《仪器分析》课程提纲200608

仪器分析课程提纲(农、生) 第一章 绪论 1、什麽是仪器分析？ 一般的说，仪器分析是指采用比较复杂或特殊的仪器设备，通过测量物质的某些物理 或物理化学性质的参数及其变化来获取物质的化学组成、成分含量及化学结构等信息的一 类方法。 2、仪器分析与分析化学、化学分析关系 分析化学包括化学分析和仪器分析两大部分。化学分析是分析化学的基础。仪器分析 是分析化学的发展方向。测量常量组分常用化学分析，而测量微量或痕量组分时，则常用 仪器分析。 3、分析化学的三个发展阶段 阶段一： 20 世纪 40 年代前，由“技艺”上升到科学理论，化学分析占主导地位，仪器分 析种类少和精度低；标志工具是：天平的使用。 阶段二：特点： 20 世纪 40 年代后，由“分析技术科学”上升到“化学信息科学”。化学 分析与仪器分析并重，仪器分析自动化程度低；标志工具是：大量电子分析仪器、仪表的 使用。 阶段三： 20 世纪 70 年代末至今，由“化学信息科学”上升到“系统信息科学” 。标志 工具是：微型计算机控制的现代智能型分析仪器的大量使用。高效率、微观化、微量化和 自动化是现代分析化学的特色。 4、仪器分析的分类 分子光谱：紫外-可 见 化学分析-基础 光学分析法 光谱分析 检测技术 非光谱分析 原子光谱：原子吸收 分析化学 仪器分析-发展方向 电化学分析-电位分析法，电导分析法 气相色谱 分离技术 色谱分析 超临界流体 高压液相色谱 液相色谱 （氨基酸分析） 电泳分析：毛细管电泳法 薄层色谱 5、仪器分析的分析过程为： 分析技术 通过分析方法 来实现 ，用分析过程 来描述 。 6、分析仪器的基本结构-不管何种类型分析仪器，一般他们均由 信号发生器、检测器、信 号处理器和读出装置四个基本部分组成。 第二章 电化学分析导论 1、电化学分析：利用溶液的电化学性质，通过电极把被测物质的浓度转化成一种电学参量而加以测量的 方法。 电位分析法是利用电极电位和浓度的关系来测量被测物质浓度的一种电化学分析法。 直接电位法是利用专用的指示电极（如离子选择电极）把被测物质的浓度变为电极电位值。然后，根据能 斯特方程式，从测得的电位值计算出该物质的含量。 电位滴定法是向试液中滴加能与被测物质发生化学反应的已知浓度的试剂，利用指示电极电位的突变来指 示滴定终点的一种容量分析法。 2、几个基本概念：、几个基本概念： （ 1） 相界相界 电电 位位 ： 两个不同物质相接触的界面上的电位差两个不同物质相接触的界面上的电位差 . （2）液接 电电 位： 两个组成或浓度不同的电解质溶液相接触的界面间所存在的微小电位差，称两个组成或浓度不同的电解质溶液相接触的界面间所存在的微小电位差，称 。 （3）金属 电电 极的极的 电电 极极 电电 位： 金属电极插入含该金属的电解质溶液中产生的金属与溶液的相界金属电极插入含该金属的电解质溶液中产生的金属与溶液的相界 电位，称电位，称 。 Zn Zn2+ 双电层双电层 动态平衡动态平衡 稳定的电位稳定的电位 差差 （4）电电 池池 电动势电动势 ：构成化学电池的相互接触的各相界电位的代数和，称构成化学电池的相互接触的各相界电位的代数和，称 。E（）= + - + L （5）化学 电电 池： 一种电化学反应器，由两个电极插入适当电解质溶液中组成。一种电化学反应器，由两个电极插入适当电解质溶液中组成。 原原 电电 池池 ： 将化学将化学 能转化为电能的装置（自发进行）能转化为电能的装置（自发进行） 3、指示电极：能指示溶液中离子的浓度的电极。 参比电极：在一定条件下，电极电位是恒定的，并且已知的电极。 4、指示电极的分类，金属基指示电极（电子得失）与薄膜电极的电极电位（离子交换和扩散）是如何产 生的？ 5、电极电位如何测量。E（）= + - + L 6、电位分析的理论基础：能斯特（Nernst）方程。利用电极反应写出 Nernst 方程，注意 25时 2.303RT/F=0.059。 