蛋白质电泳与操作

蛋白质电泳与操作蛋白质电泳与操作福建中医药大学康复医学研究所福建中医药大学康复医学研究所林炜林炜 博士博士2012.4.13Questions： 什么是氨基酸？什么是氨基酸？ 氨基酸有何结构特点？氨基酸有何结构特点？ 什么是肽？什么是肽？ 肽是如何形成的？肽是如何形成的？ 形成肽的化学键是什么？形成肽的化学键是什么？ 什么是蛋白质？什么是蛋白质？ 蛋白质的结构特点是什么？蛋白质的结构特点是什么？蛋白质特性蛋白质特性氨基酸（氨基酸（ amino acid） 含有一个碱性氨基和一个含有一个碱性氨基和一个 酸性羧基酸性羧基 的有机化的有机化合物。是蛋白质的基本组成单位。合物。是蛋白质的基本组成单位。氨基酸的酸碱性质氨基酸的酸碱性质 氨基酸在水溶液或结晶内基本上均以兼性离氨基酸在水溶液或结晶内基本上均以兼性离子或偶极离子的形式存在。子或偶极离子的形式存在。 兼性离子兼性离子 ： 又称为两性离子是指在同一个氨又称为两性离子是指在同一个氨基酸分子上带有能释放出质子的基酸分子上带有能释放出质子的 NH3+正离子正离子和能接受质子的和能接受质子的 COO-负离子，因此氨基酸是负离子，因此氨基酸是两性电解质。两性电解质。 氨基酸的等电点氨基酸的等电点 ： 氨基酸的带电状况取决于氨基酸的带电状况取决于所处环境的所处环境的 PH值，改变值，改变 PH值可以使氨基酸带值可以使氨基酸带正电荷或负电荷，也可使它处于正负电荷数正电荷或负电荷，也可使它处于正负电荷数相等，即净电荷为零的两性离子状态。使氨相等，即净电荷为零的两性离子状态。使氨基酸所带正负电荷数相等即净电荷为零时的基酸所带正负电荷数相等即净电荷为零时的溶液溶液 pH值称为该氨基酸的等电点值称为该氨基酸的等电点 （ isoelectric point）。）。多肽多肽 （ polypeptide） 一个氨基酸的羟基与另一个氨基酸的羧基脱水缩合形成肽键（一个氨基酸的羟基与另一个氨基酸的羧基脱水缩合形成肽键（peptide bond）。）。 通常由通常由 10-100个氨基酸分子个氨基酸分子 脱水缩脱水缩合合 而成的化合物叫而成的化合物叫 多肽，多肽， 它们的分它们的分子量低于子量低于 10,000Da（ Dalton） .也也有文献把由有文献把由 2-10个氨基酸组成的肽个氨基酸组成的肽称为寡肽（称为寡肽（ 小分子小分子 肽）；肽）； 10-50个个氨基酸组成的肽称为多肽；由氨基酸组成的肽称为多肽；由 50个个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。质。 蛋白质特性蛋白质特性蛋白质结构一级结构一级结构 （ primary structure）氨基酸之间以肽键形成的肽链中氨氨基酸之间以肽键形成的肽链中氨基酸的排列顺序。基酸的排列顺序。二级结构二级结构 （ secondary structure）蛋白质分子中多肽链沿一定方向盘蛋白质分子中多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。绕和折叠的方式。 三级结构三级结构 （ tertiary structure） 蛋白质的二级结构基础上借助各种蛋白质的二级结构基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的空间构象。结构的空间构象。 四级结构四级结构 （ quaternary structure ）多亚基蛋白质多亚基蛋白质 分子分子 中各个具有三级中各个具有三级结构的多肽链，以适当的方式聚合结构的多肽链，以适当的方式聚合所形成的蛋白质的三维结构。所形成的蛋白质的三维结构。关于电泳关于电泳 电泳（电泳（ Electrophoresis）：）： 是指是指带电荷的粒子或分子在电场中带电荷的粒子或分子在电场中移动的现象。移动的现象。 电泳技术：电泳技术： 利用带电粒子或者利用带电粒子或者分子在电场中移动速度不同而分子在电场中移动速度不同而达到对粒子或分子进行分离的达到对粒子或分子进行分离的技术。技术。电泳的相关参数电泳的相关参数 电荷：电荷： 粒子或分子的电荷性质决定其在电场中的迁移方粒子或分子的电荷性质决定其在电场中的迁移方向。向。 分子大小：分子大小： 分子大小决定了在特定电场强度下一定时间分子大小决定了在特定电场强度下一定时间内分子在介质中的迁移距离。内分子在介质中的迁移距离。 电场强度：电场强度： 电场强度决定了带电粒子或分子在电场中的电场强度决定了带电粒子或分子在电场中的迁移速度。迁移速度。 