灰蛋鸡生长期消化道主要酶系变化规律的比较研究.doc

太行鸡、海兰灰蛋鸡生长期消化道主要酶系变化规律的比较研究王 娟 臧素敏* 元 娜 郗艳菊 李庆凯 李 利作者简介：王娟（1978-），女，河北满城人，河北农业大学动物科技学院，硕士，主要研究方向为动物营养与饲料科学。e-mail: ；手机电话通讯作者：臧素敏，女，教授。 email：河北农业大学动物科技学院，河北 保定 071000摘要：（目的）本试验旨在研究太行鸡的消化生理特性。（方法）选择1d太行鸡和海兰灰蛋鸡各120只，每鸡种设4个重复，每个重复30只，公母各半。分别在 5、9、14、21、28、35、42、49、56、63、77、91d测定十二指肠和空肠内的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶及盲肠内的纤维素酶活性，分析其变化规律。（结果）结果表明：两鸡种消化道内各酶先随日龄增长逐渐增加，达到峰值后趋于稳定。太行鸡和海兰灰蛋鸡淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶酶活性达到峰值的时间分别是：十二指肠为35、35、42和35、35、42d。空肠分别为21、35、35和28、35、35d。盲肠内纤维素酶为49、56d。（结论）太行鸡十二指肠和空肠淀粉酶、脂肪酶酶活性均比海兰灰蛋鸡低，差异显著（p0.05），胰蛋白酶酶活性比海兰灰高，差异显著（p0.05）；盲肠纤维素酶活性太行鸡明显高于海兰灰蛋鸡，差异极显著（p0.01）。两鸡种空肠内三种酶活性分别比十二指肠内高：太行鸡和海兰灰蛋鸡淀粉酶分别高9.2和8.2倍；脂肪酶分别高5.3和5.3倍；胰蛋白酶均高2倍。关键词：太行鸡；海兰灰蛋鸡；生长期； 酶（研究的重要意义）太行鸡原河北柴鸡，是河北省地方优良鸡种,具有蛋肉品质好，适应性强，耐粗饲，抗病力高等特性，深受养殖户和消费者喜爱，近年来，饲养量逐年增加。但是，由于缺乏对其消化特性等方面的研究,饲养技术参数多采用蛋鸡或黄羽肉鸡的标准。（前人研究进展）不同品种、不同阶段的家禽,消化酶活性有差异1,内源酶的不足会导致营养物质消化率的降低,影响家禽的生长及生产。动物体内的营养物质大部分是在小肠被消化吸收的，小肠内的淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶活水平反映机体对三大营养物质的消化能力2 3 4。（研究的切入点）本试验通过测定十二指肠和空肠内容物的淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶和盲肠内容物的纤维素酶活性，分析研究太行鸡生长期消化道主要酶系的变化规律，比较其与海兰灰蛋鸡的差异，（研究拟解决的关键问题）为科学合理地确定太行鸡营养需要提供依据。1 材料和方法1.1 试验动物及饲养管理1d太行鸡（河北赞皇天然农产品开发有限公司提供）和海兰灰蛋鸡（保定）各120只，每种鸡4个重复，每个重复30只。统一饲养管理，叠层式笼养，定时喂料，自由饮水。按照常规蛋鸡免疫程序进行免疫。试验期91天。地点在河北农业大学实验农场。1.2 日粮组成及养分含量日粮组成及养分含量见表1。表1 试验饲料配方及营养成分含量（风干基础）table 1composition and nutrient level of diet（air dry basis ） %饲粮成分0-6周龄7-13周龄营养水平0-6周龄7-13周龄玉米corn (cp8.7%)5860代谢能me(mj/kg)11.9611.79小麦wheat812粗蛋白cp18.0016.00小麦麸wheat bran35钙ca0.900.82大豆粕soybean meal (cp44.9%)18.516有效磷ap0.460.41棉粕53鱼粉(cp60.2%)20磷酸氢钙1.71.7石粉limestone11豆油soybean oil1.50食盐salt0.30.3生长鸡预混料premix1.01.0总计100100注：预混料可为每千克日粮提供：va 8500iu；vd3 2400 iu；vb1 1.20 mg；vb2 3.6mg；vb6 1.2mg；ve 20 iu；vb12 12 ug；vk3 2.4mg；泛酸10 mg；叶酸0.5 mg；烟酸26.7mg；胆碱450mg；铜8mg；铁64mg；锰64mg；锌48mg；碘0.45mg；硒0.3 mg。1.3 样品采集分别于5、9、14、21、28、35、42、49、56、63、77、91d每个重复屠宰2只。取各段消化道食糜分装后迅速放入液氮中，保存24h后转入 -800c冰箱保存待测酶活。1.4 测定指标及方法1.4.1 淀粉酶活性的测定原理：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，加入碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出淀粉酶的活力。淀粉酶活力单位：食糜中每毫克蛋白在37条件下与底物作用30分钟，水解10mg淀粉定义为一个酶活力单位。测定方法：参照淀粉酶试剂盒提供的方法测定（南京建成公司购买）。1.4.2 脂肪酶活性的测定原理：甘油三酯和水制成的乳胶，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状。胶束中的甘油三酯在脂肪酶作用下发生水解，使胶束分裂，散射光或浊度因而减低。减低的速度与脂肪酶活力有关。