洗发水中米诺地尔检测方法的建立

1、 学校代码：10904学 士 学 位 论 文洗发水中米诺地尔检测方法的建立姓 名：张琼琼学 号：3指导教师： 王 飞学 院：生命科学学院专 业：制药工程完成日期：2015年5月29日 学 士 学 位 论 文洗发水中米诺地尔检测方法的建立姓 名：张琼琼学 号：3指导教师： 王 飞学 院：生命科学学院专 业：制药工程完成日期：2015年5月29日 摘 要米诺地尔具有防脱发的药理活性，但不得将其加入化妆品中，为检测洗发水中是否含有米诺地尔，本论文首先对洗发水进行前处理，采用紫外分光光度法进行检测，检测波长为231nm。经实验，该方法的检测限LOD为0.038g/ml，平均回收率为99.72%，精密度

2、RSD小于2%，在24h内吸光值变化不大，吸光值与浓度的线性关系为A=0.2324C+0.0052，R2=0.9997。由结果可知，本法专属性较强，灵敏度较高，回收率较高，精密度较好，稳定性较好，线性关系良好，可用于检测洗发水中是否含有米诺地尔。关键词：紫外分光光度法；洗发水；米诺地尔 AbstractMinoxidil have the medicinal activity of anti-hair loss, but minoxidil shall not be added to cosmetics.To detect whether contain minoxidil in shampo

3、o, the sample first of all was pre-treated , and the content of Minoxidil was determined by UV Spectrophotometry, the measured wavelength is 231nm. By experiment, the method of the detection limit LOD is 0.038g/ml, the average recovery is 99.72%, the precision of RSD is less than 2%, the absorbance

4、value change within 24h is not big, the linear relationship between absorbance and concentration is A=0.2324C+0.0052，R2=0.9997.To sum up,the method have strong specificity, high sensitivity,the method of recovery rate is higher, the precision is good, the stability is good,and has good linearity, an

5、d can be used to detect whether contain minoxidil in shampoo. Key words: UV; Shampoo; Minoxidil目 录第1章 前 言1第2章 料材与仪器22.1 原料与试剂22.2 仪器与设备2第3章 实验方法33.1 米诺地尔对照品溶液的制备33.2 洗发水供试品溶液的制备33.3 专属性试验33.3.1 鉴别实验33.3.2 空白干扰33.4 检测限试验33.5 回收率试验43.6 精密度试验43.7 稳定性试验43.8 线性试验4第4章 结果与分析54.1 专属性试验结果54.1.1 鉴别实验结果54.1.2

6、空白干扰结果54.2 检测限试验结果64.3 回收率试验结果64.4 精密度试验结果64.5 稳定性试验结果74.6 线性关系8第5章 结论与讨论9参考文献10致 谢12第1章 前 言脱发是日常生活中的常见现象，随着社会压力不断增大和生活节奏的加快，环境的不断恶化，以及不良的饮食习惯，脱发患者越来越多。在日常生活中，人们在抑制脱发时，除了改善饮食情况外，更多地通过使用防脱洗发水治疗脱发。由于防脱洗发水非常热销，一些不法商家在巨大经济利益驱使下，在中草药育发类化妆品中违法添加米诺地尔以增强抗脱发效果。根据我国2007年版化妆品卫生规范规定：米诺地尔及其盐和衍生物为化妆品禁用组分，即在我国米诺地尔

7、不得用于化妆品原料及其添加成分1。米诺地尔为白色或类白色结晶性粉末，在冰醋酸中溶解，在甲醇中略溶，在氯仿或水中微溶，在丙酮中极微溶解2。米诺地尔结构式见图1-1。图1-1 米诺地尔结构式米诺地尔是一种周围血管舒张药3，是世界上唯一对脱发有明显疗效的外用化学药，局部长期使用，可刺激脱发和斑秃患者的毛发生长4-5，美国FDA已通过了2%和5%米诺地尔溶液为非处方药6。但长期大量使用米诺地尔可产生一系列不良反应，包括刺激性皮炎（红肿、皮屑和灼痛）、非特异性过敏反应、过敏性鼻炎、面部肿胀、头晕、眩晕、胸痛、血压变化等4,7。目前，市场上的洗发水质量参差不齐，违法添加米诺地尔的现象严重，本论文采用紫外分

