杜氏肌营养不良症(DMD)

1、主讲人：牟胜、王超、郑爽、车Xi、苏波、陶韦杰、杜氏肌营养不良症(DMD)，属于X连锁隐性遗传病，是男性中常见的遗传病。发病率约为1/3 500活男孩，大多数妇女是致病基因的携带者。发病率很低，症状轻微。男性患者发病年龄小，潜伏发病，病程长，症状严重，死亡率高。患者常表现为进行性肌肉萎缩和虚弱，伴有腓肠肌假肥大，大多数在3岁或5岁时发病，病程进展迅速，大多数在20岁左右死于心肺衰竭。儿童有一个从躺到站的特殊过程(高尔标志)，他们以鸭子的步态行走。糖尿病肾病-临床表现，药物治疗：糖皮质激素治疗是唯一一种经循证医学证明有效并能延缓糖尿病肾病病程的药物。短期口服激素疗法可增强骨骼肌的力量和功能，并可

2、在较长时间内稳定骨骼肌的力量和功能。基因治疗：腺相关病毒(AAV)，不直接引起人类疾病，免疫原性较低，被用作载体引入人工定制的Dys基因。康复治疗、骨科治疗、社会心理治疗等。DMD-临床治疗，DMD-遗传模式和特征，(1)通常只有男性患者的谱系，(2)当父母双方都没有生病，女儿不会生病，但儿子可能会生病；(3)由于交叉遗传，患者的同胞、叔伯、堂兄弟和侄子往往是这种疾病的患者；(4)由于男性患者的子女正常，可见返祖现象；(5)女性患者的父亲必须是患者，母亲必须是携带者。注意：在XR疾病中，男性致病基因只能从母亲那里传播，但将来只能传播给女儿，没有从男性到男性的传播。也就是说，从父亲传给女儿，从母

3、亲传给儿子，这就是所谓的交叉继承，D-M-D继承模式和特点。D型肌营养不良症是由肌营养不良蛋白(Dys)基因突变引起的，属于一种常见的进行性肌营养不良症。已经证实，人肌营养不良蛋白基因位于X染色体(Xp21.1 3)的短臂上，全长约2 220kb，包括79个外显子和14kb的cDNA长度，是已知的最大的人基因。分子遗传学和突变，Dys和肌营养不良蛋白组装在一起，形成肌营养不良蛋白的结合蛋白复合物(DAPC)。DAPC形成了一个重要的结构，通过肌膜传递信号，连接细胞外基质和细胞内肌动蛋白骨架。Dys基因表达的缺乏将影响DAPC的形成并中断分子桥，这至少导致两个结果：第一，当肌肉离心收缩时，细胞膜

4、变得更加脆弱并将被机械力破坏；其次，框架蛋白，尤其是对机械力敏感的离子通道，将失去平衡。这是导致疾病的机制。分子遗传和突变。约3 0%的糖尿病患者为自发突变，其余为X染色体隐性遗传。在各类突变中，单个或多个外显子缺失突变的患者分别占65%和70%；无意义或帧移位引起的点突变占30%，重复占5%和15%。因此，DMD突变类型主要是缺失，其特征是Xp21外显子缺失的异质性。DMD-分子遗传与突变、细胞遗传学检查、生化检查、基因诊断、DMD-实验室诊断、染色体检查(X，Y) X染色质检查X染色质检查可刮掉口腔粘膜和阴道粘膜的上皮细胞，或涂片绒毛或羊水中的胎儿脱落细胞，用硫堇或甲苯胺蓝染色，并在光镜下