介质密度：介质密度： 介质密度决定了特定分子在其中的迁移距离介质密度决定了特定分子在其中的迁移距离，因此决定其对不同分子的分辨能力。，因此决定其对不同分子的分辨能力。聚丙烯凝胶电泳聚丙烯凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶（ polyacrylamide gel， PAG）丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺交联剂在催化剂 (如过硫酸铵，TEMED等 )作用下形成的凝胶。凝胶孔径大小可以通过制备时所使用的浓度和交联度控制。聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis， PAGE）利用聚丙烯酰胺形成的凝胶对大分子生物物质（如核酸、蛋白质）通过附加电场使分子不同的按照分子量大小在凝胶中得到分离。蛋白质的聚丙烯凝胶电泳类型：按蛋白质变性与否分为变性电泳和非变性电泳；按凝胶浓度梯度分为不连续电泳与连续电泳；按电泳的向性分为单向电泳与双向电泳。蛋白质变性电泳蛋白质变性电泳 蛋白质变性蛋白质变性 ： 蛋白质的三级结构和四级结构的结合力主要是半胱氨蛋白质的三级结构和四级结构的结合力主要是半胱氨酸之间形成的二硫键酸之间形成的二硫键 （ Disulfide bond）。）。 而蛋白质三级结构和四级而蛋白质三级结构和四级结构是蛋白质的功能基础。蛋白质变性就是使二硫键打开，从而使结构是蛋白质的功能基础。蛋白质变性就是使二硫键打开，从而使蛋白质亚基解离和三级结构打开，使蛋白质失去生物活性，故称变蛋白质亚基解离和三级结构打开，使蛋白质失去生物活性，故称变性性 （ denature）。）。 蛋白质变性的方法：蛋白质变性的方法： 95 加热加热 5分钟足以破坏蛋白质中的二硫键，分钟足以破坏蛋白质中的二硫键，但是当温度降至常温后，二硫键能够重新形成，这个过程称为复性但是当温度降至常温后，二硫键能够重新形成，这个过程称为复性（ renature）。）。 为了使变性后的蛋白不再复性通常使用为了使变性后的蛋白不再复性通常使用 -巯基乙醇巯基乙醇（ 2-Mercaptoethanol ）或二硫苏糖醇）或二硫苏糖醇 （ Dithiothreitol ， DTT）保护）保护自由的半胱氨酸巯基。另外，为了避免复性，通常在加热后立即放自由的半胱氨酸巯基。另外，为了避免复性，通常在加热后立即放入冰浴以减少蛋白质复性的机会。入冰浴以减少蛋白质复性的机会。 蛋白质变性电泳的方法：蛋白质变性电泳的方法： 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE） SDS-PAGE原理：原理：蛋白质在凝胶中的迁移率主要取决于分子大蛋白质在凝胶中的迁移率主要取决于分子大小、形状以及所带电荷多少。小、形状以及所带电荷多少。SDS是一种阴离子表面活性剂，在聚丙烯酰胺是一种阴离子表面活性剂，在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的凝胶系统中，加入一定量的 SDS能使蛋白质的氢键能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（达到饱和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（达到饱和的状态下，每克多肽可结合和的状态下，每克多肽可结合 1.4g SDS），使各），使各种蛋白质种蛋白质 SDS 复合物都带上相同密度的负电荷，复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。此而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。可以忽略不计。当分子量在当分子量在 15KD到到 200KD之间时，蛋白质的迁之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合公式：移率和分子量的对数呈线性关系，符合公式：logMW=K-bX，式中：，式中： MW为分子量，为分子量， X为迁移率，为迁移率， k、 b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。SDS-PAGE操作程序操作程序 蛋白质样品制备蛋白质样品制备 凝胶制备凝胶制备 样品上样样品上样 电泳电泳 凝胶染色凝胶染色 电泳结果分析电泳结果分析来自培养细胞的样品：来自培养细胞的样品：1. 