临床真菌学ppt课件

1、2019,.,1,二十二章 真菌学总论,2019,2,.,真菌学概述,真菌（fungus），也称Eumycota，来源于拉 丁文的fungus，即蘑菇。真菌属于真核细胞 型微生物，与原核细胞型微生物有很多区别 真菌细胞壁含有几丁质（chitin）和-葡聚糖 营养方式为吸收，无吞噬作用，营腐生、寄 生、共生和超寄生生活。,2019,3,.,原核细胞型微生物与真核细胞型微生物的比较,2019,4,.,真菌分类,我国普遍采用的是Ainsworth等分类法， 与医学有关的真菌为真菌门中的四个亚门: 接合亚门（zygomycotina） 子囊菌亚门（Ascomycotina） 担子菌亚门（Basidio

2、mycotina） 半知菌亚门（Deutermycotina）,2019,5,.,假丝酵母菌属（Candida） 隐球菌属（Cryptococcus） 表皮癣菌属（Epidermophton） 球孢子菌属（Coccidioides） 组织胞浆菌属（Histoplastoma）,2019,6,.,真菌生物学性状,真核细胞型微生物，属于真菌界（Kingdom Myceteae）。它具有典型的细胞核，不含叶绿素，以腐生或寄生方式摄取营养，细胞壁含几丁质（Chitin）和（或）纤维素，有完善细胞器，能进行有性生殖和（或）无性繁殖。,2019,7,.,真菌生物学性状,多数对人有益，仅少数导致人类疾病 对

3、人致病的真菌分为四类：病原性真菌、 条件致病性真菌、产毒真菌及致癌真菌。 目前大多数真菌的鉴定，形态学（包括真 菌形态、菌落形态）检查仍有重要意义 。,2019,8,.,单细胞真菌 酵母菌：孢子，无菌丝 类酵母菌：芽生孢子，假菌丝 多细胞真菌 丝状菌（霉菌）：孢子和菌丝,真菌形态特征,2019,9,.,单细胞真菌形态,2019,10,.,类酵母菌白假丝酵母菌,孢子,假菌丝,2019,11,.,多细胞真菌形态,2019,12,.,二相型真菌,机体内寄生37,单细胞型：,多细胞型：,含动物蛋白培养基,酵母菌,沙保氏培养基25,普通培养基25,丝状菌,2019,13,.,二相性真菌,2019,14,

4、.,真菌的基本形态结构菌丝,孢子,适宜温/湿度,芽管,延长呈丝状,菌丝 营养、气生、生殖菌丝,分支交织成团,菌丝体,2019,15,.,菌丝多形态,菌种鉴定,2019,16,.,1、真菌繁殖结构，一条菌丝可生成 多个孢子,真菌的基本形态结构孢子,2019,17,.,孢 子 的 分 类,有性孢子：同一/不同菌体上两细胞融合减数分裂而成 无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不 发生细胞融合。,2019,18,.,无性孢子,分生孢子,叶状孢子,孢子囊孢子,芽生孢子,厚膜孢子,关节孢子,大分生孢子,小分生孢子,大多真菌行有性/无性生殖，病原性真菌多以无性生殖为主。,2019,19,.,生殖菌丝末端细胞分裂或

5、收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成,大分生孢子的形态,2019,20,.,2019,21,.,厚膜孢子,2019,22,.,关节孢子,2019,23,.,2019,24,.,真菌的生长特性,营养要求不高，常用沙保氏培养基,基本成分：葡萄糖、蛋白胨、琼脂,生长条件：pH4.06.0 温度2228（深部 真菌37） 较高的湿度、O2,2019,25,.,菌 落 类 型,（1）酵母型/类酵母型（单细胞真菌菌落形式）,A、湿润、柔软而致密，形态似一般细菌菌落 B、镜下：酵母型 类酵母型,卵圆孢子、芽生孢子,芽生孢子、假菌丝,2019,26,.,菌 落 类 型,（2）丝状菌落（多细胞真菌菌落形式）,A、棉

6、絮状、绒毛状、粉末状（气生菌丝体） 菌落正背面呈不同颜色（可为鉴定依据） B、玻片小培养,乳酚棉蓝,镜下,孢子、菌丝及完整菌丝体,2019,27,.,酵母型菌落,2019,28,.,白假丝酵母菌菌落(类酵母型),2019,29,.,曲霉菌,2019,30,.,青霉菌,2019,31,.,临床标本的采集种类,（1）皮肤的角质性物质：毛发、指（趾） 甲、皮屑等。 （2）各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、 耳垢、痰、粪便、尿液等。 （3）血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑 脊液、淋巴穿刺液等。 （4）脓汁及渗出物。,2019,32,.,采集标本注意事项,（1）采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同

