疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织lxrα mrna及蛋白表达的影响

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织 LXR mRNA 及蛋白表达的影响及蛋白表达的影响 来源：创新医学网 作者：杨钦河,王文晶,冯高飞,何秀敏,张玉佩 作者单位：暨南大学医学院，广东 广州 510632 【摘要】目的探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织 LXR mRNA 及蛋白表达的影响。方法选用 SD 大鼠 55 只，随机分为正常组、模型组、疏肝组(灌服 3.2 gkg- 1d-1 剂量的柴胡疏肝散)、健脾组(灌服 10.0 gkg-1d-1 剂量的参苓白术散)、综合组(灌服 11.9 gkg-1d-1 剂量的柴胡疏肝散和参苓白术散合方)，模型组 15 只，其余各组 10 只。采用灌饲高 脂肪乳剂(10 ml/kg)的方法复制大鼠 NAFLD 实验动物模型，给药 8 w 后处死动物，腹主动脉采 血，用全自动生化分析仪检测血脂及肝功;常规 HE 染色观察肝组织病理变化;RT-PCR 方法检测 肝组织 LXR mRNA 的表达;免疫组织化学方法检测肝组织 LXR 蛋白的表达。结果 与正常组 相比，模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显，血脂及肝功均有不同程度的升高(P0.05)，其中各药物干预组组间比较，差异无 统计学意义(P0.05);各药物干预组大鼠血清 TC、TG 含量均明显下降(P0.05);各用药组大鼠肝组织 TC 含量明 显降低(P0.05)。见表 1，表 2。 2.3 肝组织 LXR mRNA 的表达 各组大鼠肝组织 LXR mRNA 均有不同程度的表达，模型组表达最高，与正常组比较有显 著性差异(P0.05)，但两者与综合组比较均明显降低(P0.05)。提示高脂肪乳剂可 诱导大鼠肝组织 LXR 蛋白表达升高;疏肝健脾方药能下调 NAFLD 大鼠肝组织 LXR 蛋白表达 水平，以健脾组表达最低，健脾方可能发挥了更为明显的作用。见表 3，图 3。表 2 各组大鼠 肝组织 TC、TG 含量的比较表 3 各组大鼠肝组织 LXR mRNA 及蛋白的表达 1：正常组;2：模 型组;3：疏肝组;4：健脾组;5：综合组图 2 各组大鼠肝组织 LXR mRNA 的表达图 3 各组大鼠 肝组织 LXR 蛋白免疫组化图片(DAB，200) 3 讨 论 NAFLD 的典型特征是肝脏脂肪积聚，各种原因引起肝脏内脂质代谢自稳的破坏致使脂质 在肝内异常沉积，是肝脂肪变性的共同机制，也是 NAFLD 发病机制中最基础、最关键的环节 之一12。肝 X 受体(LXRs)是孤核受体家族的成员,因在肝脏表达丰富而命名。LXRs 分为 LXR 及 LXR 两种亚型,均能被内源性配体氧化固醇或人工合成配体激活后,与类视黄醇 X 受体 (RXR)结合形成异二聚体，LXRs/RXR 异二聚体通过与靶基因中称为 LXR 反应元件(LXRE)的特 定核苷酸序列结合而调节该基因的转录，从而影响机体的生理活动3。近年来研究发现 LXR 在肝脏中表达最为丰富，可以感知肝细胞内氧化甾醇的含量,是调控肝脏脂质代谢的重要 核转录因子，也是目前为国内外学者所关注的脂代谢通路的关键信号转导因子，与 NAFLD 密 切相关13。另有研究发现，LXR 在脂肪的生成、氧化、分泌、脂质过氧化及炎症因子的 生成等多环节发挥作用，并且在同一环节中，由于其结合于不同的靶基因上，可能表现为相反 的结果。LXR 是一把双刃剑，一方面，通过上调固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪 酸合成酶(FAS)、碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)等基因的表达，促进脂肪酸的从头合 成及抑制脂酸的 氧化，从而使 TG 在肝细胞内蓄积和增加 ROS 产生，导致 NAFLD 的形成与 进展14;另一方面，通过上调脂蛋白脂肪酶(LPL)、磷脂转移蛋白(PLTP)、胆固醇-7 羟基 (CYP7A1)等基因的表达和拮抗 NF-B 炎症信号通路，促进脂肪酸的 氧化、VLDL 合成与分 泌和抑制炎症因子的生成，防止 NAFLD 的发生和发展15。LXR 究竟在对 NAFLD 起着保 护作用，还是作为恶化因素推动疾病的进展尚未明确。本实验研究结果说明高脂乳剂可能在蛋 白和基因两个水平上调肝脏 LXR 的表达，这与相关研究结果相一致16。进一步提示了 LXR 可能在促进 NAFLD 的发生发展中具有重要的作用和意义。 中医学认为，脂质属于精微物质的范畴，为人体新陈代谢所必需，这种精微物质来源于饮 食水谷，而饮食物的消化吸收、水谷精微的输布代谢，有赖于脾之运化功能与肝之疏泄功能， 二者相互协调、相互为用维持动态平衡，即脂质代谢自稳态。