电极反应：Hg2Cl2(s) + 2e = 2Hg(l) + 2Cl- 电极电位： = 02.303 RT F* lg a Cl- 电极反应：AgCl+ e = Ag+ Cl- 电极电位： = 02.303 RT F*lg a Cl- 电极反应：Fe3+ +e= Fe2+ 电极电位: = 0+2.303 RT F*lg （aFe3+ aFe2+） 电极反应为： Ag+ e= Ag 电极电位为: = 0+2.303 RT F* lg a Ag+ 第三章 电位与电导分析法 1、电位分析法、直接电位法、电位滴定法定义 离子选择电极：是一种电化学传感器，它能对溶液中的特定离子产生选择性的响应，其 电位值与溶液 中特定离子活度的对数值呈线性关系。 2、膜电位是如何产生的（膜电位的产生并不是由于电子的得失和转移，而是由于离子的交换和扩散的结 果） ，膜电位与溶液 pH 值的关系 E 膜 = K+2.303 RT F lg a H+（试） = K 2.303 RT F pH 在一定温 度下，玻璃电极的膜 电位与溶液的 pH 值呈线性关系。 3、玻璃电极使用前为什么要先浸泡 24 小时？一方面是为了使其表面溶液形成水化层，以保持对 H+离子 的灵敏响应，另一方面，也是为了减少不对称电位。 pH 玻璃玻璃 电电 极极 电电 位位 应应 是内参比是内参比 电电 极极 电电 位和玻璃膜位和玻璃膜 电电 位以及不位以及不 对对 称称 电电 位之和位之和 ; 4、直接电位法的应用 （1）溶液 pH 测定：指示电极：pH 玻璃膜电极(-) 参比电极：饱和甘汞电极(+) pH 标度的概念及计算。被测溶液的 pH（pHX）是以标准缓冲液的 pH（pHS）为基准，通 过比较两个电池 电动势 X 和 S 而确定的。 pHx = pHs + （ x -Es ）0.059 （t=25 ） （2）、离子活度(或浓度)的测定应用：F-的测定 5、pH 标度的计算举例：用电位分析法测得一已知 pH 为 6.50 缓冲溶液的电池电动势为 0.467 伏，将此对 电极插入另一待测液中，测得电池的电动势为 0.349 伏，求此溶液的 pH 值。（t=25） 解：因为 pHx= pHs +（Ex-Es ）/0.059， 所以 pHx=6.50+（0.349-0.467 ）/0.059=4.50 答：略。 6、电导测量只能用来估算离子总量，而不能区分和测定单个离子的种类和数量。 7、电导法的应用：高纯水质的测定。 第四章 光学分析法导论 第五章 紫外可见分光光度法 1、光学分析法：根据物质发射的辐射或辐射能与物质间相互作用而建立起来的分析方法。 2、电磁辐射范围： g 射线无线电波所有范围； 一射线；X 一射线；紫外（远紫外，近紫外）；可见光；红外（近红外，中红外。远红外）；微波； 无线电波。波长从短到长。 一射线波长最短；能量最大。无线电波波长最长，能量最小。 3、光是一种电磁波，具有波动性和微粒性。 4、光分析法可分为光谱法和非光谱法两大类。 光谱法可分为原子光谱法和分子光谱法。 5、紫外-可见吸收光谱分析法是利用物质的分子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、 定量分析及结构分析的方法。 按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法(200-400nm)和可见分光光度法(400-760nm) ，合称 为紫外可见分光光度法(200-760nm)。 6、分光光度法所使用的光谱范围在 200nm-10（1= 1, 000nm ）之间。 其中 200nm400nm 为紫外光区，400nm760nm 为可见光区，760nm10,000nm 为红外光区。 