肝炎病毒及其检验-2015年.ppt

肝炎病毒及其检验,肝炎病毒（hepatitis viruses，HV）是指以侵害肝脏为主引起病毒性肝炎的一组病原体。 目前公认的肝炎病毒至少有5种，即甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）和戊型肝炎病毒（HEV）。 近年还发现一些与人类肝炎相关的病毒，如GB病毒-C/庚型肝炎病毒（GBV-C/HGV）和输血传播性病毒（TTV）病毒，但由于致病性不清，均未被最后确定和命名。 此外，还有一些病毒如黄热病毒、CMV、EBV、风疹病毒等虽也可引起肝炎，但不列入肝炎病毒范围之内。,属于不同的科family和属genus,第一节 甲型肝炎病毒,甲型肝炎病毒（hepatitis A virus，HAV）首先是Feinstone于1973年应用免疫电镜技术在急性期肝炎患者粪便中发现的。 1982年国际病毒命名委员会将其分类为小RNA病毒科肠道病毒属72型。近年又被单列为肠道病毒科的嗜肝RNA病毒属（heparnavirus）。,世界各地HAV流行状况,1、形态与结构,一、生物学性状,球形颗粒，无包膜 衣壳:20面体立体对称，由 VP1VP4等4种多肽组 成，其中VP1是主要的 衣壳蛋白。 基因组:线状+ssRNA，稳定性高。,2、血清型,至今，世界各地HAV只发现一个血清型。,3、易感动物和细胞培养 动物模型 黑猩猩、狨猴及猕猴等灵长类动物易感，且可传代 。 细胞培养 HAV生长缓慢，接种后约需4周才可 检出抗原HAV可用非洲绿猴肾细胞、人胚肾细胞、传代猴肾细胞 (Vero、BSC-1、FRhK-4、FRhK-6)、人胚肺2倍体成纤维细胞和人肝癌细胞株 (PLCPRF5) 等。,4、抵抗力,较一般肠道病毒抵抗力强 在淡水、海水、污水、泥沙毛蚶等水产品中存活数天至数月。 HAV易通过食物和水在人群中传播,温 度 60 可存活4h 80 5min完全灭活 100 1min完全灭活 4其抗原性和组织培养活性可保持1年 -20可存活多年并保持传染性,化学消毒剂 3%福尔马林5min均可灭活 70%乙醇3min部分灭活 不耐受冷冻干燥，对紫外线敏感,鉴于HAV有相当大的抵抗力，因此对肝炎患者及其排泄物处理应特别小心。,1、传染源与传播途径 传染源：多为患者和隐性感染者。患者潜伏期后期及 急性期的血液和粪便均有传染性。 传播途径：主要通过粪-口途径传播 经食物传播 经食用受污染的贝壳类水产品 经产、供、销环节污染的食物 经水传播 卫生条件差的国家和地区 特点 发病者多饮用同一水源，病例分布与供水范围一致 日常生活接触传播,二、致病性与免疫性,致病机制 HAV主要侵犯儿童和青年，且多为隐性感染: HAV 口 小肠淋巴结内增殖 血（病毒血症） 肝细胞内增殖 致病（出现临床症状）。,2、致病性与免疫性,免疫性 感染后可产生持久免疫力。 早期：IgM；同时，从粪便中检出sIgA抗体。 恢复期：IgG，并可持续多年； 特异细胞免疫应答。,(一) 病毒检测：潜伏期末期和急性期早期，取粪便用免疫电镜检测HAV颗粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (EIA) 法检测HAV 的抗原。 (二) 血清学检查：检测抗HAV常用RIA和EIA法。检测抗HAV IgM有助于早期诊断；测抗HAV IgG有助于流行病学调查；测粪便中抗HAV IgA也有助于诊断。 (三) 病毒核酸检测：应用 cDNA-RNA分子杂交技术及PCR技术检测HAV的RNA，方法特异、敏感。,三、微生物学检查法,HAV感染后以隐性感染和无黄疽型病例占多数。 预防：一般性预防：搞好卫生。 特异性预防：我国使用减毒甲型肝炎活疫苗(H2 株和L1株)；国外已生产灭活疫苗， HAV基因工程疫苗正在研制中。 治疗：甲型肝炎为自限性疾病，经治疗可痊愈，不转慢 性亦不留后遗症。,四、防治原则,第二节 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）属嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）。 HBV是乙型肝炎病原体，主要经输血、注射、性行为和母婴传播。起病徐缓，部分患者可转为慢性，少数还可导致肝硬化和肝癌。,HBV感染的分布,小球形颗粒：直径22nm，成分HBsAg，不含HBV DNA和DNA聚合酶，无感染性； 管形颗粒：直径22nm，长度在50700nm之间，成分HBsAg ； 大球形颗粒：即Dane颗粒，直径42nm，具有感染性的完整病毒颗粒。,一、生物学性状,1、形态与结构,乙肝病毒的三种颗粒,小球形颗粒,大球形颗粒（Dane颗粒）,管形颗粒,完整的HBV颗粒亦称Dane颗粒，具有双层核衣壳结构，由内向外分为分为三部分： 核心：DNA和DNA多聚酶。 内衣壳：为HBcAg，在酶和去垢剂作用下可暴露 HBeAg 。 