专题三--体外受精和早期胚胎培养课件.ppt

1、、胚胎工程、体外受精胚胎体外培养胚胎移植胚胎干细胞培养、研究的技术手段、研究对象：高等脊椎动物，特别是哺乳动物，胚胎工程，操作对象为早期胚胎或配子，最后生出了动物个体，满足了人的需要，1978年7月25日世界第一个试管婴儿，试管婴儿，1978年7月26日，世界第一个试验转基因试管牛，中国第一只转基因试管牛“滔滔”于1999年2月19日在上海诞生，1988年3月10日出生于中国第一个试管婴儿，1992年出生于中国第一个三胞胎试管婴儿，1982年出生于世界第一个试管动物技术、试管动物、快速繁殖体外条件、人工操作、早期胚胎、动物优良品种的目的：技术手段：体外受精和早期胚胎培养、国产奶牛：年平均乳产量

2、30 虽然牛的出生率很低，但是牛的卵母细胞相当多，卵巢的卵母细胞数增加了比一生排卵数多1000倍左右的公牛产生的精子数。 一、从试管牛来说，是采集优良品种母牛的卵母细胞、卵母细胞的体外培养、优良品种公牛精子、精子的体外受精、体外受精、优良品种母牛的体外受精胚胎、胚胎移植、受体牛、优良品种小牛、成熟期的牛、屠宰加工场、市场、卵巢的卵母细胞、试管牛的工厂化生产的技术流程图、腹怀试管动物技术过程，第一阶段：体外受精，第二阶段：胚胎早期培养，第三阶段：胚胎移植，主要包括和等几个主要阶段。 概念：采集雌性动物和雄性动物，使其在其中受精。 注：发育的主要场所为母体、卵泡、精子、试管、卵泡的采集、精子的采集

3、、受精、体外受精，(书P69 )，不同动物的卵母细胞的采集方法不同。 实验动物，如小鼠、兔子、家畜猪、羊等卵泡的采集：最常用的方法是处理卵巢，具体的方法是注射给施主，一只母家畜一次排出比自然情况多数倍到十数倍的卵子，然后取出卵子，与直接获得的精子在体外受精。超数排卵、促性腺激素、输卵管、卵母细胞的采集和培养，本P6970，从大家的家畜和大型动物如牛、卵细胞的采集：屠宰场宰杀的母兽中采集卵母细胞。 决定卵泡的位置，也可以直接从生物动物中提取卵泡液(和卵母细胞一起)，在体外人工培养使其成熟。卵巢、超声波(超声波)探测器、内窥镜、腹腔镜、牛卵巢、卵母细胞的采集和培养、超声波诱导法：通过超声波探针和屏

4、幕的诱导，从活的母畜卵巢中提取卵母细胞。 操作人员首先将带有超声波探头和采卵针的采卵器通过阴道插入子宫，同时将卵巢贴在探头上。 根据超声波屏幕显示的卵泡位置，用采卵针穿刺卵泡，同时吸引卵母细胞。卵母细胞的采集和培养、在CO2培养箱内培养、卵母细胞的成熟培养、使雌性动物排出卵子性腺刺激激素的方法，包括：家畜和大型动物用卵子屠宰场、超声波探测器、内窥镜和腹腔镜(活体)采集的卵子能否马上使一次卵母细胞受精，从体外培养到MII中期，采集和培养卵母细胞， 复习、假阴道法、握手法电刺激法、精子收集和获得能、本P7071、获得能处理：培养法：啮齿类、兔子和猪从精巢的精子中提取，放入人工调制的获得能液中培养一

5、段时间。 化学法：牛、羊将精子放入一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，用化学药物诱导获得精子。 精子的收集和获取，必须在体外受精前对精子进行获取处理。通常采用的体外获得方法有和两种。 关于和的精子，一般采用培养法等，家畜的精子经常使用化学法。 培养法：精子在能液中得到能。 化学诱导法：用化学药物诱导精子中一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中的获得能。 培养法，化学诱导法，啮齿动物，兔子，猪，牛，羊，复习，1，概念：哺乳动物精子和卵子在体外人工控制环境下完成受精过程的技术。 2、基本原理：人工模拟体内环境(包括营养、温度、pH等)，使初级卵母细胞成熟，获得精子，最终完成受精作用

6、，有计划地保存胚胎。 体外受精，培养能获得的精子和成熟的卵子，一般在或中完成受精过程。 能溶液，专用受精溶液，体外受精，本P7172，、体外受精过程，检查受精情况和受精卵的发育能力，人工授精是体外受精还是人工受精，是把精液人工注入雌性动物体内，受精过程在体内完成。 体外受精的受精过程是在体外完成的。 概念分析、概念：人工创造条件，对所获得的进行体外培养。 培养液成分：早期胚胎、胚胎的早期培养、水、无机盐、有机盐、维生素、氨基酸、激素、核苷酸、血清等动物胚胎移植时间不同的牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段小鼠、家兔：卵裂期或囊胚阶段试管婴儿： 8个或16个细胞阶段，胚胎培养发育牛体外受精胚胎工厂化生产流程