7、当光束照射到物质上时，物质对于不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同，而使物质呈 现不同的颜色。 8、当白光通过某种溶液时，如果它选择性地吸收了白光中某种色光，则溶液呈现透射光的颜色，也就是 说，溶液呈现的是它吸收光的互补色光的颜色。 9、朗伯比耳定律（Lambert-Beers Law） ：AKCL-分光光度法的定量依据。是由朗伯定律和比 尔定律归纳而得。其成立的前提是单色光 10、透光度、吸光度、吸光系数、摩尔吸光系数。 透光度 T ：透过光的强度 I 与入射光的强度 I0 之比，T=I/I 0 用 T 表示。其值不大于 l。常用百分数 (T) 表示：即 T=100 T。 吸光度 A：透光度倒数的对数值。 A= lg（1/T）=lg（I 0/I） =KCL AKCL 中的 K 值为吸光系数，随 C、 L 所用单位不同而不同。 11、计算：同一物质，不同浓度的甲、乙两种溶液，在相同条件下，测得 T 甲=0.57 ，T 乙=0.32，如果此 液符合 Beer 定律，试求它们的浓度比 C 甲/C 乙。 解：因为 A=KCL=Lg（1/T） ，所以 A 甲 =KC 甲 L=Lg（1/T 甲 ）-（1） A 乙 =KC 乙 L=Lg（1/T 乙 ）-（2） ； （1 ）/ （2）：C 甲 /C 乙 =1/2 ；答：略。 12、紫外-可见分光光度计基本组成 （1）光源：作用-提供入射光，发射连续光谱。 可见光区：钨灯作为光源。 紫外区：氢、氘灯。 （2）单色器：作用-将光源发射的复合光分解成单色光，并可从中选出一任波长单色光（的光学系统）。 （3）样品室：放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池（紫外区）和 玻璃池（可见光区）两种。 （4）检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电 倍增管。 （5）结果显示记录系统：检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理 13、紫外-可见分光光度计与可见分光光度计的异同点： 相同点：均遵守朗伯-比耳定律。 不同点： （1） 测定波长范围不同：可见分光光度计是 400-760nm。紫外可见分光光度计是 200-760nm。 （2）使用的光源不同：可见分光光度计使用的是钨丝灯或卤钨灯；紫外可见分光光度计在可见区使用的 是钨丝灯或卤钨灯，在紫外区使用的是氘灯。 （3）使用的吸收池不同：可见分光光度计使用的是玻璃比色皿；紫外可见分光光度计在可见区使用的是 玻璃比色皿，在紫外区使用的是石英比色皿。 （4）单色器中的色散元件不同：可见分光光度计使用的是玻璃棱镜；紫外可见分光光度计使用的是石英 棱镜 14、紫外-可见分光光度法的定性、定量依据。（ 定性依据：根据光谱上一些特征吸收，包括最大 吸收波长、最小吸收波长、肩峰、吸收系数、吸光度比值等；定量依据：朗伯-比耳定律） 第六章 原子吸收光谱法 1、何谓原子吸收光谱法（原子吸收光谱法是基于从光源辐射出具有待测元素特征谱线的光，通过试 液蒸气时，被试液蒸气中待测元素基态原子所吸收，通过测定这种特征谱线光的减弱程度，根据朗伯-比 耳定律来确定试液中待测元素含量的方法。 ） 、基态、基态原子、激发态（原子）（在正常的情况下， 原子处于稳定状态，它的能量是最低的，我们称这种状态为基态（A 0）,此时的原子是基态原子；但当基 态原子受到外界能量（如热能、电能等）的激发时，最外层电子吸收一定的能量而跃迁到较高的能级上， 原子即处于激发态（A *） ，也就是成为激发态原子。共振吸收线（电子从基态跃迁到能量最低的激发态 （称为第一激发态）时要吸收一定频率的光，这种谱线称为共振吸收线） 、特征浓度（质量）能产生 1%吸 收或 0.0044 吸光度值时待测元素的浓度（质量） 。