结核病实验室检查的临床意义

1、结核分枝杆菌实验室检测方法，主要内容，1。结核分枝杆菌的病原学基础。结合全球结核分枝杆菌的流行情况，3 .结核分枝杆菌的实验室检测方法及临床应用，1。结核病的病因学基础，结核分枝杆菌：一种细长的、轻微弯曲的、有时分支的杆菌，大多是耐酸的，也称为抗酸杆菌。这种细菌含有分枝菌酸和细胞壁。该属已鉴定出70多种细菌，可分为三类：结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌；根据生长速度，它可以分为三种类型，即生长缓慢的细菌，生长迅速的细菌和未培养的细菌。结核分枝杆菌是人和动物结核病的病原体，包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌。结核分枝杆菌属于生长缓慢的分枝杆菌，因此及时准确地诊断结

2、核病和有效控制传染源对预防结核病非常重要。结核实验室检查、细菌学检查、免疫学检查、分子生物学检查、涂片染色显微镜检查、分枝杆菌的分离培养、药物敏感性试验、分枝杆菌的种类鉴定、最原始和最基本的检测方法、涂片染色显微镜检查、耐酸染色的原理，以及分枝杆菌的细胞壁含有大量的脂质。被肽聚糖包围的分枝杆菌通常不容易着色，需要长时间加热或染色以促进其着色。然而，分枝杆菌中的分枝菌酸在与染料结合后很难被酸性脱色剂脱色，因此称之为耐酸染色。涂片染色镜检的临床价值适用于多种标本；操作简单，价格低廉。涂片显微镜的临床应用，1。直接涂片镜检两个痰标本涂片阳性结核和开放结核抗酸杆菌阳性；一份痰标本直接涂片抗酸杆菌阳性影

3、像检查与活动性肺结核的表现一致。涂片显微镜的临床应用。第二，结核病治疗评价的主要依据之一是治愈：涂阳肺结核患者完成了规定的疗程，连续两次涂片结果均为阴性，其中一次是治疗结束时的涂片。治疗失败：在治疗的第五个月末或疗程结束时，新涂阳患者痰涂片检查为阳性，而在治疗过程中任何一次涂阴肺结核患者痰菌检查均为阳性，为治疗失败。缺点：不能区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌，不能区分死菌和活菌。当结核分枝杆菌暴露于异烟肼时，某些条件将失去耐酸性并出现假阴性。检测灵敏度低(104-105个细菌/毫升)。分枝杆菌的分离培养和结核病的培养仍是目前结核病诊断的金标准，尤其是药敏试验结果对指导临床用药和耐药性检测具有重

4、要作用，是鉴别其是否为活菌的可靠方法。传统的固态培养方法需要46周才能检测到结核的生长，阳性率仅为30-40%；各种特异性差的分枝杆菌都能生长。为确定是否为结核分枝杆菌，应结合分枝杆菌的鉴定和药物敏感性试验。快速培养法：用于检测细菌生长过程中代谢产生的co2或消耗的o2，显微镜直接观察，以及变色液体培养基。快速培养法的报告时间约为13周，比传统的固体培养法快，但仪器过于昂贵。结核病可通过直接涂片一份痰标本和显微镜检查抗酸杆菌和结核分枝杆菌在一份痰标本中的阳性培养来诊断。痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核的影像学表现。1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性，对判断耐多药结核病的疗效具有临床价值。

5、治愈：(1)患者完成了疗程，在疗程的最后12个月内失败：在最近12个月的治疗中，两个或更多的痰培养阳性；或者在过去的三次中，任何一种文化都是积极的。分离培养的优点是比直接涂片法灵敏度高。理论上，10-100细菌/毫升可以检测阳性；特异性高于直接涂片法，从菌落生长速度和色素产生量可初步判断非结核分枝杆菌，分离出具有活力的纯培养物，为进一步的药敏试验提供了依据。隔离和培养的缺点是，需要很长时间，根据接种的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见的菌落。结果由于标本保存和运输时间、培养基成分和质量、预处理方法等的影响。操作比直接涂片法更复杂，直接涂片法要求严格的训练和更高的实验室要求。成本是直接涂片法的7