7、图，本p13、试管动物利用精子、卵子体外受精、胚胎培养、胚胎移植得到的各种动物。 试管婴儿利用通过精子、卵子体外受精、胚胎培养、胚胎移植获得的人体后代。 体外受精技术的应用：动物胚胎的工厂化生产，解决了男性和女性的不育问题。 将世界上第一个试管婴儿布朗、胚胎移植、概念：雌性动物的早期胚胎或其他方法获得的胚胎移植到同种生理状态相同的其他雌性动物体内，使其发育成新的个体的技术。 对经济价值高、遗传性状优秀的母畜进行了激素处理。 使超数排卵受精，将发育的早期胚胎移植到同步发情的代理母亲的子宫内，代理母亲怀孕生产的技术、胚胎的由来：雌性动物的早期胚胎，或体外受精等得到的胚胎。 捐赠者：提供胚胎的个体。

8、 受体：接收胚胎的个体。 受体条件：同种、生理状态相同。转基因、核移植等核移植方法，体核移植、胚胎核移植、回顾、胚胎体外培养技术、动物细胞培养技术、核移植技术、胚胎移植技术、优良供体、超数排卵、发情交配、收集胚胎、受体母牛、正常繁殖或2、3个月后再进行别的移植，有同步发情、发情、胚胎移植、怀孕、价值促性腺激素、优良公牛、牛胚胎移植技术路线图，如何实现？ 注射相关激素，使发情同步：又称同步发情，利用一种激素制剂，人为控制和调整一组母兽发情周期的过程，使发情在预定时间内集中。 优质供体、超数排卵、发情交配、胚胎收集，收集母牛，正常繁殖，或两三个月后另行移植，同期发情、发情、胚胎移植、有价值的子孙、

9、优良公牛、牛胚胎移植技术路线图，具有什么特征的牛作为供体牛？ 遗传性和生产性优良的个体把具有什么特征的牛作为受体牛呢？ 如何收集健康能正常繁殖的个体？ 在配偶或输精后的第七天，使用特殊的冲卵装置，洗掉供体母牛宫内的胚胎。卵从输卵管或子宫角提取早期胚胎，母牛非手术卵的形象，优良的供体，超数排卵，发情交配，收集胚胎，接受母牛，正常繁殖或两三个月后另行移植，同期发情，发情，胚胎移植，妊娠，有价值的子孙，优良的公牛，牛胚胎移植技术的形象，如何具体的步骤是？ 流鸡蛋后，对胚胎进行质量检测。 此时的胚胎必须发育到桑椹胚或胚的阶段。 将收集的胚胎直接移植到受体中，或放入-196液氮保存，液氮罐，6日收集的胚

10、胎(不筛选)，方法1 :手术方法的具体方法：引出受体子宫和卵巢，将胚胎注入子宫角，缝合伤口。 方法2 :非手术法将装有胚胎的移植管送到受体母牛子宫的相应部位，注入胚胎。 对受体母牛进行妊娠检查，受体母牛产下胚胎移植的小牛，是供体的子孙还是受体的子孙？ 受体移植胚，胚胎移植的生理学基础，1 )施主和受体是如何保证相同的生理环境的？ 供给、受体的生理状态必须相同。 为此，a、供给、受体母兽的发情时间必须一致。 哺乳动物发情排卵后，无论有无怀孕，在一段时间内，同种动物的供给、受体生殖器官的生理变化都是相同的。 b、受体进入子宫胚胎的位置，必须与体内的位置相同或相似。 对应植入胚胎侧的受体子宫的卵巢必

11、须存在黄体。 在胚胎移植过程中，受体母兽必须处于与施主母兽同步发情的状态。 为什么？两者之间的怀孕期间是因为体内荷尔蒙水平相同或接近。 胚胎不能正常着床。 是胚胎移植能否成功的关键。胚胎移植实质上是早期胚胎在同一生理环境下的空间位置转移。 你觉得这样的摘要正确吗？ 正确。胚胎移植的生理学基础，1 )供体和受体处于同一生理环境2 )早期胚胎处于游离状态，为胚胎的收集提供了可能的地方？输卵管和子宫角，胚胎移植的生理学基础，1 )供体和受体处于同一生理环境2 )早期胚胎处于游离状态，为胚胎的收集提供了可能的3 ) 受体对移植到子宫的胚胎几乎不发生免疫排斥4 )胚胎与受体建立了正常关系，但遗传物质没有