在火焰原子吸收中，S=（C*0.0044 ）/A（特征浓度） ； 在石墨炉原子吸收中，S=（C*V*0.0044 ）/A（特征质量） 。灵敏度 S 的定义是被测物质浓度或含量改变 一个单位时所引起测量信号的变化。在原子吸收分光光度计中，为校准曲线 A = f（c）的斜率(dAdc)。 它表示被测元素的浓度(C)改变一个单位时吸光度 (A)的变化量。 2、基态与激发态原子的分配关系（基态原子数 N0 可以近似等于总原子数 N。 ）积分吸收与峰值 吸收（积分吸收只是一个理论关系，很难准确测定，采用锐线光源测定峰值吸收后才使原子吸收光谱法 得以应用）。实现峰值吸收的两个条件：在温度不太高时， e a （ e 发射线半宽度， a 吸收线半宽度） ； ne = na（ ne 发射线频率， na 吸收线频率） 。此时发射线轮廓近乎处于吸收线轮廓 的中心频率或中心波长部分 ，整个发射线的轮廓，就相当于吸收线的中心或峰值频率 V0 部分，吸收线 中心波长处的吸光系数 K0 为峰值吸收系数，简称峰值吸收。 3、原子吸收分光光度计的结构及各部分作用是什么？原子吸收光谱仪又称原子吸收分光光度计， 由光源、原子化器、单色器和检测器等四部分组成。光源的作用是发射被测元素的特征共振辐射。空心阴 极灯是性能优良的锐线光源；原子化器的功能是提供能量，使试样干燥、蒸发和原子化。 （火焰原子化器 常用的是预混合型原子化器，它是由雾化器、雾化室和燃烧器三部分组成。它是将液体试样经喷雾器形成 雾粒，这些雾粒在雾化室中与气体（燃气与助燃气）均匀混合，除去大液滴后，再进入燃烧器形成火焰。 此时，试液在火焰中产生原子蒸气） 。单色器可将被测元素的共振吸收线与邻近谱线分开。检测器作用： 检测光辐射的强度。 4、原子吸收分光光度计与紫外-可见分光光度计的异同点是什么？（相同点： 遵循 L-B 定律， 均为吸收光谱 。不同点：1 结构相似，但位置略有不同 ，为什么？由于 UV 的光源发射的是连续光谱， 混合光单色光；而 AAS 的光源是空心阴极灯，其辐射的是待测元素的特征光谱，是锐线光源，但由于 样品经原子化后，样品中的其它元素也有辐射，特别是邻近线的干扰，为了阻止来自原子化过程的所有不 需要的辐射进入检测器，因此把光栅（单色器）放在原子化器之后，同时避免来自火焰的强光照射到光电 检测器上，影响测定的准确度。因此分光系统要放在原子化器及检测器之间。2 原子吸收 -分子吸收 （吸收装置：原子化器，吸收池） ；3 基态的原子蒸汽 -溶液中的分子或离子 ；4 锐线光源、线光谱 - 连续光源、带光谱 ；5 光通过吸收装置的方式：脉冲式光源 （为了区分锐线光与火焰发出的发射背景， 使光源的光以一定的频率断续通过火焰，在检测系统中得到一个交流信号，而火焰发射得到的是直流信号， 在检测系统中采用交流放大器很容易将它们区别开来。 ）- 连续式 5、原子吸收光谱分析中测定条件的选择原则是什么（吸收波长，灯电流，狭缝宽度，火焰） ？通常选择元素的共振线作为分析线。在不减小吸光度的条件下，以能使吸收线与邻近干扰线分开为原 则，若无干扰，可选择较宽的狭缝。选择灯电流时，应在保持稳定和有合适的光强输出的情况下，尽量选 用较低的工作电流。一般元素可使用乙炔-空气火焰；在火焰中易生成难离解的化合物及难溶氧化物的元 素，宜用乙炔-氧化亚氮高温火焰。 第七章 色谱法导论 1、色谱法定义：色谱法是一种物理化学的分离分析方法，它是利用样品中各组份在固定相和流动相中受 到的作用力不同，而将待测样品中各组份进行分离，然后顺序检测各组分的含量的方法。 2、固定相-固定不动的一相；流动相-携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体）。 3、色谱法分类 按两相状态分类：流动相-气相、液相、超临界流体； 按分离机理分类：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法和亲和色谱法； 按固定相的外形分类：柱色谱、纸色谱、薄层色谱。 