高一生物课题1微生物的实验室培养43页教学课件

1、专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养,一、培养基 1.概念:人们按照微生物对_的不同需求,配制出供其 _的营养物质。 2.种类:,营养物质,生长繁殖,液体,琼脂,3.营养组成:各种培养基一般都含有_、_(提供碳元素的 物质)、_(提供氮元素的物质)和无机盐,此外还需要满足 微生物生长对_、特殊营养物质(如维生素、氨基酸和碱基等) 以及_的要求。,水,碳源,氮源,pH,氧气,二、无菌技术 1.关键:防止_的入侵。,外来杂菌,2.消毒和灭菌:,表面或内部,强烈,能,巴氏消,毒法,灼烧灭菌,三、大肠杆菌的纯化培养 1.制备培养基: (1)最常用的细菌培养基:_。,牛肉膏蛋白胨培养基

2、,(2)配制步骤:,配方,黏稠,称量纸,迅速,琼脂,琼脂糊底,烧杯破裂,高压蒸汽,干热,50,酒精灯火焰,2.纯化大肠杆菌: (1)纯化培养方法:在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌,最 常用的方法有_法和_法。 (2)纯化培养的原理:想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖 而来的肉眼可见的_,即获得较纯的菌种。,平板划线,稀释涂布平板,菌落,(3)平板划线法:通过_在琼脂固体培养基表面连续_ 的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其具体 操作是: 将_放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。 在火焰旁冷却_,并打开棉塞。 将试管口通过_。 将已冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液。 将试管口通

3、过火焰,并塞上棉塞。,接种环,划线,接种环,接种环,火焰,左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸 入平板内,划三至五条_线,盖上皿盖。注意不要划破培养 基。 灼烧_,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始往第 二区域内划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。注 意不要将最后一区的划线与第一区相连。 将平板_,放入培养箱中培养。,平行,接种环,倒置,(4)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度_,然后将不 同稀释度的菌液分别_到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 其操作步骤是: 系列稀释(梯度稀释)操作:,稀释,涂布,涂布平板操作: a.将涂布器浸在盛有_的烧杯中。 b.取少量菌液

4、(不超过0.1 mL),滴加到培养基_。 c.将沾有少量_的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷 却8 s10 s。 d.用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培 养皿,使菌液分布均匀。,酒精,表面,酒精,四、菌种的保藏,频繁,长期,固体斜面,液体,甘油,产生变异,【思考辨析】 1.判断正误 (1)平板划线操作中,接种结束后灼烧接种环的目的是杀死接 种环上原有的微生物。( ) 【分析】接种结束后灼烧接种环的目的是及时杀死接种环上 残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 (2)在稀释涂布平板法操作中吸管要在酒精灯火焰周围使用。 ( ) (3)平板划线时,在第一次划线后,每次划线都

5、要从上一次划 线的末端开始。( ),(4)消毒和灭菌实质上是相同的。( ) 【分析】消毒使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内 部的部分微生物,不包括芽孢和孢子;灭菌使用强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。,2.问题思考 (1)在配制培养基时,各组分溶化以后是否立即进行灭菌?为什么? 提示：不是。由于不同的微生物生长对pH的需求不同,所以在培养基各组分溶化后需要先用酸或碱将pH调至微生物生长的最适宜条件,再进行灭菌处理。 (2)倒平板时为何将灭过菌的培养皿放在酒精灯的火焰旁? 提示：避免周围环境中微生物的污染。,一、制备培养基 1.配制原则: (1)目的明确:不同微生

6、物需求不同,根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调:营养物质的浓度和比例要适宜。 (3)pH要适宜:为维持pH的相对恒定,可在培养基中加入缓冲剂,常用磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。,2.培养基的营养成分及功能:,【易错提醒】有关培养微生物所需营养的几点提醒 (1)不同微生物对营养的需求不同,所以培养不同的微生物所需要的营养可能不同。 (2)对异养微生物来说,含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源、能源。 (3)培养微生物时营养物质要协调。营养物质过少不能满足微生物的营养需要,过多对微生物的生长有抑制作用。,【典例训练1】下表是某微生物培养基成分,请据此回答:,(1)上表培养基可培养的微生物类型是