脂肪酶活力单位：在37条件下，每克组织蛋白在本反应体系中与底物反应1min，每消耗1mol底物为一个酶活力单位。测定方法：参照脂肪酶试剂盒提供的方法测定（南京建成公司购买）。1.4.3 胰蛋白酶活性的测定原理：胰蛋白酶能催化水解底物精氨酸乙酯的酯链，使其在253nm处吸光度值升高，根据吸光度的变化可以计算出酶的活力。脂肪酶活力单位：在ph为8.0,37条件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活力单位。测定方法：参照胰蛋白酶试剂盒提供的方法测定（南京建成公司购买）。1.4.4 纤维素酶测定原理：利用纤维素酶催化水解纤维素,产生纤维多糖、二糖及葡萄糖等还原糖,与显色剂反应,求出还原糖的浓度,间接求出酶的活力。纤维素酶活力单位：在50条件下,以1 min从底物溶液中分解产生1mol还原糖所需要的酶量定为1个酶活力单位。测定方法：用羧甲基纤维素钠盐法测定5。1.5 数据处理所有数据用sas(13.0)软件进行统计分析。数据用平均值标准差表示。p0.05差异不显著；0.01p0.05差异显著，p0.01差异极显著。2 结 果2.1 太行鸡和海兰灰蛋鸡淀粉酶活性的变化表2 5-91d太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠内淀粉酶（u/mg）table2 the amylase activity from duodenum and jejunum content in 5-91 days old taihang chicken and hailan layers（u/mg）日龄十二指肠淀粉酶空肠淀粉酶太行鸡海兰灰太行鸡海兰灰51.760.071.870.2015.210.6817.120.28*91.850.012.090.5616.741.9018.150.63141.580.202.280.4518.190.6019.500.30*211.970.082.761.21*21.570.3822.761.64*231.9121.121.4024.001.40352.571.113.330.54*20.690.9123.381.58*410.9220.911.4420.591.29492.190.072.890.63*21.360.9622.960.58562.190.382.770.54*21.021.3621.500.50632.550.363.010.7520.440.3421.101.74772.380.682.860.1720.631.0922.862.45912.470.383.070.4020.310.7522.171.56由表2可见，太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠淀粉酶活性先随日龄增加逐渐增加, 达到峰值后趋于稳定。但达到峰值的时间不同，十二指肠内均是35d；空肠内分别是21，28d。太行鸡十二指肠和空肠内容物中淀粉酶活力均比海兰灰蛋鸡低，十二指肠内第21、49、56d差异显著(p0.05)，第35d差异极显著(p0.01)，其他周龄均比海兰灰蛋鸡低，但差异不显著。空肠内第5、21、35d差异显著(p0.05)，第14d差异极显著(p0.01)，其他周龄均比海兰灰蛋鸡低，但差异不显著。空肠内酶活比十二指肠内高，太行鸡和海兰灰蛋鸡空肠内淀粉酶分别是十二指肠淀粉酶的9.2和8.2倍。2.2 太行鸡和海兰灰蛋鸡消化道脂肪酶的发育情况及比较表3 5-91d太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠内脂肪酶（u/g）table 3 the lipase activity from duodenum and jejunum content in 5-91 days old taihang chicken and hailan layers（u/g）日龄十二指肠脂肪酶空肠脂肪酶太行鸡海兰灰太行鸡海兰灰521.2312.4717.890.92114.66.75129.4018.88921.811.6122.311.23126.0313.87151.143.49*1425.541.8728.672.10123.2417.41141.4217.832130.352.9932.923.21132.9623.14171.1118.17 *2833.831.7134.552.88143.7328.51189.6026.88 *3536.361.1341.171.74*153.6437.82205.074.87 *4234.482.4240.021.93*146.6130.49193.6117.30 *4933.511.6139.611.65*140.9031.19187.9417.03 *5634.083.4937.040.89141.1225.94179.3111.85 *6332.712.3238.533.49*141.2630.14184.866.03 *7734.172.2539.201.43*142.5530.82191.422.65 *9134.502.5839.882.95*145.3629.11191.767.87 *由表3可见，太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠脂肪酶活性均随日龄增加逐渐增加, 达到峰值后趋于稳定。达到峰值的时间均是35d。太行鸡十二指肠和空肠内容物中脂肪酶活力均比海兰灰蛋鸡低，十二指肠内第42、63、91d差异显著(p0.05)，第35、49、77d差异极显著(p0.01)，其他周龄差异不显著。