8、光光度法8-9检测洗发水中是否含有米诺地尔，以期为洗发水的使用安全性和稳定性提供保障。第2章 料材与仪器2.1 原料与试剂所用原料与试剂见表 2-1。表2-1 原料与试剂原料与试剂批号生产厂家米诺地尔-中国药品生物制品检定所甲醇（分析纯）天津市福晨化学试剂厂海飞丝洗发水广州宝洁有限公司柠檬酸（分析纯）天津市福晨化学试剂厂冰醋酸（分析纯）天津市致远化学试剂有限公司2.2 仪器与设备所用仪器与设备见表2-2。表2-2 仪器与设备仪器名称型号生产厂家紫外分光光度计UV-2000尤尼柯（上海）有限公司高速台式离心机TGL-16G上海安亭科学仪器厂电子天平FA1204B上海精科天美科学仪器有限公司电热恒

9、温鼓风干燥箱101-2上海一恒科学仪器有限公司水浴锅HH-4金坛市盛蓝仪器制造有限公司第3章 实验方法3.1 米诺地尔对照品溶液的制备 精密称取于105干燥至恒重的米诺地尔对照品2mg，取适量甲醇-水（70:30）溶液将其溶解，转移至250ml容量瓶中，加甲醇-水（70:30）溶液定容，摇匀，作为标准贮备液，于4避光保存10。3.2 洗发水供试品溶液的制备洗发水前处理过程：取洗发水适量于烧杯中，加入适量的甲醇-水（70:30）溶液，搅匀，转移至容量瓶中，定容，摇匀，然后利用分液漏斗分离，取上层清液，以4000r/min离心15min，取清液，过0.45m微孔滤膜11-13。 取洗发水2.5ml

10、于烧杯中，加入米诺地尔对照品溶液3ml,转移至25ml容量瓶中，加甲醇-水（70:30）溶液定容，摇匀，经前处理，即得浓度为1.056g/ml的供试品溶液。3.3 专属性试验 3.3.1 鉴别实验 鉴别实验采用显色反应，米诺地尔在冰醋酸和柠檬酸的作用下显红色14。 取米诺地尔对照品溶液2ml置试管中，编号1，加冰醋酸4ml与柠檬酸40mg，置水浴中加热5min。取供试品溶液2ml置试管中，编号2，加冰醋酸4ml与柠檬酸40mg，置水浴中加热5min。取洗发水适量，经前处理后，取2ml置试管中，编号3，加冰醋酸4ml与柠檬酸40mg，置水浴中加热5min。3.3.2 空白干扰取适量洗发水，经前处

11、理，作为空白对照液；取适量甲醇-水（70:30）溶液为空白，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值。3.4 检测限试验采用标准偏差法：取2.5ml洗发水，不加米诺地尔标准品，经前处理，得空白对照液，取适量甲醇-水（70:30）溶液为空白，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值，连续测定3次；再取2.5ml洗发水，加入米诺地尔标准品溶液3ml，用甲醇-水（70:30）溶液定容到25ml，浓度为1.056g/ml，取适量甲醇-水（70:30）溶液为空白，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值，并按下式计算。检测限LOD=f3S空=3S空计算15。3.5 回收率试验 按照制备供试品溶液的

12、方法制备三份供试品溶液，浓度依次为1.76、2.46、3.52g/ml，以空白对照液为空白，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值，对各浓度平行测定3次，并按C样=A样C标/A标计算16。3.6 精密度试验 按照制备供试品溶液的方法制备三份供试品溶液，浓度依次为1.76、2.46、3.52g/ml，编号为第一组、第二组、第三组，以空白对照液为空白，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值，对各浓度平行测定3次。3.7 稳定性试验 按照制备供试品溶液的方法制备三份供试品溶液，浓度依次为1.76、2.46、3.52g/ml，编号为第一组、第二组、第三组，于4放置0、3、6、9、24h，以空白