6、-8倍。结核病实验室检查、细菌学检查、免疫学检查、分子生物学检查、涂片染色镜检、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药敏试验、体液免疫检查、细胞免疫检查、体液免疫检查(血清学检查)、结核抗体测定、结核抗原测定、循环免疫复合物测定、血清学诊断，其技术优势是疾病早期诊断的理想方法。无需活细胞培养和特殊仪器设备，操作简单。结果表明，目前用于血清学诊断的主要方法有：酶联免疫吸附法、点金免疫渗滤法、免疫印迹法等。2011年，世界卫生组织正式宣布：由于目前市售血清学试剂对结核病的检测存在较大差异，且检测结果有较高的假阳性和假阴性比例，因此不推荐使用血清学方法作为结核分枝杆菌的诊断实验1。1世界卫生组织用于诊断结核病

7、的商业血清学诊断试验。/publications/2011/9789241502054 _ eng.pdf，血清学试验的评价，原因：由于所用的测定方法、试剂或抗原和抗体不同，测定结果也大不相同。世卫组织评估了来自不同国家的19种试剂盒产品。结果表明，与痰培养相比，试剂盒的灵敏度和特异性分别为1%和53.99%。结核细胞免疫学检查，结核菌素皮肤试验蛋白水平分子诊断：-干扰素释放试验(igra)，迟发性细胞超敏反应1)方法：在左前臂屈曲中间皮内注射1:2000 ot或ppd溶液0.1 ml (5单位)，并在4872小时内测量皮肤硬结直径。结核菌素试验(

8、ppd试验)，2)判断标准：阴性4毫米，弱阳性5-9毫米，阳性10-19毫米，强阳性20毫米或局部水泡坏死，3)结核菌素试验阴性意义：无结核菌素感染；不能排除结核病感染。阳性：我感染了肺结核，但我现在不一定生病了。强阳性：活动性肺结核是可能的，a、过敏尚未确定；b、免疫抑制，如皮质类固醇或营养不良，ppd中所含的抗原为病原分枝杆菌、环境分枝杆菌和卡介苗菌株所共有，且结果受卡介苗接种和其他分枝杆菌感染的影响，特异性差。当免疫功能低下且灵敏度较低时，可能会出现假阴性结果。阴性与正常免疫有一定的意义。强烈的积极表达具有一定的意义。对结核病有过敏反应，并且有许多淋巴结结核的强阳性病例。该方法经济简单，

9、可用于大规模流行病学筛查和普查，但存在明显缺陷。结核菌素试验的临床价值，结核感染患者体内有特异性效应t淋巴细胞，当效应t淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时，它们会分泌各种细胞因子(ifn-)。因此，效应性t淋巴细胞的检测可用于结核病或潜伏性结核病感染的诊断。由于其存活时间短和特异性强，效应器t细胞可用作生物体是否感染的指标，而与临床症状无关。目前，基于igra的产品已被写入20多个国家的结核病诊断和治疗指南目前，在进口igra使用的商业试剂有两种：1)来自澳大利亚赛利斯蒂斯公司的试管定量结核金(qft-吉特)，2) t-spot。结核，蛋白质水平分子诊断：-干扰素释放试验(igra)，来自英国牛津

10、免疫技术公司。结核病原则。结核病是一种利用获得专利的特异性抗原(esat-6/cfp-10)检测受试者体内是否存在结核效应t淋巴细胞，从而判断受试者目前是否感染结核分枝杆菌的新方法。结核特异性抗原：早期分泌抗原靶6 (esat-6)，培养滤液蛋白10 (cfp 10)，t-spot。结核临床表现指数，特异性仅对结核分枝杆菌复合体敏感。与大多数环境分枝杆菌和卡介苗无交叉反应。美国食品和药物管理局数据：特异性97.1%(297/306)。国内临床资料：特异性94.1%(478/508)。敏感性基本不受低免疫/抑制的影响。肺外结核患者的检出率很高。美国食品和药物管理局数据：敏感性95.6%(175/

11、183)，国内临床数据：敏感性95.3%(624/655)，对实验结果的解释，阴性结果表明患者体内不存在结核分枝杆菌特异性效应t细胞。假阴性结果：感染的不同阶段；少数免疫系统功能障碍患者的阳性结果提示患者体内存在结核分枝杆菌特异性效应细胞，患者体内存在结核感染。然而，是否为活动性肺结核，应结合临床症状和其他检测指标综合判断。假阳性结果：当4种环境分枝杆菌被感染时：堪萨斯分枝杆菌(kansas)、苏尔盖分枝杆菌(su氏)、海洋分枝杆菌(sea)、戈登分枝杆菌(gordonae)，方法学的优势和检测特异性的提高有助于临床区分卡介苗接种和环境分枝杆菌感染引起的“假阳性”。避免了无效药物临床检测灵敏度