空肠内第5、14d差异不显著(p0.05)，其他周龄差异显著(p0.05)。空肠内脂肪酶活比十二指肠内高，太行鸡和海兰灰蛋鸡空肠内脂肪酶分别是十二指肠内的5.3；5.3倍。2.3 5-91d太行鸡和海兰灰蛋鸡消化道胰蛋白酶的发育情况及比较表4 5-91d太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠内胰蛋白酶（u/g）table 4 the trypsin activity from duodenum and jejunum content in 5-91 days old taihang chicken and hailan layers（u/g）日龄十二指肠胰蛋白酶空肠胰蛋白酶太行鸡海兰灰太行鸡海兰灰51160.4187.921121.19136.972292.46209.442041.3571.19 91242.47146.16897.86130.012828.58240.71 *2457.96124.10 141357.15135.21*1041.4197.503181.96168.44 *2621.71101.14 211245.47153.161208.84144.353507.07348.29 3097.15196.03 281648.69247.281305.35134.993636.39198.02 *3159.09242.27 351932.51113.541687.05123.343950.35310.49 *3270.58162.09 422234.92125.831949.30169.373692.32500.85 3016.83264.20 492097.02162.66*1743.41224.723445.53326.28 2995.86272.28 561967.55149.691660.7481.083348.24248.23 3190.91357.01 632032.19244.35*1781.1421.793602.76279.35 *2903.66176.63 771869.8586.561851.97120.873721.89465.11 *2918.77319.68 912055.16131.42*1755.81150.363802.01209.66 *3157.75157.10 由表4可见，太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空胰蛋白酶活力均随日龄增加逐渐增加, 达到峰值后逐渐降低或趋于稳定。达到峰值的时间是十二指肠均在42d，空肠均在35d。太行鸡十二指肠和空肠内容物中胰蛋白酶活力均比海兰灰蛋鸡高，十二指肠内第49、63、91d差异显著(p0.05)，第14d差异极显著(p0.01)，其他周龄差异不显著。空肠内第9、28、77d差异显著(p0.05)，第14、35、63、91d差异极显著(p0.01)，其他日龄差异不显著。 空肠内胰蛋白酶活比十二指肠内高，太行鸡和海兰灰蛋鸡空肠内胰蛋白酶分别是十二指肠内的2.0倍，2.0倍。 2.4 太行鸡和海兰灰蛋鸡盲肠内纤维素酶的发育情况及比较图4 太行鸡和海兰灰蛋鸡盲肠内容物中纤维素酶fig 4 the cellulase activity from caecum content in 5-91 days old taihang chicken and hailan layers如图4所示，纤维素酶活性随鸡日龄的增加而逐渐增加,并于42、56d达到峰值。达到峰值后趋于稳定。表5 591d盲肠内容物中纤维素酶活力（u/g）table 5 the cellulase activity from caecum content in 5-91 days old taihang chicken and hailan layers（u/g）d5914212835太行鸡0.450.01*0.820.1*0.860.08*0.930.05*1.850.10*1.610.08*海兰灰0.350.010.570.110.470.090.430.000.530.030.480.11周龄424956637791太行鸡1.430.10*2.090.41*1.800.04*1.820.05*1.830.05*1.730.13*海兰灰0.510.040.740.110.740.130.680.110.730.09b0.710.19b由表5可见，太行鸡盲肠内容物中纤维素酶的活力比海兰灰蛋鸡高，第5d差异显著(p0.05)，6-91d差异极显著(p0.01)。 3 讨 论3.1 十二指肠、空肠内消化酶的发育情况 krogdahl等(1989)认为,胰腺合成的各种消化酶只有分泌到畜禽消化道内,并以激活状态存在才对畜禽的养分消化具有实际意义6。因此,以消化道内酶活水平为参比,才能够真正反映出畜禽消化道酶活随日龄的发育情况。本试验中所测十二指肠和空肠内食糜的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活均随日龄增加而提高,然后趋于稳定。各种酶活发育的总体趋势与nitsan等7 (1991)、安永义等8（1999）和张铁鹰等9（2005）报道相似。但个各酶活达到峰值的时间不一致。在本研究中太行鸡和海兰灰鸡空肠内淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶达到峰值的时间是空肠分别为21、35、35和28、35、35d。