性反应 淋巴、嗜酸细胞、浆细胞阴性反应 3、意义： （1）急粒阳性或强阳性 （2）急单、急淋阴性反应,（五）-醋酚茶酚酯酶染色 1、原理：-NAE-醋酸茶酚-茶酚+重氮盐染料偶联黑色沉淀定位于胞浆中。 2、结果： 1、单核细胞阳性（灰黑色沉淀） 2、粒细胞弱阳性 3、淋巴细胞阴性 3、意义： 1、急单强阳性反应 2、急粒弱阳性反应,（六）糖原染色 1、原理：PAS反应 过典酸（糖原）醛基+无色品红紫红色化合物 2、结果： （1）阳性：颗粒状、小块状或弥漫均匀红色 （2）分为：强阳性、弱阳性和阴性或阳性百分率 （3）粒系： 原粒阴性，早幼粒以下阶段阳性反应程度渐增强 单核弱阳性，淋巴细胞阴性 红系：阴性 巨核：阳性,3、意义： 1、红血病与巨幼贫鉴别：前者幼红细胞阳性，后者幼红细胞阴性 2、白血病：急粒：阴性或弱阳性 急淋：原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状 急单：呈弥漫均匀或细颗粒状 3、其它： Gaucher细胞阴性 Niemann-Pick阴性,（七）铁染色： 1、原理：（1）铁铁蛋白或含血黄素单核-吞噬细胞质内 （2）Fe3+亚铁氰化钾铁氰化铁沉淀（普鲁土蓝） 2、结果： （1）细胞外铁：一、1+ 4（+） （2）细胞内铁： 含有铁颗粒的幼红细胞铁粒幼红细胞 油镜下计数100个幼红细胞计算其阳性率 I、II、和环状铁粒幼细胞,3、参考值： （1）细胞外铁：1+ 2（+），大多为2+ （2）细胞内铁：2090% 4、意义： （1）缺铁性贫血诊断 （2）非缺铁性贫血：如AA、铁粒幼细胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加 （3）MDS-RARS：环状铁粒幼细胞15%,四、细胞免疫分型： 1、用单抗和免疫学技术检测细胞表血特异性 2、分化抗原细胞所属系列、分化程度及功能状态。 （一）检测方法： 1、免疫荧光法（immme of luoresence technique） （1）原理： 荧光标记的单抗+细胞表面分化抗原结合产生荧光 用荧光显微镜和流式细胞仪检测 直接荧光法、间接荧光法 （2）参考值：有荧光阳性细胞 无荧光阴性细胞,2、免疫酶染色法： （1）APAAP法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）： 一抗+CD抗原+AKP标记二抗底物显色 （2）PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶法） 一抗+CD抗原+POX标记抗体底物显色 （3）ABC法（亲和素生物素酶复合物）法： 一抗+CD抗原+生物素标记二抗HRP标记亲和素+底物,（二）细胞免疫分型的临床应用 1、有助于识别不同系列的细胞： 髓系：CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166 淋巴系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD52、CD77 巨核系：CD41、CD42、CD61 2、识别不同的淋巴细胞： T系统：CD2、CD3、CD4、CD7、CD8 B系统：CD19、CD20、CD22 NK：CD16、CD56,3、用于T淋巴细胞亚群检测： T：（CD3） TH（CD4+ CD8） TS（CD4 CD8+） 4、用于识别不同分化阶段的细胞： （1）造血干细胞CD34+、CD90+、lin （2）髓系祖细胞CD34+、CD33+ （3）T淋巴细胞系祖细胞CD34+、TDT+、CD10+、CD7+ （4）B淋巴细胞系祖细胞CD34+、CD19+,5、有助于识别不同功能状态的细胞： 记忆T细胞CD45RO高表达、CD45RA不表达 活化T细胞CD45RA不表达、CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58均强表达。,6、用于不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离：分选的流式细胞仪 7、白血病的免疫分型 8、可用于白血病微小残留病检测： （1）CD病人：CD19、CD22、CD10、CD7、CD5、CD13、CD37、CD34阳性并伴有TbT+则可诊断微小残留病存在 （2）敏感性：10-4水平,（三）急性白血病细胞免疫表型特点,五、细胞遗传学分析 1、染色体检查方法 2、染色体分析 （1）染色体命名：46条，22对常染色体，1对性染色体 男46XY，女：46XX A-G7组 ZP35表示,（2）核型分析及其书写： （1）书写顺序：染色体数目、性染色体、染色体异常 （2）染色体变异以小写表示： t易位 iso或i等臂染色 inv倒位 ins插入 del缺失 r环状染色 “”-丢失 “+”-增加,（3）第一括号内表示染色体数目，第二括号内表示染色体区带 （4）P表示短臂，q表示长臂 （5）45，X，-Y，t（8；21），（q22，q22）表示45条染色体，丢失Y染色体，第8号与第21号染色体之间易位，断裂点在8号染色体长臂2区2带与21号染色体长臂2区2带。 3、染色体畸变 （1）二倍体（2n） （2）数目畸变：整倍体和非整倍体 （3）亚二倍体：比2n少 （4）超二倍体：比2n多,第五节：常见血液病的血液学特征,一、贫血 贫血（anemia）：指单位容积循环血液中红细胞数，血红蛋白量及血细胞比容（Hct）低于参考值低限，贫血是一种症状。,（一）缺铁性贫血： 1、定义：IDA（iron deficiency anemia）：由于缺铁而造成的贫血。 