外壳（包膜）：厚7nm。 双层脂质 蛋白质：含有HBsAg、PreS1和PreS2,核心蛋白 HBcAg,HBsAg S蛋白,2、HBV基因结构 HBV DNA是由长链L (负链) 和短链S (正链) 组成的不完全双链环状DNA，短链的长度相当于长链的50%85%。 HBV DNA长链载有病毒蛋白质的全部密码，有4个开放读码框架(ORF)，分别称为S、C、P和X区 ，能编码全部已知的HBV 蛋白。,3、病毒蛋白,外壳蛋白： 帮助HBV吸附至肝细胞受体，具有抗原性。 在病毒繁殖和复制过程中发挥重要作用。 能刺激机体产生保护性抗体。,HBsAg 最早出现的血清学标志之一 是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于 乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌 注意 HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染 (S基因突变或低水平表达),HBsAb：特异性中和抗体、保护性抗体 HBsAb阳性可见于 乙型肝炎恢复期，在HBsAg消失后间隔一定时间HBsAb出现隐性感染的健康人，自身产生了免疫力 注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)后，产生的主动或被动免疫,3、病毒蛋白,核壳蛋白 HBcAg: C基因编码，结构蛋白，具有较强的免疫原性。 仅存在感染的细胞中。 HBeAg: 前C基因编码，非结构蛋白，可溶性蛋白，使HBV逃避宿主机体的免疫清除，得以在携带者体内长期存在。可被分泌到血清中。,HBcAg 不能从血清中直接检出 Dane颗粒经去垢剂处理HBcAg释放检测 HBcAb 非中和抗体、分IgM和IgG 主要见于慢性感染和既往感染 HBcAb IgM 通常在出现症状时即可检出，一般持续约6个月，提示HBV 复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活动性肝炎的重要标志 HBcAb IgG 在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴随感染者终生存在,HBeAg：几乎与HBsAg平行出现，HBeAg可作为HBV复制及血清具有传染性的标志； HBeAb阳性主要见于HBsAg阳性的患者； 急性乙型肝炎进入恢复期时HBeAg消失，HBeAb阳性；但 HBeAb亦见于携带者及慢性乙型肝炎血清中。,检测HBV抗原、抗体 检测的项目主要是HBsAg和HBsAb、HBeAg和HBeAb、以及HBcAb（俗称的两对半），必要时也可检测PHSA、PreS1和PreS2的抗原和抗体。上述各项检查组成一套乙型肝炎病毒抗原抗体检测系统 (HBV血清标志) 。,病毒抗原抗体系统检测结果分析,4、血清HBV DNA检测 核酸分子杂交及PCR技术检测HBV DNA可用于乙型肝炎的诊断及流行病学调查。 常用斑点杂交法将特异的HBV DNA探针与患者血清进行杂交检测血清中HBV DNA，方法敏感、特异，能测出0.1-1pg核酸。 用PCR技术检测患者血清中HBV DNA,在临床上也已用于辅助诊断，特别是定量PCR能测出DNA拷贝数量，可做为药物疗效的考核指标。,动物模型与细胞培养： 黑猩猩是研究HBV的最佳动物模型。 动物模型：树鼩、土拨鼠、地松鼠。 HBV尚不能在细胞培养中分离培养，目前采用病毒DNA转染肝癌细胞系,乙肝防治,临床特点,1. 潜伏期：26个月,急性感染,慢性乙型肝炎,肝硬化,2. 临床类型：,抵抗力： HBV对外界环境的抵抗力较强，对低温、干燥、紫外线均有耐受性。 自然条件下，可以停留在一些物体表面一周而不失去感染性。 60 10小时、100 10分钟：感染性消失 不被70%乙醇灭活 煮沸30分钟、121高压20分钟，可灭活,HBV进入血液的主要途径： 母婴垂直传播：我国现有HBsAg阳性者约1.4亿人，其中85%通过母婴传播。垂直传播是我国乙型肝炎蔓延和高发的主要原因。也有少数为父婴传播者。母婴传播主要是通过产道感染或宫内感染。 血液或血制品传播：被HBV污染的血制品如白蛋白、血小板或血液输给受血者，多数会发生输血后肝炎，另外血液透析、肾透析时也会感染HBV。 医源性传播：被HBV污染的医疗器械（如手术刀、牙钻、内窥镜、腹腔镜等）均可传播HBV。 家庭内密切接触：主要指性接触、日常生活密切接触（如同用一个牙刷、毛巾、茶杯和碗筷），均有受HBV感染的可能。HBV可通过破损粘膜进入密切接触者的体内。 公共场所、理发店、美容院等容易被HBV污染，如浴池、剃刀等均可传染HBV。