7、的临床标 本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。 （2）在用药前采集标本一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。,2019,33,.,采集标本注意事项,（3）采集的标本量要足 血液和脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。 （4）严格无菌操作在采集标本时严格无菌操作，并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要避免污染杂菌。 （5）采集的标本立即送检对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过2h。,

8、2019,34,.,真菌的检验方法,镜检真菌形态 真菌抗原检测 真菌分离培养与鉴定 真菌核酸检测 真菌毒素检测,2019,35,.,真菌标本直接检查,1.直接镜检：方法简便，快速,10%KOH,微加热,低倍/高倍镜检查有无菌丝/孢子,角质标本,（皮肤癣菌）,直接观察/染色后观察,2.抗原检测:,采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫测定法。,2019,36,.,常用的染色方法,常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检。 检测病人脑脊液标本中新生隐

9、球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色,2019,37,.,直接镜检意义,阳性结果意义 1.有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘膜假丝酵母菌病等 2.代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮肤癣菌、曲霉等 3.判断某些真菌种的致病性等,2019,38,.,直接镜检意义,直接镜检局限性 1.阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同 2.有假阳性结果，如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新生隐球菌；脂肪微滴也可与出

10、芽酵母细胞混淆,2019,39,.,分 离 培 养,真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。 培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。 大多数真菌培养的温度为28，但深部真菌为37。对二相性真菌培养时,28培养真菌呈菌丝相（霉菌型），37培养为组织相（酵母型）。,2019,40,.,真菌培养方法,平皿培养 :表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。 大试管培养:水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。 玻片培养(微量培养、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。,2019,41,.,观察菌落

11、形态时注意,1.菌落性质，是酵母菌还是霉菌。 2.菌落大小,一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大。 3.菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。 4.致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉;致病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。,2019,42,.,真 菌 鉴 定,菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要时将菌种送有关单位鉴定。 检验真菌常用的生化反应有糖(醇)类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染

12、真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。,2019,43,.,1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。 2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。 3.其他类如氟胞嘧啶。,抗真菌药物分类-化学结构分类,2019,44,.,1.作用于真菌细胞膜：两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。 2.作用于真菌细胞壁：尼可霉素Z、卡泊芬净及普拉米星（pradimicin）等。 3.作用于真菌核酸：干扰真菌DNA合成，5氟尿嘧啶（5FC）等。 4.其他：大蒜新素（allitridum）及冰醋酸（glaciale acetic acid）等。,抗真菌药

13、物分类-作用机理分类,2019,45,.,抗真菌药物药敏试验原则,1.提供两种以上有相当活性的抗真菌药物的可信测量方法 2.和体内的活性具有相关性，可预测治疗的效果 3.可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生 4.可预期研究新药的潜在治疗效能。,2019,46,.,真菌非培养检测技术,动物试验:分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究药物对真菌的作用等。 核酸检测:操作简便、省时省工、敏感性和特异性高的优点，但要一定的实验条件，并大多仍处于实验研究阶段，故目前不可能完全替代常规鉴定方法 。 真菌毒素的检测:生物学方法、薄层层析法、高效液相色谱法和间接竞争ELISA法等。,2019,47,.,常见

14、深部真菌病动物试验鉴别要点 取材 接种动物接种途径潜伏期 动物病变 白假丝 痰、尿 家兔、耳静脉、 35d肾脏明显肿胀，肾 酵母菌病 便、血 小白兔腹腔 皮质部位有白色脓疡 新生隐球 脑脊液、 小白鼠颅内、 28周 死亡。取标本涂片、 菌病 脓、痰、 腹腔 墨汁负染色见带荚膜 尿 的菌体 孢子丝 脓汁、痰液 大、小腹腔、 13周 肠系膜、腹膜有肉芽 菌病 活体组织、白鼠睾丸 组织形成，睾丸肿大 （涂片见G+圆形、卵圆 形“雪茄烟“状小体） 着色真脓汁、培养物大白鼠 腹腔、 肺、肾、腹腔呈肉芽 菌病、活体组织小白鼠 睾丸、 数周 肿损害 静脉 组织胞血、骨髓、大白鼠 腹腔、 死亡、肝、脾、肾淋