12、的提高，有利于临床结核病的早期发现和治疗，避免了疾病的传播和扩散，48小时内快速产生结果，具有方法学上的局限性，不能区分活动性结核病和潜伏性感染，不能提示临床患者的病变，需要与临床判断相结合。目前，无法判断患者是活动性结核病还是潜伏性感染不适合治疗结核病患者。疗效监测和检测费用高(600-700元/次)。在体外r-干扰素释放试验中，活动性结核通过有效的抗结核治疗后，结核分枝杆菌的负荷减少，效应t细胞数量减少。因此，在理论上，igra结果应该由阳性变为阴性，但在临床实践中，igra结果很低。在2012年发表的一项荟萃分析中，指出t-spot的阴性率。抗结核治疗后的结核病发生率为5.71%-13.

13、93%，表明igra在评估抗结核治疗方面的作用有限。干扰素释放试验结果在成人和儿童抗结核治疗中的应用。clin ther，2012，34: 1041-1048。igra在评估抗结核治疗方面的作用是有限的。结核病实验室检查、细菌学检查、免疫学检查、分子生物学检查、涂片染色镜检、分枝杆菌分离培养、药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、体液免疫学诊断、细胞免疫学诊断、聚合酶链反应(pcr) dna测序dna探针技术、分子生物学检测方法。近年来，核酸扩增技术和杂交分析技术的发展为分枝杆菌的检测、鉴定和药物敏感性试验提供了极大的便利，可将诊断时间从数周缩短至数天甚至数小时。结核病基因诊断技术的研究和应用主要

14、包括聚合酶链反应、核酸探针杂交、基因测序、基因芯片、基因分型等。实时荧光聚合酶链反应技术，本实验室使用的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光聚合酶链反应法)采用单管单份包装技术，操作过程非常简单；引入荧光检测技术，简化了检测步骤，整个扩增和扩增后检测不需要打开扩增管套，从根本上克服了聚合酶链反应留下的污染。荧光探针聚合酶链反应检测技术融合了聚合酶链反应扩增的高灵敏度、探针杂交的高特异性和荧光能量转移的实时跟踪特性，大大提高了检测精度，并能充分保证检测的稳定性和重复性。结核分枝杆菌聚合酶链反应检测的临床意义。1.对痰阴性肺结核的快速诊断具有重要的临床应用价值。在临床工作中，痰菌阴性且经综合临床分析确

15、诊为肺结核的患者约占肺结核患者的60%-70%。据报道，40%-60%的痰阴性肺结核患者在随访1-3年后会发展为细菌阳性或更典型的肺结核。因此，获得结核分枝杆菌的病原学诊断和聚合酶链反应检测的临床意义非常重要。中国抗结核协会杂志2012年发表的一篇文章研究指出，476例细菌阴性肺结核患者中，116例聚合酶链反应阳性，检出率为24.4%，而细菌阳性肺结核患者的检出率为97.0%。2.聚合酶链反应可作为临床痰涂片和痰培养的补充，为临床诊断和治疗提供帮助。阳性涂片不能区分是结核分枝杆菌还是非结核分枝杆菌。这两种治疗方法有很大的不同。ntm通常对常用的抗结核药物无效。因此，对于涂片阳性标本，有必要进行

16、结核分枝杆菌脱氧核糖核酸检测，以进一步确认是否是真的结核分枝杆菌感染。3.可作为结核性关节炎和泌尿系结核早期诊断的可靠指标。采用fq-聚合酶链反应对118例疑似肺结核患者(包括52例关节炎患者和66例尿路感染患者)的关节腔积液和尿液中的结核分枝杆菌进行检测，并与抗酸染色法进行比较。结果52例关节炎患者中，确诊为结核性关节炎36例，结核分枝杆菌阳性22例，确诊病例22例，阳性率为61.1%。抗酸染色阳性2例，阳性率为5.6%。66例泌尿系统疾病患者中，52例诊断为泌尿系结核，32例结核dna阳性，32例均为确诊病例，阳性率为61.5%，仅有4例抗酸染色阳性，阳性率为7.7%。结论应用fq聚合酶链反应检测关节积液和尿液中结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性，可作为结核性关节炎和泌尿系结核早期诊断的可靠指标。2010年发表在中国抗结核协会杂志上的结核分枝杆菌聚合酶链反应检测的临床意义。4.聚合酶链反应在临床疗效观察中比涂片