革兰氏阴性球菌

第七章 革兰阴性球菌李向阳 奈瑟菌属（ Neisseria）布兰汉菌属（ Branhamella）概述n “伯杰鉴定细菌学手册 ”第 9版n 将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群 4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科n 奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（ N.gonorrhoeae）、 脑膜炎奈瑟菌（ N.meningitidis） 以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌（ M.catarrhalis） 是主要的致病菌。n 目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论一、分类n 淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病n 寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌n 解乳糖奈瑟菌 、 干燥奈瑟菌 、 微黄奈瑟菌 、 粘液奈瑟菌 、 浅黄奈瑟菌 、 灰色奈瑟菌 、 延长奈瑟菌 、 去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌第一节 奈瑟菌属二、脑膜炎奈瑟菌临床意义n 寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌物或空气微滴核而传播。n 流行性脑脊髓膜炎n 冬末春初，多为学龄儿童、青少年n 感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎n 可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激症阳性、甚至休克和 DIC等；菌血症和细菌的损伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑脑膜炎奈瑟菌临床意义n 尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染，急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。n 主要致病物质是脂多糖n 依据荚膜多糖的抗原成分可分为： A、 B、 C、 等 13个血清群，我国 A群占 95.8%，其余为 B、 C等群。淋病奈瑟菌临床意义n 淋病的病原菌n 主要通过性接触直接感染n 在分娩时通过产道感染新生儿n 临床表现为：n 单纯性淋病n 盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病n 淋菌性结膜炎n 播散性淋病n 致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖和铁调节蛋白1形态n 革兰阴性双球菌n 直径 0.61.5m形似双肾或咖啡豆样，凹面相对n 无动力，无芽胞，某些菌种形成荚膜三、生物学特性2培养特性n 需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，在培养基中需加入可溶性淀粉。n 需氧生长，初次分离需 5%7%CO2和高湿度n 最适生长温度为 3537 ，低于 30 不生长n 血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径 12mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落n 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落n 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜n 脑膜炎奈瑟菌于孵育 24h后在培养基上发生自溶3生化特性n 氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）n 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和 DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据n 奈瑟菌属 DNA中 G+Cmol%为 46544抵抗力n 对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感n 对青霉素敏感n 但近年来由质粒介导的 内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多四、微生物检验脑膜炎奈瑟菌n 标本采集n 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本n 采集后立即送往实验室n 用血平板进行床边接种后置 35 孵育n 血液标本接种在血液培养瓶中置 35 孵育n 标本运送时需要 35 保温标本直接检查n 直接涂片检查n 脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片n 皮肤瘀点渗出液涂片n 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告 “检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌 ”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断n 抗原检查n 通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验n 包括 A、 C、 Y、 W125血清型的多价抗体和血清型 B抗体n 检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断分离培养鉴定 n 脑脊液标本n 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板n 咽拭子或鼻咽拭子n 接种在选择性培养基上如改良的 Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、 New York City(NCY)等培养基n 血液标本n 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上n 置 5%7%CO2 35 孵育，每隔 24h观察平板鉴定n 初步确定为奈瑟菌属n 直径 12mm， 灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落n 涂片革兰染色见阴性双球菌n 氧化酶试验阳性n 进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌n 用分型血清确定血清型别n 平板上没有发现菌落需继续观察 72h后无菌生长可报告为阴性（二）淋病奈瑟菌1检验程序2标本采集 n 阴道和宫颈分泌物n 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内 1cm处停留 1015秒时间，蘸取n 采集尿道分泌物n 弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本n 尿液n 直肠肛拭标本n 废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物n 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物3标本直接检查n 标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查n 男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断n 女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告n 新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎4分离培养与鉴定n 选择培养基如 MTM， Martin-Lewis（ ML）， 或 NYCn 置于 5%CO2气体条件下 3537 孵育n 每隔 24h观察平板（ 1）形态和生化学鉴定n 可疑菌落n 直径 0.51mm， 灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落n 确认n 将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌n 氧化酶和触酶试验阳性n 葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性n 培养需观察 72h后无菌生长可报告为阴性。（ 2）免疫学鉴定n 直接荧光染色n 凝集试验或免疫渗滤技术（ 3）分子生物学鉴定n 检测靶片段的基因n 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶 DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白 (opa)基因、菌毛 DNA 探针、 rRNA 基因探针和 porA 假基因。n 基因探针杂交、核酸扩增第二节 卡他莫拉菌n 卡他莫拉菌（ M.catarrhalis） 又称为卡他布兰汉菌（ Branhamaceae catarrhalis）n 可存在于健康人群的上呼吸道n 近十年来报道n 导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎n 在免疫抑制和 ICU的患者可导致菌血症n 是社区呼吸道感染的主要病原体之一。 临床分离n 从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本n 呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液n 口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本n 痰液标本直接涂片革兰染色n 如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.51.5m革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染卡他莫拉菌培养及鉴定n 在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好n