5、计数X染色质的数量。y染色质检查y染色质检查适用于具有一条或多条y染色体的个体或细胞群。实验室诊断和生化诊断可以定性和定量分析血清酶和蛋白质。血清肌酸激酶(CK)含量是血清酶学检查中最有价值的。DMD-实验室诊断，基因诊断，DMD-实验室诊断，DMD-风险评估，DMD家族图谱，DMD约为XR遗传病女性携带者的三分之一，血清肌酐正常，2名为携带者，染色体核型XAXa，产前诊断有两个时间窗，最好在1012孕周采集绒毛选择绒毛进行产前诊断有三个原因：(1)防止母体污染：DMD和SMA主要是缺失突变，母体污染会导致诊断错误，如果不培养带血羊水，会直接导致诊断错误，而绒毛可以通过形态学检查准确选择。(2

6、):的早期诊断，如胎儿受累，更便于处理(夫妻双方的知情选择)，且在分析失败或出现问题的情况下，可在晚些时候取羊水；在妊娠中期，如果出现血性污染，需要进行羊水培养。回旋余地太小，很难重新取样。(3)成功率高。从：绒毛中提取的DNA质量高，成功率高。产前诊断-时机，由于基因突变的复杂性，在产前诊断前应进行先证者预分析，以确定基因突变的细节和父母的遗传多态性标记是否提供了杂合性信息，从而确定该家系产前诊断的方式和策略。首先，应分析家族成员21号染色体上的STR标记。这个测试的优点是：首先，它可以检测21三体综合征，因为孕妇在第二次分娩时通常年龄较大，并且生下21三体综合征孩子的风险大大提高；第二是判

7、断是否存在母体污染以及污染的程度。有时，“胎儿材料”完全是母性的；第三，检查分析的DNA材料中是否有任何混淆。后两点是产前诊断错误的主要原因。产前诊断-策略，确定胎儿性别，如果胎儿是男性，应分析先证者的遗传突变或多态性标记，以确定胎儿是否获得突变等位基因；如果你是女性，你可以停止基因诊断，因为女性杂合子通常不会生病。产前诊断-策略、多重聚合酶链式反应-多重聚合酶链式反应探针连接多重扩增(MLPA)、变性高效液相色谱(DHPLC)、肌营养不良蛋白免疫组织化学、DMD -产前基因诊断方法，DMD是一种缺失突变，占基因突变的55e%，主要分布在5-末端和中央缺失热点，当在其缺失突变热点进行基因检测时

8、，至少有一半的患者可以被检测到。目前，它是诊断缺失型糖尿病最简单、最有效的方法，已成为糖尿病/骨密度患者基因诊断和产前基因诊断的首选。此外，该技术可以根据缺失外显子是全编码还是移位编码来判断患者的预后。产前诊断-缺失突变检测方法多重聚合酶链反应可检测男性缺失患者，对女性携带者和非缺失突变患者无效。目前，STR-PCR技术已成为非缺失型糖尿病家系连锁分析的首选方法。这种方法在先证者或先证者死亡但携带阳性者的家庭中更有价值，但先证者死亡的零星病例意义不大，是一种概率性诊断。选择的STR位点越多，分析结果越可靠。多重PCR和STR多态性单倍型连锁分析相结合是检测缺失和重复的理想方法，可以对胎儿进行初

9、步的产前基因诊断，但不能检测新生儿突变引起的散发性DMD，可以通过其他方法解决。产前诊断是一种非缺失突变检测方法。MLPA是目前检测缺失和重复突变的一种新方法，特别是用于筛选致病突变未知的女性携带者的基因突变。它可以综合分析DMD基因79个外显子的缺失或重复突变，扩大了传统mPCR法检测缺失的范围。它简单高效，但技术要求高，成本高。产前诊断探针连接多重扩增(MLPA)，DHPLC技术是通过离子对反相液相色谱分析区分异源双链核酸分子和同源双链核酸分子的DNA片段，并筛选DNA的变化，它不需要放射性同位素和溴化乙锭凝胶，相对高效、经济、自动化程度高。产前诊断变性高效液相色谱(DHPLC)，不同程度抗肌营养不良蛋白的缺乏是DMD的基本病理基础。因此，在DMD患者或携带者中抗肌营