悬浮培养细胞：悬浮培养细胞：2. 细胞清洗：对培养基中的悬浮细胞吹打混匀后移至细胞清洗：对培养基中的悬浮细胞吹打混匀后移至 15mlV型底离心管型底离心管，台式冷冻离心机，台式冷冻离心机 1000rpm（ 300G） 4 离心离心 5min使细胞沉积在离心管使细胞沉积在离心管底部，弃去培养液。加底部，弃去培养液。加 10ml冰浴预冷的冰浴预冷的 PBS重新吹打混匀细胞后重新吹打混匀细胞后 1000rpm（ 300G）离心）离心 5min，弃去，弃去 PBS。重复此步骤三次。在最后一次清洗前对。重复此步骤三次。在最后一次清洗前对充分吹打混匀的细胞进行计数。充分吹打混匀的细胞进行计数。2. 贴壁培养细胞：贴壁培养细胞：1. 细胞消化：吸弃细胞培养瓶中的培养液，并用适量预冷细胞消化：吸弃细胞培养瓶中的培养液，并用适量预冷 PBS漂洗一次漂洗一次，加适量（足以覆盖细胞）胰酶细胞消化液，加适量（足以覆盖细胞）胰酶细胞消化液 (Trypsin-EDTA Solution，0.25% Trypsin和和 0.02% EDTA )，室温消化，室温消化 1 5min。加。加 5ml含含 5%血清的培血清的培养基停止消化，吹打使细胞成为单细胞悬液。移至养基停止消化，吹打使细胞成为单细胞悬液。移至 15ml V型底离心管，台型底离心管，台式冷冻离心机式冷冻离心机 1000rpm（ 300G） 4 离心离心 5min使细胞沉积在离心管底部使细胞沉积在离心管底部，弃去培养液。执行细胞清洗程序（见上），弃去培养液。执行细胞清洗程序（见上）蛋白质样品制备蛋白质样品制备3. 细胞裂解：细胞裂解： 按照每按照每 106细胞加细胞加 75 100l细胞裂解液（细胞裂解液（ RIPA，含蛋白酶抑，含蛋白酶抑制剂），强烈震荡制剂），强烈震荡 30s后置冰浴后置冰浴 30min，期间每，期间每 5分钟震荡分钟震荡 10s。台式冷冻高。台式冷冻高速离心机速离心机 12000 rpm， 4 离心离心 5min。将上清移入另一干净。将上清移入另一干净 Eppendorf管，管，样品可立即保存于样品可立即保存于 -20 。如有必要，取。如有必要，取 5l上清，上清， ddH2O稀释稀释 4X后用后用Bradford法检测蛋白质含量。法检测蛋白质含量。4. 蛋白质变性蛋白质变性1. 根据需要取一定量裂解细胞样品，加根据需要取一定量裂解细胞样品，加 4X蛋白质电泳上样液（含蛋白质电泳上样液（含 5%巯巯基乙醇）使终浓度为基乙醇）使终浓度为 1X，混匀。，混匀。 95 加热加热 5min，立即置冰上，等待电泳，立即置冰上，等待电泳。 试剂：试剂：ddH2O30%Acr-Bis(29:1)10X Tris/Glycine/SDS buffer, pH8.810X Tris/Glycine/SDS buffer, pH6.810%过硫酸铵（过硫酸铵（ Ammonium persulfate ， AP）TEMED（ Tetramethylethylenediamine，四甲基乙二胺），四甲基乙二胺）*TEMED可以催化可以催化 过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶 的聚合。的聚合。 装置：装置：凝胶制备凝胶制备3. 凝胶分离范围：凝胶分离范围：SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范 围6%胶 50-150kD8%胶 30-90kD10%胶 20-80kD12%胶 12-60kD15%胶 10-40kDSDS-PAGE凝胶的结构凝胶的结构浓缩胶（ Stacking gel）：浓缩胶通常为 5%聚丙烯酰胺凝胶 ,目的是使蛋白质样品集聚。 分离胶（ Resolving gel）：分离胶浓度为 6% 20%，能够是不同的蛋白质按分子量大小分离。 加样孔（ well）：由加样梳形成的孔，相互之间有凝胶隔离，蛋白质样品加入孔内，并在电泳中互不干扰。每一个加样孔相对应的凝胶又称泳道。 玻璃板 （ Glass plates）：构成凝胶的模板。 隔条 （ spacer） :垫于玻璃板之间，使两块玻璃板之间形成灌胶的空间。SDS-PAGE凝胶的工作原理凝胶的工作原理 在在 SDS PAGE不连续电泳中，制胶缓冲不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是液使用的是 Tris HCL缓冲系统，浓缩胶缓冲系统，浓缩胶是是 pH6.8，分离胶，分离胶 pH8.8；而电泳缓冲液使；而电泳缓冲液使用用 Tris甘氨酸缓冲系统。