研究发现6，从初期到中期的 NAFLD 患者多为肝郁脾虚证,以疏肝、健脾法作为基本治法,运用经典方柴胡疏肝散及参苓白术 散加减治疗 NAFLD 收到了较好的效果。本实验证明疏肝健脾方药能调节 NAFLD 大鼠脂质代 谢,降低大鼠血清及肝组织 TC、TG 的含量,改善肝脏病理受损;目前，肝功能检查主要是指反映 肝细胞损伤项目的血清酶学检测，药物组血清 ALT、AST 降低，提示疏肝健脾方能够改善大鼠 NAFLD 肝郁、脾虚症状，对肝细胞膜、线粒体膜有保护、修复和稳定作用，能够促进 NAFLD 大鼠肝细胞的恢复。与模型组比较，各药物组 LXR mRNA 及蛋白表达均有显著降低，其中以 健脾组最为显著，表明疏肝健脾方药可能是通过下调 LXR mRNA 及蛋白的表达水平而改善 NAFLD 大鼠肝脏脂质代谢异常状态，发挥了较好的防治 NAFLD 的作用。提示肝郁脾虚在 NAFLD 发生发展过程中可能具有重要的作用，LXR 可能是疏肝健脾方药发挥作用的重要靶点 之一，其详细机制尚需进一步探讨。 【参考文献】 1 Fan JG，Farrell GC.Epidemiology of non-alcoholic fatty liver disease in ChinaJ.J Hepatol,2009;50(1):204-10. 2 Manco M，Bottazzo G，Devito R，et al.Nonalcoholic fatty liver disease in childrenJ.J Am Coll Nutr,2008;27(6):667-76. 3 Oosterveer MH，Grefhorst A,et al.The liver X receptor:control of cellular lipid homeostasis and beyond implications for drug designJ.Pro Lipid Res,2010;49(4):343-52. 4 Chen J，Zheng RD,et al.Expression and significance of liver X receptor-alpha in fatty liver disease in ratsJ.Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi,2009;23(4):265-8. 5 Beltowski J.Liver X receptors (LXR) as therapeutic targets in dyslipidemiaJ.Cardiovasc Ther,2008;26(4):297-316. 6 杨钦河,陈同炎,李 娜,等.疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织 UC P2 mRNA 及蛋白表达的影响J.安徽中医学院学报，2010;29(2)：56-9. 7 李玉权,杨钦河,谢维宁,等.疏肝健脾治法治疗非酒精性脂肪肝 35 例J.中医杂志, 2007;8(9):824-5. 8 杨钦河,谢 芳,王凤珍,等.不同治法方药对脂肪肝大鼠肝组织 NF-Bp65 及 Kupffer 细胞 p38MAPK 蛋白表达的影响J.广州中医药大学学报,2009;26(2):141-7. 9 杨钦河,欧 健,孙升云,等.疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞 PI3Kp85 蛋白 表达的影响J.广东药学院学报,2009;25(1):62-7. 10 段富津.方剂学M.上海：上海科学技术出版社,1995：114，115，178，179. 11 Zou YH，Li J，Lu C，et al.High-fat emulsion-induced rat model of nonalcoholic steatohepatitisJ.Life Sci,2006;79(11):1100-7. 12 丁晓东，范建高.非酒精性肝脂肪变性和脂肪性肝炎的发生机制J.现代消化及介入诊 疗,2009;14(4):237-42. 13 Giovanni Musso，Roberto Gambino，Maurizio Cassader.Recent insights into hepatic lipid metabolism in non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD)J.Prog Lipid Res，2009;48:1-26. 14 Zhao-Xia Yang，Wei Shen，Hang Sun.Effects of nuclear receptor FXR on the regulation of liver lipid metabolism in patients with non-alcoholic fatty liver diseaseJ.Hepatol Int，2010;4:741- 8. 15 Zhang-Gandhi CX，Drew PD.Liver X rece