4、色谱流出曲线（术语）：基线，峰高，保留值（死时间 tM， 保留时间 tR ，调整 保留时间 tR） ，区域宽度（标准偏差 0607 倍峰高处色谱峰宽的一半，半峰宽 W1/2= 2.354 ， 基线宽度 W = 4 5、从色谱流出曲线上，可以得到许多重要信息 （l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组份的最少个数 （2）根据色谱 峰的保留值峰的保留值 (或位置或位置 )，可以进行定性分析，可以进行定性分析 （ 3） 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析 （ 4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据 （ 5）色谱峰两峰间的）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相(和流动相) 选择是否合适的依据 6、色谱法如何将样品中各组分彼此分离？色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全 分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的 热力学性质有关-用塔板理论来解释。 但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠， 还是不能分开，即峰要窄。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的 动力学性质有关-用速率理论来解释。 7、塔板理论-柱分离效能指标- n 或 H 可作为描述柱效能的指标 色谱峰的形状（色谱流出曲线）： 正态分布的平滑曲线。 色谱柱的柱效能 塔板高度：H=L/n。 同长度的色谱柱塔板数越多，塔板高度 H 越小， 分离效果越好。 故 n 或 H 可作为描述柱效能的指标。 8、速率理论-影响柱效的因素 H = A + B/u + Cu 任何减少方程右边三项数值的方法，都可降低 H， 从而提高柱效。 9、描述分配过程的参数（1）分配系数 K 一定温度下，组分的分配系数 K 越大，出峰越慢；试样中的各组分具有不同的 K 值是分离的基础； 某组分的 K = 0 时，即不被固定相保留，最先流出。 （2）分配比 k Ms m组 分 在 流 动 相 中 的 质 量组 分 在 固 定 相 中 的 质 量 也也称容量因子；容量比；分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱 温度、柱压的改变而变化。分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大，该组分 的保留时间越长。分配比可以由实验测得。k=tR/tM，k =0 的组分，其保留时间即为死时间。 色谱法定性保留值；定量峰高或峰面积 10、分离度 R -涉及色谱过程热力学和动力学两方面的参数：R1.5 作为相邻两峰已完全分开的标志 11、色谱分离基本方程式-反映影响分离度的诸因素 12、色谱定性分析依据-峰的保留值或峰的位置 色谱定量分析依据-峰面积或峰高 13、揭示生命奥秘的重要仪器色谱仪 14、阵列毛细管电泳仪-应用于人类基因 DNA 测序 第八章 气相色谱分析 1、气相色谱法（GC） ：用气体作为流动相的色谱法称为。是英国生物化学家 Martin A T P 等人于 1952 年创立的一种极有效的分离分析方法。 2、气相色谱法（GC）应用范围：一般只要在 450以下有 1.5KPa-10KPa 的蒸汽压且热稳定性好的有机 及无机化合物都可用气液色谱分离。