骨髓间充质干细胞移植对动脉粥样硬化大鼠外周血cd4+cd25+treg细胞数量的影响

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 骨髓间充质干细胞移植对动脉粥样 硬化大鼠外周血 CD4+CD25+Treg 细 胞数量的影响 摘要 目的 探讨骨髓间充质干 细胞移植前后对动脉粥样硬化大鼠外周 血 CD4+CD25+Treg 细胞数量的影响， 以及对相关炎症因子及动脉粥样硬化 （AS）的影响。 方法 90 只雄性 Wistar 大鼠分正常饮食组（30 只）和高 脂饮食组（60 只） ，并将高脂饮食组大 鼠分对照组（30 只）和移植组（30 只） ， 移植组经尾静脉注射 MSCs 悬液（细胞 1106 溶于 200 L PBS 中） ，对照组给 予 200 L PBS，采用全自动生化仪分析 总胆固醇（TC） 、三酰甘油（TG） 、高 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 密度脂蛋白胆固醇（HDL-C） 、低密度 脂蛋白胆固醇（LDL-C ） ， ELISA 法测 定外周血血清中水平，应用流式细胞仪 检测 CD4+CD25+Foxp3 Treg 细胞水平， 采用苏木精-伊红染色观察组织学变化。 结果 组织学分析表明成功建立了动脉 粥样硬化模型。对照组大鼠血脂、炎症 因子较正常饮食组的水平升高（P 中国 论文网 /6/view-12954887.htm 关键词 动脉粥样硬化；骨髓间 充质干细胞；炎症因子； CD4+CD25+Treg 细胞 中图分类号 R543.5 文献标识 码 A 文章编号 1673-7210（2017） 09（c）-0029-05 Abstract Objective To explore the effect on the number of CD4+CD25+regulatory T cells in the peripheral blood of the rats with AS after the mesenchymal stem cells transplanted into them and the effects of the two cells on the related inflammatory factors and -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 AS. Methods 90 male Wistar rats were divideinto two groups： the normal diet group （30 rats） and the high-fat diet group （60 rats） ， and the high-fat diet group were divide into the control group （30 rats） and the transplanted group （30 rats）. MSCS suspension （1106 cells dissolved in 200 L PBS） were injected into the transplanted group via the tail vein， while the control group were given 200 L PBS. TC， TG， HDL- C， and LDL-C were analyze by automatic biochemical analyzer， the levels of hs-CRP and IL-6 in peripheral blood serum were measurated by ELISA and the level of CD4+CD25+Foxp3 Treg cells were observed by flow cytometry and the histological changes were observed by hematoxyli eosin stain. Results The histological analysis showed that the model of atherosclerosis was formed sucessfully. The blood lipid and -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 inflammatory factors of control group were than the normal diet group（P 0.05） ；移植第 4 周与对照组比较，移植 组血脂明显降低，差异有统计学意义 （P 0.05） ；移植第 4 周与对照组比较， 移植组两者水平明显降低，差异有统计 学意义（P 0.05） ；移植第 4 周组与对 照组比较，两者水平明显升高，差异有 统计学意义（P 0.05） 。见表 3、图 23。 2.5 骨髓间充质干细胞形态 接种后细胞在培养瓶中散在分布， 呈圆形。原代培养：24 h 后开始贴壁， 72 h 后贴壁细胞表 F 为多角形、不规 则或圆形，单个生长，57 d 逐渐形成 集落，形态呈长线形、不规则或多角形， 仍能见圆形细胞夹杂，10 d 后细胞集落 快速增殖，细胞开始聚集生长，逐渐形 成“漩涡状”，部分大的集落开始融合， 14 d 时大的集落相互重叠融合。传代培 养：传代 6 h 后细胞慢慢贴壁呈长梭形 伸展，均匀生长并逐渐形成大的集落， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 大约 45 d 圆形、未贴壁细胞显著减少， 传至第 3、4 代的 BMMSC 形态基本呈 长梭形，没有圆形的杂细胞。见图 4。 3 讨论 AS 是高血压、冠心病、心肌梗 死等多种心血管疾病的病理基础，其中 氧化应激损伤和炎性反应是重要的病理 机制5-8 。导致 AS 发病的因素非常多， 比如高血脂、内皮损伤、炎症、慢性应 激9；AS 被认为是一种慢性炎症，炎 性反应可以通过多种途径促进 AS 的发 生和发展10 。CRP 和 IL-6 在炎症斑块 中起重要作用，不仅参与 AS 的行成， 也是斑块不稳定的触发因素11。 免疫系统是参与 AS 炎性反应的 重要组成部分，在炎性反应初始阶段起 核心作用。调节性 T 细胞是具有免疫抑 制功能的 T 细胞亚群， CD4+CD25+Treg 是调节性 T 细胞的亚 群之一，是成熟全面功能的 T 细胞亚群 12-13，具有免疫抑制与免疫无能性作 用14，在慢性炎性反应中起重要作用。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 CD4+CD25+Treg 主要通过免疫负性调 节来减少自身免疫性疾病的发生，在机 体维持自身免疫应答稳态方面起到重要 作用15。Foxp3 是 Treg 细胞的特征性 核转录因子，在维持 Treg 细胞特征性 基因表达、分化和发育以及 Treg 细胞 的抑制性功能方面不可或缺16-17。 BMMSCs 具有再生能力和一定的免疫 调节作用18-19 ，本实验中 BMMSCs 通过上调 CD4+CD25+Treg 细胞抑制免 疫反应和炎性反应，使血 CRP、IL-6 水 平降低，从而抑制 AS 的炎性反应，抑 制 AS 形成，这一点体现在本实验中所 做的病理切片上。BMMSCs 移植后， 上调 CD4+CD25+Treg 细胞，并促进转 录因子 Foxp3 的表达。 CD4+CD25+Treg 细胞发挥其抑制免疫 反应的作用，内皮细胞发挥抗炎、抗脂 质氧化等作用，二者共同抑制冠状动脉 粥样硬化形成，延缓 AS 进展。 本实验显示，对照组较正常组大 鼠血脂、hs-CRP、IL-6 水平明显升高， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 CD4+CD25+Treg 细胞及其转录因子 Foxp3 水平明显下降，反映了 CD4+CD25+Treg 细胞在 AS 过程中的 免疫反应过程。动脉内皮损伤后，分泌 许多活性因子，募集更多的炎症细胞到 达局部后分泌更多的活性物质和炎症因 子，其可抑制 CD4+CD25+Treg 细胞及 其转录因子 Foxp3 的表达。在 BMMSCs 移植后 2 周，血脂，炎症因 子开始下降，CD4+CD25+Treg 细胞及 其转录因子 Foxp3 的表达开始上调，第 4 周后出现显著改变，反映 BMMSCs 移植 CD4+CD25+Treg 细胞及其产 生转录因子 Foxp3 的表达产生了有益的 影响。其可能不仅有利于维护动脉内皮 细胞结构完整性，更有利于其功能的恢 复，从而有利于调节免疫、抑制炎症反 应，在抑制 AS 发生、发展过程中发挥 重要作用。 目前对 CD4+CD25+Treg 细胞在 冠心病治疗中的研究尚不成熟，本研究 虽能够观察到 BMMSCs 移植对大鼠动 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 脉粥样硬化模型有益的影响，但毕竟