7、_。 (2)若不慎将过量NaCl加入培养基中,如不想浪费此培养基,可 再加入 ,用于培养_。 (3)若除去成分,加入(CH2O),该培养基可用于培养 。 (4)表中营养成分共有 类。 (5)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是 。 (6)上表中各成分质量确定的原则是 。 (7)若上表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分是 。,【解题关键】判断微生物的代谢类型依据培养基中有无有机碳源;根据培养基提供的主要营养成分分析表格中的培养基成分,培养及配制的原则是目的明确、营养协调、pH适宜。,【解析】题表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类,缺乏碳源和特殊营养物质。该培养基中没有碳源,说明培

8、养的微生物是从空气中获得碳源的,即可判断培养的微生物就是自养型微生物。该培养基中加入了过量食盐,就可以培养耐盐的金黄色葡萄球菌,但金黄色葡萄球菌是异养型微生物,这个培养基还需要加入有机碳源。该培养基若加入(CH2O),培养基中就有了碳源,但除去成分,却使培养基中没有了氮源,这时就只能用于培养固氮微生物了。微生物生长需要一定的pH,所以培养基装瓶前需要调节pH。表中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。对于菌种鉴定,往往用的是固体培养基,而表中没有凝固剂,故需要加入常见的凝固剂琼脂。,答案：(1)自养型微生物 (2)含碳有机物 金黄色葡萄球菌 (3)固氮微生物 (4)3 (5)调节pH (6)

9、依微生物的生长需要确定 (7)琼脂(或凝固剂),【变式训练】下列叙述正确的是( ) A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基 C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D.微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的单个细菌,【解析】选A。培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质。培养基的种类根据划分依据的不同而不同,如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养基。固体培养基是液体培养基添加凝固剂而形成的,其他成分均相同。微生物形体微小,肉眼无法看到,必须借助仪器才能看到,在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落

10、。,二、常见消毒与灭菌方法的比较,【思维拓展】(1)酒精消毒时,70%的酒精杀菌效果最好。原因是浓度过高,菌体表面蛋白质变性过快从而凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌能力减弱。 (2)具体选择消毒还是灭菌需要考虑:一是要考虑效果,灭菌的效果比消毒要好;二是要考虑操作对象的承受能力,活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒,而不能灭菌。,【典例训练2】细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理,这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌( ) A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、接种环 【解题关键】解决该题需明确

11、:消毒杀死部分微生物;灭菌杀死所有微生物。二者采用的方法、程度不同决定了它们的适用范围不同。,【解析】选C。本题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备,通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧,可以迅速彻底地灭菌,适用于微生物的接种工具,如接种针、接种环。,三、纯化大肠杆菌操作过程中的注意事项 1.平板划线法中几次灼烧接种环的目的:,2.稀释涂布平板法操作比较复杂,且各个细节均需保证无菌操作,应特别注意: (1)酒精灯与培养皿的距离要适宜。 (2)吸管头不要接触其他任何物体。 (3)吸管要在酒精灯火焰周围使用。 (4)涂布器末端浸在盛有70%酒精的烧杯中,取出时,要让多余的酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃,注意防火。,【易错提醒】(1)在稀释涂布平板操作中,每个步骤都要注意无菌操作,以防培养基被污染,影响实验效果。 (2)每一稀释倍数菌液都至少要涂布三个平板,作为实验重复,求平均值,若其中有菌落数与其他实验差距悬殊者,应舍弃该实验数据,不进行统计、计算。 (3)平板冷凝后,皿盖上会凝结成水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。,【典例训练3】稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述