2、血象：（1）Hb、RBC下降，Hb下降更明显 （2）血片：RBC体小、淡染、中心区扩大（MCV、MCH、MCHC均下降） （3）RC轻度增多或正常 （4）WBC、PLT正常,3、骨髓象： （1）增生明显活跃 （2）红系：明显增生30%，以中、晚幼红为主，胞体小胞质少，嗜碱性，核小，固缩 （3）粒细胞等相对减少，巨核系正常,（二）溶血性贫血： 1、定义：HA（hemolytic anemia）是由于各种原因使红细胞寿命缩短，破坏增加，超过了骨髓的代偿功能所致的贫血。 2、血象： （1）Hb、RBC平行下降 （2）血片：RBCRA不一，易见大RBC，嗜多色红细胞及有核红细胞，可见H-J小体，Cabot环、点彩RBC，也见特殊RBC：球形RBC、靶形RBC、椭圆RBC，裂红细胞。 （3）RC：明显增多 （4）WBC、PLT增多或正常,3、骨髓象： （1）增生明显活跃 （2）红系：明显增多，可3050%，以中晚幼红为主，可见核畸形，H-J小体，嗜硷性点彩等。 （3）粒系相对减少，形态正常。 （4）巨核系正常。,（三）巨幼细胞贫血 1、巨幼贫（megaloblastic anemia）：由于叶酸及VitB12缺乏使DNA合成障碍所引起的一组贫血。 2、血象： （1）Hb、RBC下降，RBC下降更明显。 （2）血片：RBC大小不等，可见嗜多色、点彩，H-J小体，Cabot环。 （3）RC轻度增加。 （4）WBC减少，分叶过多，在45叶以上。 （5）Plt减少。,3、骨髓象： （1）增生明显活跃 （2）红系：40%，巨幼变 （3）粒系：巨幼变 （4）巨核系：巨幼变及分叶,（四）再生障碍性贫 1、再障（aplastic anemia AA）：是由于多种原因所致骨髓造血干细胞减少和功能异常导致三系减少。 2、症状为：感染、贫血和出血。 3、分型：急性和慢性。,1、急性型： （1）血象： Hb、RBC明显减少 RC：0.5109/L或O WBC：1.0-2.0109/L， L占60% plt：20109/L或10109/L （2）骨髓象： 增生明显减低 三系明显减少 非造血细胞增多 骨髓小粒以非造血细胞为主。,2、慢性型： （1）血象： Hb、RBC平行下降，为中、重度贫血 RC：15109/L WBC：2.0-3.0109/L， L占50% plt：30109/L-50109/L （2）骨髓象： 增生减低三系明显减少淋巴细胞相对增多、非造血细胞增多骨髓小粒以非造血细胞为主。,二、白血病 1、白血病（leukemia）：白血病细胞异常增生与分化成熟障碍，并浸润其他器官和组织，正常造血受抑制。 2、症状：贫血、出血感染和浸润症状 3、分型：急性和慢性 4、分类： 成人以急粒为主，儿童以急淋为主 慢粒比慢淋为多见,（一）急淋白血病： 1、血象： （1）Hb、RBC下降（重度或中度下降），可见幼红细胞 （2）WBC计数： 增多：10-50109/l 正常 减少：如APL （3）WBC分类：可见白血病细胞（幼稚细胞，异常白细胞），可达30-90%。 （4）Plt计数减少：早期正常，晚期明显减少,2、骨髓象： （1）骨髓增生明显或极度活跃 （2）一系或二系原始细胞明显增多：30%ANC （3）其它系列受抑制或减少 （4）涂片中：急淋易见涂抹细胞，急非淋，可见Auer小体,3、分型 （1）FAB分型：急淋和急非淋 （2）AML：M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7 （3）ALL：L1、L2、L3 （4）我国AML分型标准：修改为：M2M2a、M2b M3M3a M3b M4M4a、 M4b、 M4c,（二）慢性白血病：分为慢性粒细胞和慢性淋巴细胞白血病 1、慢性粒细胞白血病 （1）血象： Hb、RBC早期轻度贫血，晚期重度贫血 WBC明显升高：早期（20-50）109/L 晚期（100-300）109/L 分类：以中、晚、杆状核粒细胞为主，原+早10% PLT：早期升高，晚期下降,（2）骨髓象： 增生极度活跃 粒系增生明显占90%以上，以中、晚、杆状核粒细胞为主，原+早10%，嗜酸、嗜硷细胞易见 红系增生受抑 巨核系早期增多，晚期减少 NAP积分减少 t(9;22)(q34;911)bcr-abl融合基因,2、慢性淋巴细胞白血病 （1）临床特征： 为B淋巴细胞白血病 欧美国家多见 老年人多见 肝脾淋巴结进行性肿大 病程长达10-20年。,（2）血象： Hb、RBC轻度下降，合并HA时明显下降 WBC升高：（15100）109/L L60-70%，以小淋巴细胞增生为主。 中性粒轻度减少，PLT正常。 （3）骨髓象： 增生明显或极度活跃 淋巴系增多50%，为成熟淋、原、幼淋少见 粒系，红系减少 晚期巨核细胞减少,三、骨髓增生异常综合征 1、概念： （1）MDS（myelodysplastic syndrome MDS），是二组造血干细胞克隆性疾病，出现病态造血。 （2）外周血细胞减少，而骨髓细胞增生，成熟及幼稚细胞形态有异常。,2、MDS分类： RA（refractory anemia） AR-S（refractoryamemia with sideroblastosis） RAEB（refractoryamemia with excess of blasts） CMML（chromic myelomonocytic leukemia） RAEB-T（refractoryanemia with excess of blasts in trans -formation）,3、血象： （1）Hb、RBC下降，RBC大小不均及异形，可见椭圆，嗜多色性红细胞、点彩RBC，有核RBC，RC减少。 （2）WBC正常或减少：形态异常，分叶过多，Pelger-Huet畸形，胞质