甘氨酸缓冲系统。 在浓缩胶中，其在浓缩胶中，其 pH环境呈弱酸性，因此环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而泳动效率低；而 CL离子却很高，两者之离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。，浓缩为一狭窄的区带。 当样品进入分离胶后，由于胶中当样品进入分离胶后，由于胶中 pH的增的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。大小进行分离。凝胶配制的计算凝胶配制的计算试剂 名称 配制 10ml不同 浓 度分离胶 试剂 用量 /ml 配制 5ml浓缩 胶 试剂 用量5% 7.5% 10% 15% 3%分离胶 贮 液（ 30%Acr-0.8%Bis)1.65 2.50 3.33 5.00 -4X 分离胶 缓 冲液（ pH8.8Tris-HCl）2.50 2.50 2.50 2.50 -浓缩 胶 贮 液（ 10%Acr-0.5%Bis）- - - - 1.54X 浓缩 胶 缓 冲液（ pH6.8 Tris-HCl）- - - - 1.2510% SDS 0.10 0.10 0.10 0.10 0.51%TEMED 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00ddH2O 4.75 3.90 3.07 1.4 4.60混匀后，置真空干燥器中，抽气 10min10%AP 0.05 0.05 0.05 0.05 0.025凝胶配制步骤凝胶配制步骤 安装灌胶模具：安装灌胶模具： 注意压紧，避免漏胶。注意压紧，避免漏胶。 配制分离胶溶液：配制分离胶溶液： 配胶时分离胶的五个组分按表依次加入洁净的配制分配胶时分离胶的五个组分按表依次加入洁净的配制分离胶的小烧杯内，以搅拌混匀约离胶的小烧杯内，以搅拌混匀约 10-20 sec，均匀加入胶槽。，均匀加入胶槽。 灌制分离胶：灌制分离胶： 灌胶后再在胶面上小心地铺上一几毫米厚的电泳缓冲液（灌胶后再在胶面上小心地铺上一几毫米厚的电泳缓冲液（pH8.8）（这可使凝固后的胶面平滑整齐），然后于）（这可使凝固后的胶面平滑整齐），然后于 37 凝固凝固 15-30 min。 配制浓缩胶溶液：配制浓缩胶溶液： 配胶时浓缩胶的五个组分按表依次加入洁净的配制分配胶时浓缩胶的五个组分按表依次加入洁净的配制分离胶的小烧杯内，以搅拌混匀约离胶的小烧杯内，以搅拌混匀约 10-20 sec，均匀加入胶槽，插入加样梳。，均匀加入胶槽，插入加样梳。 灌制浓缩胶：灌制浓缩胶： 浓缩胶是用于浓缩蛋白质样品，位于整块浓缩胶是用于浓缩蛋白质样品，位于整块 SDS-PAGE胶胶的上层。常用浓度是的上层。常用浓度是 5%， pH6.8。 并用加样梳形成加样孔。孔下留并用加样梳形成加样孔。孔下留0.8 1.0cm的浓缩胶，以便蛋白质样品在这段胶的电泳中被浓缩并的浓缩胶，以便蛋白质样品在这段胶的电泳中被浓缩并聚焦成窄线，有利于下面的分离胶分离不同分子量蛋白时形成清晰聚焦成窄线，有利于下面的分离胶分离不同分子量蛋白时形成清晰的条带。的条带。蛋白质样品上样电泳蛋白质样品上样电泳预电泳：预电泳： 配制完成的配制完成的 SDS-PAGE胶通常要预电胶通常要预电泳泳 510分钟，以去除未交联丙烯酰胺的影响。分钟，以去除未交联丙烯酰胺的影响。蛋白质的加样量：蛋白质的加样量： 通常一个上样孔加样通常一个上样孔加样 15l，含总蛋白量约为含总蛋白量约为 40-100g。加样模式：加样模式： 通常左右两侧的上样孔加通常左右两侧的上样孔加 5 10l蛋白标志，若样品数较少（蛋白标志，若样品数较少（ 7个），则左右两个），则左右两侧上样孔加侧上样孔加 2 3l蛋白质上样缓冲液，中间的蛋白质上样缓冲液，中间的孔加蛋白标志。孔加蛋白标志。起始电泳：起始电泳： 电泳通常采用稳压模式，起始电压电泳通常采用稳压模式，起始电压通常为通常为 70v。电泳分离电压：电泳分离电压： 通常为通常为 100 120V。结束电泳：结束电泳： 电泳结束的标志通常以欲分离的蛋电泳结束的标志通常以欲分离的蛋白质泳动到胶的白质泳动到胶的 1/2 2/3处，或者以溴酚蓝开处，或者以溴酚蓝开始从胶底部泳出为标准。始从胶底部泳出为标准。