课题3　分解纤维素的微生物的分离

1、分解纤维素的微生物的分离,2、纤维素复合酶的组成及作用：,是地球上含量最丰富的多糖类物质； 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。,一、纤维素和纤维素酶,1、纤维素：,纤维素 纤维二糖,CX酶,C1酶,葡萄糖苷酶,P27,C1、CX酶,葡萄糖苷酶,葡萄糖,抄P27上,3、纤维素酶作用分解滤纸实验：,A,B,P27,摇床振荡1h,二、纤维素分解菌的筛选,纤维素,刚果红,红色复合物,纤维素分解酶,以纤维素分解菌为中心的透明圈,抄P28上,练一练：,1、下列关于纤维素酶的说法，错误的是（ ）,A、纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B、纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C、纤维素酶可用于去掉植物的细

2、胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,2、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是（ ）,A、刚果红能与纤维素形成红色复合物 B、刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C、刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D、若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌,D,B,三、实验操作流程图,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,P28,确保能分离到所需微生物,树叶腐殖土,埋滤纸30天,振荡培养1-2天变混浊,培养后加刚果红,培养前加刚果红,注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。,多次,资料一 ：土壤取样,选择纤维素丰富的环

3、境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境,P28,旁栏思考题 为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？ 纤维素分解菌的含量高。 将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？ 人工设置适宜环境,使纤维素分解菌聚集。 纸埋深10cm土壤。,P28左,P29,有选择作用，以纤维素粉作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。,资料二：选择培养,液体培养基，因配方中无凝固剂,有，只有以纤维素为碳源的微生物才可繁殖生长,用牛肉膏蛋白胨培

4、养基（有多种菌落）与之对照,P29,旁栏思考题 2 为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？,P29右,只能够适应这种营养条件的微生物迅速繁殖。,羧甲基纤维素钠,P29,先吃淀粉，再吃纤维素,培养前加刚果红,培养后加刚果红,纤维素菌,淀粉菌（模糊）,降解色素菌,纤维素菌,漂洗浮色,P29,培养后加刚果红（操作繁琐）,培养前加刚果红（倒平板时加，操作简便）,纤维素菌（明显）淀粉菌（模糊）降解色素菌（明显）,基本上是纤维素菌,可能菌落混杂。,方法一：培养后加刚果红 优点：颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 缺点：操作繁琐，刚果红会使菌落间发生混杂。 方法二：培养前加刚果红 优点：操作简便，不存在

5、菌落间混杂。 缺点1：产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈（可能选到淀粉菌）； 缺点2：有些微生物在培养时能降解色素，形成明显的透明圈（可能选到降解色素菌）。,旁栏思考题1 这两种方法各有哪些优点与不足？,抄P29,三、实验操作流程图,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,抄P28,确保能分离到所需微生物,树叶腐殖土,埋滤纸30天,振荡培养1-2天变混浊,培养后加刚果红,培养前加刚果红,注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。,多次,课题2:,土壤取样,选择培养基,直接分离,菌落 (分解尿素的细菌),（尿素为唯一氮源）,选择培养,稀释涂布平

6、板法,课题3:,土壤取样,选择 培养基,(纤维素分解菌),（纤维素为主要碳源）,稀释涂布平板法,鉴别 培养基,透明圈,挑选 菌落,（刚果红染色法）,P28左1,本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？,P28左,课题2是将土样直接稀释涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上分离得到菌落。,本课题将土样先不稀释，通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液稀释涂布在鉴别培养基上选出菌落。,纤维素分解菌,液体培养基,固体培养基,纤维素粉,CMC-Na,使纤维素分解菌迅速增殖,鉴别与筛选纤维素分解菌,选择培养基与鉴别培养基比较,1、复习微生物技术 2、选择培养基的操作方法,四、操作提示：,P2

7、9,将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养12天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养几次。,五、结果分析与评价,抄P29,a、选树林中富含腐殖多的土； b、潮湿、枯枝落叶多； c、分解纤维素的菌数量多。,a、选树林中富含腐殖多的土； b、潮湿、枯枝落叶多； c、分解纤维素的菌数量多。,抄P30,由于所取土样的环境不同，可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。,P30,P30,六、课题延伸,1.确定得到的是纤维素分解菌的方法,纤维素酶测定法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。,2.纤维酶的发酵法,固体发酵,液体发酵,阅读“课题延伸”，回答： 1.为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行 实验，纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵。 2.纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的 含量进行定量测定。,发酵产纤维素酶,液体,固体,葡萄糖,练一练,1、在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？（ ） A、生物结构与功能相适应的观点 B、生物结构与功能整体性观点 C、生物与环境相适应的观点 D、生物发展进化的观点,2、从土壤中分离获得某种微生物的步骤是（ ） 土壤取样