15、浆菌病痰、皮肤小白鼠 颅内 12周 巴结呈肉芽肿损害。 涂片，于巨噬细胞和 大单核细胞内可查到本菌 球孢子 血液、骨髓、小白鼠、腹腔、 12周 死亡。可从肝、脾、 菌病痰、皮肤豚鼠 睾丸肺等器官及腹膜找到本菌。 睾丸脓肿可见典型的球孢子菌,2019,.,48,第二十三章 浅部感染真菌,2019,49,.,浅部感染真菌概述,浅部真菌（superficial fungi）主要侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，寄生和腐生于表皮、毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病。 浅部感染真菌包括表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌三类。临床上最多见的浅部真菌为皮肤癣真菌，包括毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子菌

16、属。,2019,50,.,毛 癣 菌 属,毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门丝孢菌目丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动物的感染。 临床上常见的有 红色毛癣菌(trichophyton rubrum) 须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌) 许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌) 紫色毛癣菌（T.violaceum） 断发毛癣菌（T.tonsurans）,2019,51,.,微 生 物 检 验,一、标本采集 二、直接显微镜检查: 皮屑+10%KOH液 指甲+25%KOH/25%NaOH含5%甘油处理 常用湿标本，不加染色,直接显

17、微镜镜检,2019,52,.,微生物检验,三.分离培养 标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液 内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙 氏琼脂斜面25培养观察菌落特征。 四.其他鉴定试验 毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验,8/14/2020,.,53,2019,54,.,毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色,表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状,2019,55,.,表 皮 癣 菌 属,表皮癣菌属（Epidermophyton）目前只有一个种，即絮状表皮癣菌（E.floccosum）, 能引起人类感染。 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引起

18、皮肤感染如股癣、足癣、体癣、手癣和甲癣。,2019,56,.,絮状表皮癣菌生物学性状,皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子 沙氏培养基上培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可见厚膜孢子。,2019,57,.,表皮癣菌：菌落初为白色鹅毛状,以后变为黄绿色粉末状。粗棒状薄壁大分生孢子。菌丝球拍状,2019,58,.,小 孢 子 菌 属,我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染指甲。,2019,59,.,小孢子菌生物

19、学特性,皮屑和毛发+10%KOH处理 镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌 的鞘包裹着发干。 在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐 色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球 拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚 壁梭形（纺锤形）大分生孢子。,2019,60,.,小孢子癣菌：菌落为灰色、橘红色或棕黄色，厚壁大分生孢子，菌丝有结节状、梳状和球拍状,2019,.,61,第二十四章 深部感染真菌,2019,62,.,深部感染真菌,深部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，其中以隐球菌感染较常见。 组织胞浆菌为二相性真

20、菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。,2019,63,.,假丝酵母菌属,假丝酵母菌（Candida），俗称念珠菌，生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、假丝酵母菌属。 本属菌有81个种，其中有11种对人有致病性,其中以白假丝酵母菌为最常见的致病菌 ，热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也是常见致病菌。,2019,64,.,白假丝酵母菌,临床意义：可引起女性假丝酵母菌性阴道炎、外阴炎、念珠菌龟头炎、包皮炎鹅口疮等。,白假丝酵母菌引起的皮炎,白假丝酵母菌引起的粘膜白斑,2019,65,.,白假丝酵母菌,生物学特征：白假丝酵母

21、菌呈圆形或卵圆形， 直径36m。革兰阳性，着色不均匀。出芽 方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝， 在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。,白色念珠菌革兰染色镜下形态,2019,66,.,2019,67,.,白假丝酵母菌微生物检验,一、标本直接检查 二、分离培养鉴定 三、药物敏感试验 四、抗体检测 五、动物试验,2019,68,.,分离培养及鉴定,菌落特征:标本 沙氏培养基上 25 或37培养14d后，培养基表面可出现奶 油色类 酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽 生孢子。 鉴定试验: 芽管形成试验 ，厚膜孢子形成试 验，糖同化或发酵试验，产色培养基鉴定,2019,69,.,沙氏斜面,血平板,

