土壤中分解尿素的细菌的分离和计数第二课时市公开课一等奖省赛课微课金奖课件

复习：1.怎样分离土壤中分解尿素细菌？

2.怎样对土壤中分解尿素细菌数目进行计数？1/20土壤中分解尿素的细菌的分离和计数（第二课时）课题2微生物培养与应用2/20自主学习，发觉问题阅读书本P23-P26，依据导学案提醒，完成以下问题。1.试验设计包含哪些内容？2.试验设计流程是什么？3.每一步是怎样操作？注意事项是什么？4.怎样进行结果分析与评价？3/20小组讨论，启发思维小组互对答案，对有疑问问题相互讨论，并确定讲话人，按导学案上要求完成本组问题展示。4/20试验设计包含对—————、————、———、——和————，——————以及———等综合考虑和安排。试验方案所需仪器材料用具药品详细实施步骤时间安排学生展示，老师点拨，突破难点5/20一、试验设计流程土壤取样制备培养基样品稀释取样涂布微生物培养与观察细菌计数6/20◆注意事项：取土样用小铁铲和盛土样信封在使用前都要灭菌。二.试验详细操作及注意实项㈠土壤取样从肥沃、湿润、酸碱度靠近中性土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再在距离地表3cm-8cm处取样，将样品装入事先准备好信封中。㈡制备培养基制备以尿素为唯一氮源选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。◆注意事项：倒平板时要冷却到50℃

，且要在酒精灯火焰旁进行。7/20◆注意事项：（三）样品稀释①应在火焰旁称取土壤10g。②在稀释土壤溶液过程中，每一步都要在火焰旁进行③分离不一样微生物采取不一样稀释度8/20测定土壤中细菌数量，普通选取104

，105

，106

测定放线菌数量，普通选取103

，104

，105

测定真菌数量，普通选取102

，103

，104

为何分离不一样微生物要采取不一样稀释度？原因：不一样微生物在土壤中含量不一样.比如在干旱土壤中上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。9/20㈣取样涂布◆注意事项：试验时要对培养皿作好标识。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。◆注意事项：①涂布器和移液管要保持无菌。②假如得到了2个或2个以上菌落数目在30——300平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落计数，假如同一稀释倍数三个重复菌落数相差较大，表明试验不准确，需要重新试验。10/20㈤微生物培养与观察培养：不一样微生物往往需要不一样培养温度。细菌：30～37℃培养1～2d放线菌：25～28℃培养5～7d霉菌：25～28℃温度下培养3～4d。观察：在相同培养条件下，同种微生物表现出稳定菌落特征。包含：形状、大小、隆起程度和颜色。11/20微生物培养与观察12/20（六）细菌计数在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时统计作为结果，以预防因培养时间不足而造成遗漏菌落数目。13/20三、操作提醒

无菌操作

做好标识

规划时间

14/20四.结果分析与评价内容现象结论有没有杂菌污染判断对照培养皿中无菌落生长培养物中菌落数偏高菌落形态多样，菌落数偏高选择培养基筛选作用选择培养基含有筛选作用样品稀释操作操作成功重复组结果若选取同一个土样，统计结果应培养基未被杂菌污染被杂菌污染被杂菌污染或混入其它氮源牛肉膏培养基上菌落数目大于选择培养基上数目得到三个或三个以上菌落数目在30～300平板靠近15/20五.课外延伸在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，假如PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。16/203.在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂目标是()A.筛选出能分解尿素细菌B.对分离菌种作深入判定C.作细菌营养成份D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素当堂检测1.能够测定样品活菌数方法是()A.稀释涂布平板法B.直接计数法C.重量法D.比浊法2.以下操作步骤次序正确是()①土壤取样②称取10g土样，加入盛有90mL无菌水锥形瓶中③吸收0.1mL土壤溶液进行平板涂布④依次稀释至101、102、103

、104

、105

、106

、107稀释度A.①→②→③→④B.①→③→②→④C.①→②→④→③D.①→④→②→③ACB17/204.(·四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌过程,请据图回答以下问题：(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源,判别培养基还需添加_______作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围指示剂将变成______色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出细菌菌落数分别为163、156、262、178和191。该过程采取接种方法是____________________，每克土壤样品中细菌数量为____×108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得细菌数目较_____。尿素酚红红稀释涂布平板法

1.9少18/205.(·浙江自选模块，17节选)某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，对该酶菌株进行筛选，其流程以下列图所表示。请回答以下问题：(1)土壤悬液首先经80℃处理15分钟，其目标是筛选出________________。(2)在无菌条件下，将经过处理土壤悬液进行_______，然后涂布于含有植酸钠固体培养基上。培养后观察到___________(3)筛选取得菌株经判定后，将优良菌株进行液体扩大