,防治原则,控制传染源，切断传播途径 人工自动免疫： 疫苗（血源性、基因工程) 人工被动免疫： 高效价人血清球蛋白（HBIg）,防治原则,基因工程疫苗（优点）效果 出现抗-HBs的阳性率80.3%-96.2%,Be cloned,Yeast,In large fermenters,HBsAg protein,vaccine,First recombinant antigen vaccine Hepatitis B vaccine,HBsAg,Purified,induce,Protective antibodies,If you have never had hepatitis B, you can get 3 shots . . .,. . . and get long lasting protection.,Hepatitis B can be prevented!,6 months old,Hepatitis B Vaccine,Baby Shots for Hepatitis B if the mother has Hepatitis B,1 - 2 months old,Hepatitis B Vaccine,+,Birth,H-BIG,Hepatitis B Vaccine,2008-5-19,第一个WORLD HEPATITIS DAY Am I number 12? 全球每12人中就有一个是乙肝或丙肝病毒携带者,婴幼儿感染幅度下降 过半成人无乙肝抗体（15-59岁）,乙肝抗病毒治疗,1、干扰素（普通干扰素、长效干扰素） 该类药物的优点是有固定疗程、不产生病毒耐药、HBeAg,HBsAg血清转换率高且应答持久、具有调节免疫和抗病毒双重功效； 缺点：需皮下注射、价格较高、不良反应较多等,乙肝抗病毒治疗,2、核苷（酸）类似物 这类药物的优点是：三性“有效性、易行性、安全性”，但是也有疗程不固定、易发生病毒耐药、停药后易复发等的缺点。 拉米夫定，阿德福韦酯，替比夫定，恩替卡韦，替诺福韦酯，克拉夫定等。,第三节 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）引起丙型肝炎。 HCV主要经血或血制品传播，目前占输血后肝炎的80%90%。在我国丙型肝炎流行率为2.1%。其临床和流行病学特点类似乙型肝炎，但症状较轻，演变为慢性者多见，部分患者可发展为肝硬化或肝癌。,一、生物学性状,HCV属于黄病毒科（flaviviridae）丙型肝炎病毒属。其生物学性状及基因结构与黄病毒相似。 HCV呈球形，其直径约为30nm60nm，外有脂蛋白包膜。,核酸为+ssRNA。 5端UTR核酸序列保守性强，病毒株间差异小，可用于诊断。 包膜蛋白区和非结构蛋白1区基因易变异，包膜蛋白抗原性变异，不被抗体识别，病毒持续存在，易发展成慢性；,至今HCV的细胞培养尚未成功。 黑猩猩是HCV唯一易感动物。 HCV对一般理化消毒剂敏感，对氯仿、乙醚等有机溶剂敏感，紫外线照射、1005min、20%次氯酸、福尔马林 (11000)均可使HCV失活。,HCV主要通过输血或血制品、注射和母婴传播。 潜伏期为226w，平均7.4w，但由输血或血制品引起的丙型肝炎潜伏期较短，大多数在输血后512w发病。大多数患者不出现症状或症状较轻，多为无黄疽型，50%的患者演变为慢性肝炎，部分发展为肝硬变，甚至原发性肝癌。 关于HCV感染的慢性化机制，目前认为HCV并不直接引起肝细胞损害，而主要是通过免疫病理损伤和细胞凋亡导致肝细胞破坏。,二、致病性和免疫性,HCV感染后： 抗 HCV IgM：出现较早，持续时间短； 抗HCV IgG：出现较迟。 这些抗体在抗HCV感染中有何实际意义，是否具有保护作用，目前尚不十分清楚。,预防主要通过检测抗HCV或HCV RNA筛选献血员来降低输血后丙型肝炎的发病率。 其他预防措施同HBV。 目前还无特异性防治对策，一般治疗原则与乙型肝炎相同。,三、防治原则,第四节 丁型肝炎病毒 丁型肝炎病毒（hepatitis D virus，HDV），曾称肝炎病毒（hepatitis virus），是丁型肝炎的病原体。 通过黑猩猩实验感染证明它是一种缺陷病毒，必须在HBV或其它嗜肝DNA病毒辅助下才能复制，因此其致病必须同时有HBV感染，病情较单纯感染HBV的患者严重。,HBs抗原,RNA,d 抗原,丁型肝炎病毒 (),HDV为直径35nm37nm的球形颗粒，核心含有环状-ssRNA和HDV抗原(抗原)。HDV表面为HBV包膜，主要含有HBsAg。 HDV不能独立复制，须在HBV或其他嗜肝DNA病毒辅助下才能增殖。 HDV RNA可编码 HDVAg，刺激机体产生抗体。 HDV仅有一血清型，敏感动物是黑猩猩、土拨鼠和北京鸭等。,一、生物学性状,传播方式： 与HBV基本相同，主要经输血或注射传播。与HBV相比，HDV母婴垂直传播少见，而性传播相对重要。,二、致病性和免疫性,由于HDV是缺陷病毒，而且其衣壳为HBsAg，从而决定了HDV只能感染HBsAg阳性者，其感染有两种形式： 共同感染 (coinfection