而在nitsan等(1991)和安永义等(1999)等的试验中分别为17、23、14和21、10、21d。在张铁鹰等（2005）的试验中分别是35、14和21d。这可能与试验期及肠道采样部位不同以及试验动物品种有关。shires10等,1987食糜在空肠内的停留时间远远大于十二指肠,与测定胰腺和整段小肠内的酶活水平相比,利用空肠内消化酶活水平来研究鸡消化道酶活发育情况更为合理。在本研究中空肠内的淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的发育趋势与十二指肠基本一至。但各酶活水平均比十二指肠高。淀粉酶高9.2倍，8.2倍；脂肪酶高5.3倍，5.3倍；胰蛋白酶高2.0倍，2.0倍。这与hurwitz等11 (1972) ,大部分饲料养分的消化和吸收也主要是在空肠内完成是一致的。淀粉酶可能是限制肉仔鸡生长的主要酶活因素12。周怀军等12研究不同品种肉用鸡种血浆淀粉酶活性和体重的关系,得出淀粉酶活性越高,鸡生长速度越快的结果。本试验中海兰灰蛋鸡淀粉酶活比太行鸡高，生长速度比太行鸡快。 家禽中参与消化脂肪的消化酶主要有腺胃壁分泌的胃脂酶和十二指肠分泌的肠脂酶13。本次试验测定的脂肪酶活是这几种酶酶活的总和。本试验中太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠内脂肪酶均在35d达到峰值。说明太行鸡和海兰灰蛋鸡脂肪酶的发育是基本一致的。但各日龄的酶活水平均比海兰灰蛋鸡低，说明太行鸡对脂肪的消化能力比海兰灰蛋鸡低。胰蛋白酶在蛋白质的水解过程中起重要作用,饲料氨基酸消化主要取决于胰蛋白酶14。胰蛋白酶在ph为7-9时活性最高12,有利于胰蛋白酶自我催化激活和肠激酶催化胰蛋白酶原转变成胰蛋白酶15，太行鸡十二指肠和空肠中胰蛋白酶水平均比海兰灰蛋鸡高，说明太行鸡有较高的蛋白质消化的能力。这可能是太行鸡适应长期采食虫、草籽等高蛋白食物的结果。3.2 盲肠内容物中纤维素酶活太行鸡盲肠内容物中纤维素酶活力显著高于海兰灰蛋鸡，这可能是柴鸡适应野外植物草食的结果，这就从理论上解释了为什么太行鸡能消化粗纤维含量高的食物，而海兰灰蛋鸡不能。但太行鸡能利用日粮中多少粗纤维有待进一步研究。 4 结 论 太行鸡和海兰灰蛋鸡十二指肠和空肠内淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶发育趋势相似，随日龄的增长逐渐升高达到峰值后趋于稳定。 太行鸡和海兰灰蛋鸡空肠内的各酶活均比十二指肠内各酶活高。淀粉酶高9.2倍，8.2倍；脂肪酶高5.3倍，5.3倍；胰蛋白酶高2.0倍，2.0倍。 5-91d太行鸡淀粉酶活力均比海兰灰蛋鸡低；脂肪酶比海兰灰蛋鸡低；胰蛋白酶比海兰灰蛋鸡高。但日龄不同有的差异的显著，有的差异不显著。 5-91d太行鸡盲肠内纤维素酶均比海兰灰蛋鸡高，除5日龄差异显著，其他日龄差异极显著(p0.01)。参考文献：1noy y, sklan d. digestion and absorption in the young chicksj. poult sci, 1995, 74: 366-373.2 moran et.j.poultry sci.1983，61:1257一12673 krogdahl a, jerry l s. influence of age on liase,amylase and protease activities in pancreatic tissueand intestinal contents of young turkeys. poul sci,1989, 62:2106-21084 seheneen bo.j.proc soc enp bio mod，1975，148:897一9035 stellmach b著.酶的测定方法m.钱嘉渊译.北京:中国轻工业出版社, 19926 krogdahl a, et al.poultry science, 1989,68:15611568.7 nitsan z, et al.british poultry science, 1991,32:515523.8 安永义,周毓平,呙于明,等. 0-3周肉仔鸡消化道酶发育规律的研究j.动物营养学报, 1999, 11(1): 17-24.9 张铁鹰等，049日龄肉仔鸡消化参数的变化规律研究j. 中国畜牧兽医，2005（32）：6-1010 shires a, et al.poultry science, 1987,66:289298.11 hurwitz s,et al.am j clin nutr,1972,25,311.12 周怀军,周勤宣,赵万里.鸡血液中同功酶与体重的相关研究j.中国家禽, 1994, (2): 17-1913 斯托凯.禽类生理学m.第3版,北京:科学出社, 1982. 192194.14 袁建敏,呙于明.蛋公鸡和肉仔鸡蛋白消化酶活性及饲料氨基酸消化率的比较研究j.中国农业大学学报, 2001, 6(1):104109.15 樊红平.鸡鸭对饲料养分消化作用的比较研究d.北京:中国农业科学院. 