22、返回,2019,70,.,芽管形成试验,返回,2019,71,.,产色培养基,返回,2019,72,.,热带假丝酵母菌,直接显微镜检查 将标本作涂片革兰染色后镜 检，观察革兰阳性的假丝酵母菌。 分离培养与鉴定 标本 沙氏培养基上形成 色暗而干燥的菌落取菌落作TZC反应 取菌 落作糖发酵或同化试验。芽管形成较迟（血清 中6h以上），不形成厚膜孢子、动物试验阴性,2019,73,.,隐 球 菌 属,广泛分布于自然界，也存在于人体表、口腔 和肠道中。 生物学特性：在组织中呈圆形或卵圆形，直 径一般在46m，外周有宽厚荚膜，荚膜较 菌体大13倍，折光性强，一般染色法不易着 色而难以发现而得名。常采用墨

23、汁负染色 法，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚 荚膜，非致病性隐球菌无荚膜。,2019,74,.,新生隐球菌（墨汁负染色）,2019,75,.,隐球菌微生物检验,直接镜检：用病人脑脊液作墨汁负染色检查是诊断 隐球菌脑膜炎最简便、快速之方法。 抗原检测：用免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异 性抗原，已成为临床上的常规诊断方法，其中以乳 胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。 核酸检测、药物敏感试验、抗体检测。 分离培养：将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐 球菌在25和37孵育的可生长，而非病原性隐球 菌在37时不生长。培养25d后观察菌落形态特 点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。,2019,76,

24、.,新生隐球菌菌落,2019,77,.,新生隐球菌微生物鉴定,1.酚氧化酶试验：将菌接种L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸 培养基中，培养25d，新生隐球菌呈棕黑色菌 落。用已知新生隐球菌和浅白隐球菌分别作阳性和 阴性对照。 2.脲酶试验：新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂 培养基的尿素形成NH4和CO2，使培养基pH升高， 培养基由黄色变为粉红色。白假丝酵母菌则为阴性。 3.糖同化及发酵试验：新生隐球菌能同化葡萄糖、半 乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖类、不同化硝酸 盐。非致病性隐球菌则不能同化肌醇。,2019,78,.,曲 霉 菌,曲霉菌是条件致病菌，人体对其有极强免疫 力，只有在人体免疫功能降低时

25、才能致病。 曲霉可引起呼吸系统曲霉病；全身性曲霉 病；曲霉可产生毒素引起机体食物中毒；致 癌作用 。,2019,79,.,曲霉微生物检验,直接显微镜检查 取痰液等被检材料涂于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢子。 抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验。 分离培养与鉴定：标本接种沙氏琼脂，室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性的分子孢子头和足细胞。根据不同的曲霉的形态和菌落特征确定菌种。,2019,80,.,曲霉结构图,返回,2019,81,.,烟曲霉菌落,烟曲霉,光镜 X400,2019,82,

26、.,黄曲霉菌落,黄曲霉,光镜 X200,2019,83,.,黑曲霉菌落,黑曲霉,光镜 X200,2019,84,.,土曲霉菌落,土曲霉，光镜 X200,2019,85,.,构巢曲霉菌落,构巢曲霉,光镜 X400,2019,86,.,杂色曲霉菌落,杂色曲霉,光镜 X400,返回,2019,87,.,组织胞浆菌属,有两个种：荚膜组织胞浆菌、组织孢浆菌的杜波变种。 本菌传染性极大，主要侵犯网状内皮系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。 组织胞浆菌是一种二相型真菌，在25培养时呈典型菌丝体，在37培养时为酵母型。,2019,88,.,微生物检验,1.直接显微镜检查应涂片染色后检查。 痰液等标本：涂

27、片后先用甲醇固定10min，再用姬 姆萨染色镜检 。 皮损、脓液等标本：用20%KOH涂片后镜检 2.抗原检测、药物敏感试验、抗体检测 3.分离培养与鉴定 标本 含抗生素的沙氏培养基 25培 养，生长缓慢，有时需46周才开始生长，逐渐 形成白色至棕色绒毛状菌落 。,2019,89,., 转种于血琼脂培养基上，37培养，很快形成酵母型菌落。 培养物显微镜特征 ：25沙氏培养，可以发现特征性的大分生孢子，但初代培养不典型，继代培养可有典型大分生孢子。 鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并作脲酶试验和明胶液化试验。,2019,90,.,荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮。血液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞,2019,91,.,卡氏肺孢菌,卡氏肺孢菌（pneumocycsis carinii,PC），曾称为卡氏肺孢子虫。 卡氏肺孢菌可寄生于多种动物，也可寄生于健康人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏肺孢菌病的传播途径主要是空气传播，在健康人体内，多