（易挥发热稳定性好的组分） 3、气相色谱仪结构：由载气系统（作用：获得纯净、流速稳定的载气）、进样系统（作用：进入样品， 使液体试样瞬间气化）、分离系统（作用：作用是分离样品）、检测系统（作用：把载气里被分离的各组 分的浓度或质量转换成电信号）和温度控制系统（是色谱分离条件的重要选择参数）共五个主要组成部分。 气化室、分离室、检测器三部分需控制温度。 4、气相色谱检测器类型： （l）浓度型检测器 测量的是载气中某组分浓度瞬间的变化，即检测器的响应值和组分的浓度成正 比。如热导检测器(TCD)和电子捕获检测器(ECD) 。 （2）质量型检测器 测量的是载气中某组分进入检测器的速度变化，即检测器的响应值和单位时间内 进入检测器某组分的量成正比。如火焰离子化检测器(FID)和火焰光度检测器 (FPD)等。 5、为达到用最短时间获得最佳分离效果的目的，在液相色谱法中使用 梯度淋洗 操作，气相色谱法中 使用 程序升温 操作，而超临界流体色谱法中使用 程序升压 操作。 6、顶空气相色谱应用：测定体液等中的苯、甲苯、二甲苯等有毒成分；检查汽车司机是否酒后驾车，分 析血样中的酒精含量。 7、在气相色谱法中，为了测定下列组分，宜选用哪种检测器？（1）蔬菜中含氯农药残留量；（2）啤 酒中微量硫化物；（3）酒中水的含量；（4）苯和二甲苯的异构体。 （5）氨基甲酸酯杀虫剂。卤素（氯） 是具有电负性的物质，故选用 ECD 检测器测定蔬菜中含氯农药残留量；火焰光度检测器 FPD 是对硫、磷 选择性很高的检测器，故选用其测定啤酒中微量硫化物；酒中水的含量测定眩晕 TCD 检测器；苯和二甲 苯的异构体均属有机物，故选用 FID 检测器。氨基甲酸酯杀虫剂（含氮）选用 FTD 检测器。 8、气相色谱法的适用范围：一般只要在 450以下有 1.5KPa-10KPa 的蒸汽压且热稳定性好的有机及 无机化合物都可用气液色谱分离。即气相色谱分析对象是在气化室温度下能成为气态的和沸点较低的物质。 9、气相色谱法的定性、定量依据。定性分析主要依据是保留值；定量分析是根据检测器对溶质产生 的响应信号与溶质的量成正比的原理，通过色谱图上的面积或峰高，计算样品中溶质的含量。 10、气相色谱法的计算（归一化法）。 %1021 nii fAffAx Ai 为组分 i 的峰面积，fi 为组分 i 的定量校正因子。fi=Wi/Ai ， Wi 为组分 i 的量，它可以是质量，也 可以是摩尔或体积（对气体） 。 第九章 高效液相色谱分析法 1、高效液相色谱法（、高效液相色谱法（ HPLC）：）： 是以是以 液体液体 为为 流动相流动相 ,在在 经典液相色谱经典液相色谱 基础上，引入了基础上，引入了 气相色谱的理论气相色谱的理论 ，在，在 技技 术上术上 采用了采用了 高压泵高压泵 、 高效固定相高效固定相 和和 高灵敏度检测器的现代色谱分离方法高灵敏度检测器的现代色谱分离方法 。 2、高效液相色谱法与经典液相色谱法比较、高效液相色谱法与经典液相色谱法比较 最大优点在于最大优点在于 高速、高效、高灵敏度高速、高效、高灵敏度 。 3、液相色谱分类：、液相色谱分类： 根据分离机制不同，液相色谱可分为：根据分离机制不同，液相色谱可分为： 液固吸附色谱、液液分配色谱、亲和色谱、离液固吸附色谱、液液分配色谱、亲和色谱、离 子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。 4、高效液相色谱法（、高效液相色谱法（ HPLC） 与气相色谱法（与气相色谱法（ GC） 异同点：异同点： 相同：相同： 兼具分离和分析功能，均可以在兼具分离和分析功能，均可以在 线检测线检测 主要差别：主要差别： 分析分析 对对 象、流 动动 相及操作条件的差相及操作条件的差 别别 （ l）气相色谱法）气相色谱法 分析对象分析对象 (应用范围应用范围 )只限于分析只限于分析 气体和沸点较低的化合物气体和沸点较低的化合物 （仅占有机物总数的（仅占有机物总数的 20 ） 。 