流感疫苗是怎样炼成的ppt课件

| 1 高质量流感疫苗 是怎样“炼”成的？ -流感疫苗的生产工艺与质量控制 舒俭德 MD MBA 赛诺菲巴斯德 | 2 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 o1933年：首次在雪貂身上分离到甲型流感病毒 o1936年：鸡胚培养流感病毒获得成功 o1941年：全病毒灭活流感疫苗在美国首次获得批准 o1945年：在美国开始广泛应用，由位于宾夕法尼亚州Swiftwater的Pocono生物制 药公司生产 o1968年：流感病毒裂解疫苗上市，由法国巴斯德研究所和梅里厄研究所生产 流感疫苗研发历史 张延龄等 疫苗学 科学出版社 1176页 | 3 脂质层 血凝素(HA ) 神经氨酸酶(NA ) 核衣壳 基质蛋白 全病毒疫苗 亚单位疫苗 裂解疫苗 流感疫苗种类 | 4 外抗原 内抗原 | 5 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 鸡胚接种和孵化 灭活流感疫苗的三大生产步骤 原液生产和检定分装和包装 | 6 疫苗生产的特点及其质量控制原则 | 7 特点为什么如何质量控制 成分的多样性 不同种类的疫苗（如流感疫苗）含有不同的成分，有 时难以用理化方法定量和定性，用生物学技术和分析 方法检测的结果，变异范围往往大于理化测定方法 通过测定生物学效价来测定其抗原含量 建立方法的标准化，并用同一参照品校 准 生产起始物料的生 物活性 病毒种子：其固有的可变性和生产过程中可能引起的 变化，会直接或间接影响疫苗的质量 毒种筛选原则：安全性、免疫原性、遗 传学稳定性和生产适用性（由WHO推荐 和提供流感疫苗毒株） 细胞培养：可能存在动物原性病原体的污染风险，如 鸡胚细胞可能被污染禽白血病病毒 原材料质量控制（专属养鸡场和现代化 管理） 细胞培养基：动物来源原材料存在潜在安全隐患，如 牛血清的疯牛病治病因子风险 改用人工合成无动物蛋白（APF）培养 基 生产过程的复杂性 可能的污染物（外源的）： 动物细胞培养过程中可 能搜到病毒、细菌、真菌和支原体污染 严格的生产过程质量控制（GMP） 可能的残留杂质（内生的）：细胞培养产物中 可能 含有DNA、宿主蛋白质、内毒素和细胞代谢产生的蛋 白质 严格的产品质量控制（对原液、半成品 和终成品的检定） 流感疫苗生产用鸡 胚的要求 毒种传代和制备用鸡胚应来源于SPF鸡群 疫苗生产用鸡胚（蛋）应来源于封闭式房舍内 饲养的健康鸡群 选用911日龄无畸形、血管清晰、活动鸡胚 专属农场饲养+现代化管理 全程跟踪的鸡群健康监控计划 先进的鸡胚孵化中心 资料来源： 王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第13页 | 8 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 “三代单传”的优种鸡胚 | 9 流感疫苗的生产从选择鸡蛋开始 流感疫苗生产工艺 运输 疫苗工厂 祖父母代鸡群选种 （种蛋） 上游供应商 父母代鸡苗 父母代母鸡 （受精） 父母代产受精蛋 （25周） 胚蛋孵化 （9-11天龄） 鸡蛋供应商 饲养阶段生产阶段孵化 选种优良 品系证明 祖父母代 无禽白血病污染鸡苗 专属农场饲养+现代化管理 全程跟踪的鸡群健康监控计划 先进的鸡胚孵化中心 专属农场+现代化管理 | 10 要求如何做为什么 专属农场 鸡场选址在与世隔绝的山区，方圆几公里内没有 其他禽类农场，也没有池塘和湖 降低外部环境污染养鸡场的风险 全封闭式鸡场：对鸡舍的封闭和对饲养人员的封 闭管理 避免与外界病原体接触（如禽流感） 现代化 管理 自动化环境监控温度、通风系统提高鸡群生活舒适度 大笼3平米养40只鸡，一只鸡有720cm2 自然交配人性化饲养，避免因人工受精而造成交叉污染 定时灯光管理调整“体成熟”和“性成熟”时间，保证母鸡在 正确的时间（25周）产下符合标准的受精蛋 全程跟踪的鸡群健康监控计划和孵化工艺 | 11 