SDS-PAGE电泳凝胶染色电泳凝胶染色 银染银染 (silver staining ) 考马斯亮蓝染色（考马斯亮蓝染色（ Coomassie Brilliant Blue staining） Coomassie Brilliant Blue R-250Coomassie Brilliant Blue G-250 凝胶结果分析凝胶结果分析 染色后的凝胶可以用凝胶扫描仪观染色后的凝胶可以用凝胶扫描仪观测照相，也可平铺在普通扫描仪上测照相，也可平铺在普通扫描仪上扫描成图像。扫描成图像。 凝胶图像可通过电脑软件进行分析凝胶图像可通过电脑软件进行分析。确定目的蛋白的位置，根据蛋白。确定目的蛋白的位置，根据蛋白标准条带确定蛋白质的相对大小。标准条带确定蛋白质的相对大小。并可以通过软件计算不同泳道之间并可以通过软件计算不同泳道之间蛋白质的相对含量。蛋白质的相对含量。SDS-PAGE凝胶电泳的凝胶电泳的 Q&AQ： SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？电泳凝胶中各主要成分的作用？A: 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液：浓缩胶选择制胶缓冲液：浓缩胶选择 pH6.8，分离胶选择，分离胶选择 pH8.8，选择，选择 Tris HCL系统系统，具体作用后面介绍；，具体作用后面介绍；Q： TEMED与与 AP的作用？的作用？A：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固；：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固；Q：十二烷基硫酸钠（：十二烷基硫酸钠（ SDS）的作用？）的作用？A：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。Q：提高：提高 SDS-PAGE电泳分辨率的途径？电泳分辨率的途径？A： 1、聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在、聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或 4度冰箱放置度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致，前者易导致凝固不充分，后者可导致 SDS结晶。一般凝胶可在室温下保结晶。一般凝胶可在室温下保存存 4天，天， SDS可水解聚丙烯酰胺。可水解聚丙烯酰胺。2、一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各、一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的 蛋白质电泳技术手册蛋白质电泳技术手册 P82-103。Q： “微笑微笑 ”（两边翘起中间凹下）形带原因？（两边翘起中间凹下）形带原因？A：主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝：主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。胶中。处理办法：待其充分凝固再作后续实验。处理办法：待其充分凝固再作后续实验。Q： “皱眉皱眉 ”（两边向下中间鼓起）形带原因？（两边向下中间鼓起）形带原因？A：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。泡未排除干净。处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。Q：为什么带出现拖尾现象？：为什么带出现拖尾现象？A：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。Q：为什么带出现纹理现象？：为什么带出现纹理现象？A：主要是样品不溶性颗粒引起的。：主要是样品不溶性颗粒引起的。处理办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。处理办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。Q：什么是：什么是 “鬼带鬼带 ”，如何处理？，如何处理？A： “ 鬼带鬼带 ” 就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分来被解