其余近其余近 80 的那些的那些 高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质 ，目前主要，目前主要 采用高效液相色谱法采用高效液相色谱法 进行分离和进行分离和 分析。分析。 (2)气相色谱气相色谱 采用采用 流动相流动相 是是 惰性气体惰性气体 ，它对组分没有亲和力，仅起，它对组分没有亲和力，仅起 运载作用运载作用 。而。而 高效液相色谱法高效液相色谱法 中中 流动相流动相 可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。 因此，流动相对分离起很大作用，因此，流动相对分离起很大作用， 相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件 提供了极大方便。提供了极大方便。 （ 3）操作条件差别）操作条件差别 GC： 加温操作加温操作 ; HPLC： 室温；高压（液体粘度大）室温；高压（液体粘度大） 5、高效液相色谱仪的结构： （1）高压输液系统 ：为使流动相较快流动。 （2）进样系统 ：包括进样口、注射器和进样阀等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。 （3）分离系统色谱柱 ：分离样品。 （4）检测系统-把被色谱柱分离后的各组分浓度或质量转化成相应电信号 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、 荧光、电化学检测器等。 另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差 折光，电导检测器等。 （5）辅助装置：梯度淋洗 6、分离类型选择：相对分子质量十分低（一般在 200 以下）的样品，其挥发性好，适用于气相色谱。标 准液相色谱类型（液一固、液一液、及离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是 20O2000。对于相 对分子质量大于 2000 的样品，则用尺寸排阻法为最佳。 7、何谓超临界流体色谱法：是以超临界流体作为流动相的一种色谱方法。所谓超临界流体，是指既不是 气体也不是液体的一些物质，它们的物理性质介于气体和液体之间。在临界温度和临界压力以上，物质是 以超临界流体状态存在。即在超临界状态下，随温度、压力的升降，流体的密度会变化。此时的物质既不 是气体也不是液体，却始终保持为流体。临界温度通常高于物质的沸点和三相点。 第十章第十章 氨基酸自动分析仪氨基酸自动分析仪 1、何谓氨基酸：是蛋白质的组成单位，既有酸的性质，又有碱的性质，分子中含有羧基（-COOH） ， 和氨基（-NH2）的有机化合物；组成蛋白质的氨基酸有 23 种，人体必需的氨基酸有 8 种缬氨酸、 亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和色氨酸。 2、氨基酸自动分析仪原理色谱柱是整个仪器的核心，柱中装满磺酸型阳离子交换树脂（一般都是 Na+型的：用 X-SO3-Na+表示，固定相） 。由于氨基酸属两性电解质，在酸性缓冲液中（pH2.2，流动相） ， 氨基酸呈带正电荷状态。当这些带正电荷的混合氨基酸样液进入色谱柱后，与柱中的磺酸型阳离子交换树 脂上的钠离子交换而与树脂结合。由于不同的氨基酸其侧链基团不同，所带电荷有强有弱，因而与树脂的 亲和力就有强有弱，当 pH3.3，4.3，4.9 的缓冲液相继流经树脂时 ，由于 pH 值不断升高，氨基酸逐渐失 去正电荷，与树脂的亲和力逐渐减弱，亲和力弱的氨基酸先被洗脱下来，亲和力强的氨基酸则洗脱速度较 慢。- 梯度淋洗 。被洗脱下来的氨基酸与茚三酮显色，进行光电比色后，获得的色谱图与