12、变化。 为什么？发生了什么？ 在同一种动物之间进行胚胎移植很容易成功。 4、胚胎移植的基本步骤阅读教科书，考虑胚胎移植的基本步骤是哪一步？(1)供体、受体的选择和处理(2)交配或人工受精(3)胚胎的收集、检查、培养或保存(4)胚胎移植(5)移植后的检查，(1)供体、受体的选择(2)取卵母细胞的方法：过度排卵的具体方法：注射促性腺激素；(3)配种或人工受精、精子来源：同种优秀的雄动物。 (4)胚胎的收集是在交配或输精后的第7天，用特殊的冲卵装置冲洗供体母牛宫内的胚胎。 (5)胚胎质量检测，(6)胚胎保存或移植，(7)胚胎移植，方法1 :手术方法的具体方法：引出受体子宫和卵巢，将胚胎注入子宫角，缝

13、合伤口。 方法：非手术法将装有胚胎的移植管送到受体母牛子宫的相应部位，注入胚胎。(8)对受体母牛进行有无妊娠的检查，(9)受体母牛产下了胚胎移植的小牛，选择、供体母牛、受体母牛、处理、超数排卵、供体公牛、交配、卵、质量检查、育成、胚胎移植、妊娠检查、生育(胚胎移植的小牛)、胚胎移植的基本程序、复习、同步发情移植与相应部位同种、复习、试管动物和胚胎移植的不同之处：比较、体外受精、体内自然受精、从施主中获得卵子和精子，获得受精卵和胚胎，胚胎移植的现状和意义；1 )加速育种工作和品种改良；2 )大幅度节约购买家畜的费用；3)1胎高产4 ) 保存品种资源和濒危物种5 )可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜

14、力，缩短繁殖周期，增加一生繁殖的后代数量。 受体母羊和产下的羔羊，一次三枚胚全部生存，胚胎移植的效果、胚胎移植的现状和意义、胚胎移植实现了优良性状的个体繁殖，如果能确信胚胎发育成非常理想的个体，就不能一次繁殖很多这样的胚胎吗？ 阅读思考、胚胎分割教科书，考虑以下问题： (1)胚胎分割的概念(2)胚胎分割的特征(3)胚胎分割的理论基础(4)胚胎分割操作过程，1 .概念：使用机械方法(显微手术)将早期胚胎分割为2分胚、4分胚或8分胚，在体内或体外培养后移植受体为什么要移植呢？ 2、特征：后代具有相同的遗传物质，因此胚胎的分割可以视为动物无性繁殖和克隆的方法之一。 3、理论基础动物胚胎细胞的全能性。

15、 胚被分割的时期是胚或桑椹胚。 为什么选择了这样的胚胎发育时期？ 4、选择的胚胎：发育良好、形态正常的桑椹胚或胚。 5、使用的主要机器：立体显微镜和显微镜。 6、具体操作是用分割针或分割刃切开胚，取出其中的一半胚，注入预先准备的空的透明胶带中，或者直接将裸的半胚移植到受体中。 发育良好的胚胎，000000双胞胎双胞胎双胞胎653原因：内细胞团一般出现在胚胎阶段，它是胚胎自身的基础细胞，其他细胞是营养细胞，为胚胎和胎儿的发育提供营养。 分割时如果不能均等地分割内细胞块，那么内细胞块多的部分正常发育的能力就很强，少的部分会有发育被阻碍、发育不良、不能发育等问题。 7、操作注意事项：胚胎分割份数越多

16、，操作难易度越高，移植成功率也越低。 早期胚胎的体积很小，只能用显微镜看到，而且细胞数有限。 分割份数越多，不仅难以均等地分割，而且每份的细胞数也变少，作为胚期的胚胎内细胞受到的影响也变大。 因此，分割份数越多，技术难易度就越高，移植后的恢复和发育难易度就越高，移植成功率自然下降。 牛胚胎分割的主要用途有：8、胚胎分割技术的缺陷(1)刚出生的动物体重低，毛色和斑点还不同(2)使用胚胎分割技术发生同卵多胎的可能性有限。 如果胚胎不能无限分割，有没有办法实现优良个体的多胎繁殖？ 阅读思考、胚胎干细胞、教科书，思考以下问题： (1)胚胎干细胞是什么？ 简称是什么？(2)胚胎干细胞的由来。 (3)胚胎

17、干细胞的特性。 (4)胚胎干细胞的应用。 1、概念：简称ES或EK细胞，是从早期胚胎或原始性腺中分离的细胞。全能细胞、胚、胎儿、内细胞团细胞、生殖腺细胞、受精、胚胎干细胞的分离培养、内细胞团、胰蛋白酶的分离处理、移植培养、饲养层细胞的培养、细胞分化、饲养层的细胞一般是胚胎成纤维细胞，胚胎成纤维细胞能分泌抑制细胞分化的物质，因此在促进干细胞生长的同时抑制干细胞分化EK细胞，ES细胞，2 .特征：(1)形态：体积小，核大，核清晰；(2)功能：具有发育全能性，可以分化成成年动物体内任何组织细胞；(3)在体外培养条件下，ES细胞可以不分化而增殖。 可以冷冻保存它，也可以进行遗传改造。 (1)治疗人的某种顽固的病。 ES细胞能诱导分化形成新的组织细胞特