要求如何做为什么 全程跟踪的鸡群健康监控 计划 定时体检（每周取样) 鸡群的疫苗接种计划保证鸡群健康鸡新城疫 鸡传染性气管炎 禽脑脊髓炎 鸡传染性喉气管炎 鸡马立克病 鸡毒支原体 沙门菌 鸡白痢 禽滑液囊支原体 禽流感 先进的孵化工艺 孵化中心启用前要采取相应监控措施（如确保无沙门氏菌方可 接收种蛋） 从鸡舍收集的鸡蛋在鸡舍要进行福尔马林熏蒸 送到孵化中心还要进行一次筛选（剔除脏蛋，裂纹蛋，轻重蛋 ） 对孵化过程全程记（温湿度、翻蛋等） 保证生物安全，确保可 追溯性 在养鸡场对鸡胚100%全检 外观、洁净度、无微生物污染 蛋壳完整性、气室位置、鸡胚活力 胚龄、胚胎发育情况、胚重 胚蛋重量及蛋壳表面微生物 确保与欧盟同等质量标 准 | 12 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 流感疫苗生产流程 6个阶段22个步骤， 用于质控的时间70%1 每个批号100多个检测点 400多个检测参数2 1.Sanofi Pasteur internal data. 2.Data on file Sanofi Pasteur. 病毒培养 病毒收获 纯化 裂解 灭活 终过滤 单价流感原液 QC QC QC QC QC QC QC | 13 优化纯化、裂解和灭活工艺，提高产品安全性 先纯化后裂解再灭活工艺，降低因灭活致白蛋白结构改变而产生致敏性的风 险 独特的二次区带离心技术，利用病毒颗粒与杂质在介质中的不同分布，以蔗糖密 度梯度离心方式纯化病毒1（如去除流感病毒脂质层） 应用辛苯醇醚-9（Triton X-100）作为裂解剂，有助于去除内毒素，充分优化疫 苗的安全性和免疫效果2 采用甲醛灭活：甲醛对病毒核酸和病毒蛋白质都有破坏作用,它使分子间产生共 价键，使蛋白分子无法再改变其空间构型,这使病毒无法感染新的细胞及复制3 1.王军志：疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第642页 2. Delore V,et al. Vaccine 2006; 24(10):1586-92 3.疫苗灭活/html/2009/0212/64564.php | 14 不同工艺的比较 1 王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第642页 2. Delore V,et al. Vaccine 2006; 24(10):1586-92 3.灭活剂百度文库： /link?url=zILEtrdi5lvCs_gsl_ONAzj1L6iyhQHElwPikcVmSRWaKLoV_sLUZg_RjtHpjEn5pr9d7Uak2wUhbWUPJMHnnEEtxSGSPt0CSyolo6WYJIe | 15 工艺技术优点缺点 生产流程1 先灭活后纯化首先灭活病毒和污染的其它微生 物，然后在较为安全的条件下进 行后续工艺 灭活剂用量大，增加去除残余量难 度；可能与其它分子也形成共价键 而产生大分子结构在后续的纯化中 难以去除 先纯化后灭活经纯化和裂解后的病毒更加容易 灭活，灭活剂用量少 先纯化时可能损失有用抗原，故需 要生产的抗原量大，成本高 裂解剂2 聚山梨酸酯80 （吐温80） 裂解效果良好有机溶剂，需要使用乙醚，乙醚不 稳定，易挥发，易爆（工业风险） 三硝甲基苯 （Triton X- 100) 非离子型表面活性剂，裂解效果 良好，工业操作容易，且对去除 内毒素有帮助 无资料 灭活剂3 -丙内酯在液体中完全水解，无残留不稳定，易挥发，在空气中有毒性 甲醛灭活效果良好，工艺成熟需要严格去除残留游离甲醛 “有图有真相” | 16 裂解前：可见完整病毒裂解后：病毒完全分解，蛋 白片段均匀分布于介质中， 未见蛋白聚合体 过程控制：严格控制批内差异和批间差异 | 17 中国药典与欧洲药典比较（摘要） （资料来源：王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第646页） 