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文档简介
1、蛋白质浓度的测定（folin- 酚试剂法）【实验目的】熟悉并掌握用 folin- 酚法测定蛋白质浓度的方法。【实验原理】蛋白质（或多肽）分子中含有酪氨酸或色氨酸，能与 folin- 酚试剂起氧化还原反应，生成蓝色化合物， 蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比， 可通过绘制标准曲线，用比色法测定蛋白质浓度。【实验试剂】1.标准酪蛋白 200ug/ml2.folin-酚乙液（原液与水按1:1 比例混合，实验室已准备）3.folin-酚甲液（实验室已准备）a 液4%na2co3: 0.2%naoh=1：1b 液1%cuso4 : 2%酒石酸钾钠 =1： 1a ： b= 50：1混匀4.样品血清（稀释200
2、倍）【实验步骤】1. 准备 9 支干净的试管，按表一顺序加入试剂表一试序号123456789剂标准蛋白 /ml00.20.40.60.81000血清（稀释0000000.20.20.21200 倍） /ml水/ml10.8 0.6 0.4 0.200.8 0.8 0.82. 各试管中加入 5ml folin- 酚甲液，用旋涡摇匀器充分混合均匀， 静置水浴（37度） 10min。3. 各试管中加入 0.5ml folin- 酚乙液，用旋涡摇匀气充分混合均匀， 静置水浴（37度） 30min。4. 使用分光光度计，用 640nm 波长进行比色。【实验结果】表二 各试管中标准蛋白浓度和od值序号12
3、3456789标准蛋白04080120160200/浓度 ug/mlod =640nm00.090.1390.2060.2610.3090.1770.1770.17a、 b、 c 三支试管中液体在640nm 处 od 值的平均值为od=640nm=（0.177+0.177+0.17 ）/3=0.175如 图一 蛋白质浓度的标准曲线 ，当 od=0.175时，标准蛋白质浓度为 109.375 g/ml，则 所测 样品 血 清的 浓 度 为 109. 375 g/ml ， 经转 化 ， 样 品血 清浓 度为10.9375g/100ml图一蛋白质浓度的标准曲线2标准曲线y = 0.0016x0.35
4、0.30.25值0.2do 0.150.10.050050100150200250标准蛋白浓度 ug/ml【思考讨论】1. 结果分析，三组平行实验最终测得的 od 值理论上是一样的，但我们的实验结果中有一个数值偏离较大，给最终的实验结果带来误差。分析原因：可能是因为加样的误差造成的三个试管中卵清蛋白的浓度不同，最终影响测定结果 可能是因为没有充分混匀， 导致每个试管中的浓度不同可能是因为分光光度计自身误差造成的。2. 实验注意事项：（1） 在使用分光光度计时，拿比色皿要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑面，防止自己手上的油污导致测量值不准确。（2） 在比色皿中装入的液体量大约是比色皿体积的三分之二，太多容易洒出来，给测量造
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