2003.68.taihang chicken, hy-line layer growth phase variation of digestive enzymes comparative study wangjuan ,zangsu-min, yuanna ,xiyan-ju, liqing-kai, lili1college of animal science and technology, agricultural university hebei, baoding hebei 071001abstract:(objective)the experiment aimed to study digestive physiological characteristics of the taihang chicken. (method) 120 taihang hens and 120 hy-line layer hens with the same old(1-day-old) were randomly allocatted into 2 groups with 4 replicates and 30 birds each replicate(15 female,15 male). on 5,9,14,21,28,35,42,49,56,63,77and 91 days, the activitys of amylase, lipase, trypsin and cellulase in the duodenum and jejunum contents were determined and the rule of change were analysed respectively. (result)the results showed: two kinds of chicken digestive enzymes activity increased with age until the peak value tended to stabilize.taihang chicken and hy-line ash layers amylase, lipase, trypsin activity in peak time are: duodenum for 35,35,42 and 35,35,42 days. jejunum, respectively 21,35,35 and 28,35,35 days. caecum of cellulose enzyme for 49,56 days. (conclusion)taihang chicken duodenum and jejunum amylase, lipase activity than those in hy-line ash layers is low, (p 0.05), trypsin activity in the taihang chicken higher than in the hy-line, (p 0.05 ). the cecum cellulase activity of taihang was significantly higher than the hy-line layers of chicken, (p 0.01).two kinds of chicken jejunum, respectively, within three kinds of activity are higher than in the duodenum: amylase taihang chicken and hy-line layers 9.2 and 8.2 times higher, respectively; lipase were 5.3 and 5.3 times as high; trypsin were 2 times higher .key word: taihang chicken , hy-line layers, growth period , enzyme我的大学爱情观目录：1、 大学概念2、 分析爱情健康观3、 爱情观要三思4、 大学需要对爱情要认识和理解5、 总结1、什么是大学爱情：大学是一个相对宽松，时间自由，自己支配的环境，也正因为这样，培植爱情之花最肥沃的土地。大学生恋爱一直是大学校园的热门话题，恋爱和学业也就自然成为了大学生在校期间面对的两个主要问题。恋爱关系处理得好、正确，健康，可以成为学习和事业的催化剂，使人学习努力、成绩上升；恋爱关系处理的不当，不健康，可能分散精力、浪费时间、情绪波动、成绩下降。因此，大学生的恋爱观必须树立在健康之上，并且树立正确的恋爱观是十分有必要的。因此我从下面几方面谈谈自己的对大学爱情观。2、什么是健康的爱情：1) 尊重对方，不显示对爱情的占有欲，不把爱情放第一位，不痴情过分；2) 理解对方，互相关心，互相支持，互相鼓励，并以对方的幸福为自己的满足; 3) 是彼此独立的前提下结合；3、什么是不健康的爱情：1)盲目的约会，忽视了学业;2)过于痴情，一味地要求对方表露爱的情怀，这种爱情常有病态的夸张;3)缺乏体贴怜爱之心，只表现自己强烈的占有欲;4)偏重于外表的追求;4、大学生处理两人的在爱情观需要三思：1. 不影响学习：大学恋爱可以说是一种必要的经历，学习是大学的基本和主要任务，这两者之间有错综复杂的关系，有的学生因为爱情，过分的忽视了学习，把感情放在第一位；学习的时候就认真的去学，不要去想爱情中的事，谈恋爱的时候用心去谈，也可以交流下学习，互相鼓励，共同进步。2. 有足够的精力：大学生活，说忙也会很忙，但说轻松也是相对会轻松的！大学生恋爱必须合理安排自身的精力，忙于学习的同时不能因为感情的事情分心，不能在学习期间，放弃学习而去谈感情，把握合理的精力，分配好学习和感情。3、 有合理的时间；大学时间可以分为学习和生活时间，合理把握好学习时间和生活时间的“度”很重要；学习的时候，不能分配学习