13、对照液为空白，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值，对各浓度平行测定3次17。 3.8 线性试验准确量取米诺地尔对照品溶液3、4、5、6、7、10、14ml，分别置于25ml容量瓶中，加甲醇-水（70:30）溶液定容，摇匀，得不同浓度溶液，以甲醇-水（70:30）溶液为空白，采用紫外分光光度计，采用紫外分光光度法在231nm处测其吸光值18。 第4章 结果与分析4.1 专属性试验结果4.1.1 鉴别实验结果鉴别实验结果见图4-1。图4-1 鉴别实验结果由图4-1可得，1号试管中是米诺地尔对照品溶液，显红色；2号试管中是供试品溶液，显红色，说明供试品溶液中含米诺地尔，即米诺地尔加入洗发水中

14、后，经前处理，未破坏其结构，可用紫外分光光法在波长231nm处测其吸光值；3号试管是空白对照液，不显色。4.1.2 空白干扰结果平行测定3次空白对照液，吸光值分别为0.046、0.040、0.043，平均值是0.043。由吸光值可知，空白对照液在波长231nm处有吸收，对测定产生干扰。故试验中，不以甲醇-水（70:30）溶液做空白，而采用空白对照液为空白，以消除干扰。4.2 检测限试验结果检测限项下，平行测定3次空白对照液，吸光值分别为0.046、0.040、0.043，平均值是0.043，方差S空为0.003。浓度为1.056g/ml的供试品溶液，其吸光值为0.251。 检测限LOD=f3S

15、空=3S空=30.003=0.038g/ml。由LOD值可知，每毫升供试品溶液中含1.056g米诺地尔时，最低检测限浓度为0.038g/ml，灵敏度较好。4.3 回收率试验结果回收率试验结果见表4-1。编号投入量g测得量g回收率%平均回收率%RSD%14444.406100.9224444.375100.8534444.191100.4346261.61899.3856261.40399.0499.721.5766261.61899.3878889.47999.3588889.15799.09988 89.15799.00表4-1 回收率试验结果（n=9）由表4-1可得，三组供试品溶液的平均回

16、收率为99.72%（RSD=1.57%，n=9），RSD2%，回收率较高。4.4 精密度试验结果精密度试验结果见表4-2。表4-2 精密度试验结果组别编号浓度g/ml吸光度平均值RSD%10.418第一组21.760.4170.4170.1030.41610.578第二组22.460.5760.5770.1230.57810.837第三组23.520.8340.8350.1730.834 由表4-2可得，三组供试品溶液的吸光值RSD分别为0.10%（n=2）、0.12%（n=2）、0.17%（n=2），三组供试品溶液的RSD值均小于2%，其精密度良好。4.5 稳定性试验结果稳定性试验结果见表4

17、-3。表4-3 稳定性试验结果组别编号浓度g/ml吸光值 0h 3h 6h 9h 24h10.4180.4170.4170.4150.410第一组21.760.4170.4170.4150.4160.41530.4160.4130.4200.4160.41610.5780.5760.5780.5740.575第二组22.460.5760.5770.5750.5760.57530.5780.5770.5780.5760.57610.8370.8350.8340.8350.834第三组23.520.8340.8340.8370.8360.83530.8340.8350.8350.8350.835由

18、表4-3可得，三份供试品溶液，浓度依次为1.76、2.46、3.52g/ml，于4放置0、3、6、9、24h，于231nm处测定吸光值，在24小时内吸收度几乎无变化，表明其稳定性较好。4.6 线性关系线性关系见图4-2。图4-2 米诺地尔标准曲线 以米诺地尔的浓度C为横坐标，以吸光值A为纵坐标，进行回归计算，求得的直线回归方程为A=0.2312C+0.0089，R2=0.9996，表明在1-5g/ml范围线性关系良好。第5章 结论与讨论 根据2010版中国药典2部附录XIX A药品质量标准分析方法验证指导原则，在建立药品质量标准时，分析方法需经验证，验证内容有：准确度，精密度、专属性、检测限、