项目（成品中）中国药典欧洲药典/SP标准 总蛋白含量400g/ml300g/ml 卵清蛋白含量500ng/ml400ng/ml 硫柳汞（防腐剂）含量100g/ml无（SP标准） 抗生素残留量50ng/剂50ng/剂（SP标准） 鉴别 试验 病毒灭 活验证 血凝素 含量 无菌 检查 内毒素 含量 蛋白质 含量 裂解剂 残留量 卵清蛋 白含量 游离甲 醛含量 抗生素 残留量 异常毒 性检查 单价 原液 + 半成品 + 终成品 + （资料来源：SP流感疫苗鉴定规程） SP内部放行检测 | 18 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 生物安全和环境保护 生物安全 BSL2（生物安全二级标准）的厂房设计，确 保流感病毒不会释放到周边环境中 采用多组HVAC空调系统分区管理，通过气压 设计合理设计气流流向，有效防止污染和交 叉污染 FM Global公司 的“HPR”认证（可以承受 八级地震，十二级台风的侵袭） | 19 环境保护 自建废水处理站 所有BSL2区域产生的废弃物（废鸡蛋）经过 热处理杀灭病毒，再由环保部门指定专业公 司做焚毁处理 | 20 疫苗上市后不良反应监测和评价 疫苗上市后不良反应监测必要性1 上市前动物实验的局限性 : 动物无法反应人体的自觉反应，毒理试验动物数量有限，人与动物模型的差异 上市前临床试验研究的局限性： 病例数少，研究时间短，受试人群范围较窄 1.王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第340页. 2.武文娣等 中国2011年疑似预防接种异常反应监测数据分析 中国疫苗和免疫 2013年4月第19卷第2期 第97-109页 AEFI非严重AEFI严重AEFI一般反应异常反应 例数发生率例数发生率例数发生率例数发生率例数发生率 流感 疫苗 200 316.15197 115.89320.26182 014.6711725.39 DTaP29 26741.0829 14640.911210.1727 93539.211 1871.67 2011年流感疫苗AEFI报告例数和报告发生率2 （/10万剂） 最常见症状（/10万剂）： 过敏性皮疹 （0.74），血管性水肿（0.12），热性惊厥（0.06），过敏性紫癜（0.06），ITP（0.02） ，GBS（0.02），过敏性休克（0.01），喉头水肿（0.01），无菌性脓肿（0.01），淋巴管炎 （ 0.01），ADEM（0.01） | 21 全球及中国的定期安全性更新报告（PSUR） 在全球（含中国），自2007年5月1日至2012年4月30日， Vaxigrip的销量约3亿4千万剂 共收到不良事件报告3295例，不良事件报告率为9.7/100万* 其中严重不良事件1495例，非严重不良事件1800例 没有任何安全性问题或可疑的安全信号被提出 *Sanofi Pasteur Period Safety Update Report *武文娣等 中国2011年疑似预防接种异常反应监测数据分析 中国疫苗和免疫 2013年4月第19卷第2期 第97-109页 在中国，自2007年1月1日至2011年12月31日，进口销售凡尔灵疫 苗约2千7百万剂 公司药物警戒部门共计收到不良事件书面报告153例，不良事件报告 率为5.6/100万*（中国流感疫苗AEFI报告发生率161.5/100万*） 最常见的接种后不良事件是轻中度的一过性发热、局部红肿、疼痛等 ，皮疹及过敏反应次之。 大多不良事件的程度均为轻微和中等，通常在接种后一天发生，三天 内恢复。 | 22 全球及中国开展的上市后临床试验 在全球(除中国），自2001年以来，共有41项含有Vaxigrip 的研究 ，在22个国家开展： 法国 (18), 比利时(4), 德国 (4), 英国(4) 意大利 (1), 西班牙 (1), 瑞士 (5), 芬兰 (3), 立陶宛 (4), 捷克 (1), 奥地利 (1), 俄罗斯 (1), 乌克兰 (