19、定量限、线性、范围和耐用性。经实验，该方法的检测限LOD=0.038g/ml，平均回收率99.72%，精密度RSD小于2%，在24h内吸光值变化不大，吸收度与浓度线性关系A=0.2324C+0.0052，R2=0.9997。由结果可知，本法专属性较强，灵敏度较高，回收率较高，精密度较好，稳定性较好，在1-5g/ml浓度范围内线性关系良好，即紫外分光光度法可用于检测洗发水中是否含有米诺地尔。米诺地尔在甲醇中略溶，在水中微溶，在实验中采用甲醇-水（70:30）溶液配制米诺地尔溶液，增加米诺地尔的溶解性，溶解过程中也采用了超声助溶，超声时间不宜过长。 米诺地尔结构中的氮易被氧化，在光照下易变黄，所以

20、于4避光保存。必要时可以加入抗氧化剂亚硫酸钠及络合剂乙二胺四乙酸二钠。在洗发水前处理过程中，用了多种试剂分离成分，其中运用甲醇和乙腈试剂处理后的回收率较高，考虑到成本问题，甲醇较便宜，所以实验中用甲醇对洗发水进行处理。在采用紫外分光光度法对供试品溶液进行检测时，由于空白对照液对检测有干扰，所以采用空白对照液做为空白。本论文采用紫外分光光度法对洗发水中米诺地尔进行检测，方法较便捷，也较准确，但外界的干扰因素较多，通过查阅文献，国内暂行的化妆品中米诺地尔的检测方法即采用的高效液相色谱法19-20，但也不是很成熟。所以运用紫外分光光度法对洗发水中米诺地尔进行检测比较可靠。参考文献1 中华人民共和国卫

21、生部.化妆品卫生规范S.2007:10.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版2部）M.北京:中国医药 科技出版社,2010:283-284.3 中国临床药学杂志J.中国临床药学杂志,2001,10(1):68-68.4 陈声利,孙建方.米诺地尔治疗脱发的药理与临床研究J.国外医学(皮肤性病 学分册),2004,30(5):276-278.5 代秀菊,涂平,秦俭,等.米诺地尔对培养人头皮毛囊生长的影响J.临床皮肤科 杂志,2002,31(1):6-8.6 罗金文,颜琳琦,李樱红,等.HPLC测定化妆品中非法添加的米诺地尔J.中国 现代应用药学,2013,06,30(6):665-

22、667.7 于春芬,杨素珍,薛红.外用米诺地尔治疗脱发综述J.山东医药工业,2000,19 (3):22-23.8 莫玉芳,叶廷武.紫外分光光度法测定米诺地尔洗剂中米诺地尔的含量J.广 东药学,2004,14(5):18-21.9 陈勇川,罗东,唐先哲,等.紫外分光光度法测定复方长压啶搽剂中两组份的含 量J.华西药学杂志,2000,15(1):62-63.10 邓莉,林彩,胡斌,等.高效液相色谱法测定生发素中米诺地尔含量J.中国药 业，2011,20(3):18-19.11 管继萍,王国团,程立华.高效液相色谱法测定米诺地尔洗剂的含量J.中国医 院药学杂志,2006,26(10):1298-1299.12 郭燕萍,陈珍凤,郑基蒙.复方米诺地尔溶液中米诺地尔的含量测定J.中国药 学杂志,2005,14(1):52-54.13 虞成华,朱伟,陆志芸,等.液相色谱-串联质谱法测定化妆品中米诺地尔的含量J.香料香精化妆品,2011,08,4:36-39.14 吴畏,石莎.米诺地尔生发液的制备及