生物实验报告

生物实验报告生物实验报告「篇一」一、实验目的1.初步学会探索酶催化特定化学反应的方法。2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。二、实验原理淀粉和蔗糖都是非还原糖，它们在酶的催化作用下都能水解成还原糖，还原糖能够与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。用淀粉酶分别催化淀粉溶液和蔗糖溶液，再用斐林试剂鉴定溶液中有无还原糖，就可以看出淀粉酶是否能催化这两种化学反应。三、材料用具滴管、试管、火柴、试管架、温度计、三脚架、石棉网、酒精灯、烧杯、质量分数为2%的新鲜淀粉酶溶液、质量分数为3%的可溶性淀粉溶液、质量分数为3%的蔗糖溶液、斐林试剂四、实验过程（见书Ｐ47）五、讨论1．制备的可溶性淀粉溶液,必须完全冷却后才能使用。为什么？２．两支试管保温时,为什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?3．如果2号试管也产生了砖红色沉淀,可能是由哪些原因造成的？生物实验报告「篇二」初一生物实验报告范文五篇篇一探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的水解作用一、实验目的1.初步学会探索酶催化特定化学反应的方法。2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。二、实验原理淀粉和蔗糖都是非还原糖，它们在酶的催化作用下都能水解成还原糖，还原糖能够与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。用淀粉酶分别催化淀粉溶液和蔗糖溶液，再用斐林试剂鉴定溶液中有无还原糖，就可以看出淀粉酶是否能催化这两种化学反应。三、材料用具滴管、试管、火柴、试管架、温度计、三脚架、石棉网、酒精灯、烧杯、质量分数为2%的新鲜淀粉酶溶液、质量分数为3%的可溶性淀粉溶液、质量分数为3%的蔗糖溶液、斐林试剂四、实验过程（见书Ｐ47）物理实验报告・化学实验报告・生物实验报告・实验报告格式・实验报告模板五、讨论1．制备的可溶性淀粉溶液,必须完全冷却后才能使用。为什么？２．两支试管保温时,为什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?3．如果2号试管也产生了砖红色沉淀,可能是由哪些原因造成的？篇二：练习使用显微镜目的要求1、练习使用显微镜，学会规范的操作方法。2、能够独立操作显微镜。3、能够将标本移动到视野中央，并看到清晰的图象。材料用具：显微镜、e字玻片（写有上字的玻片）、动植物永久玻片、擦镜纸、纱布方法和步骤一、取镜和安放1．右手握住镜臂，左手托住镜座。2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右

处）。安装好目镜和物镜。二、对光3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘

米的距离)。4．把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于以后

同时画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以

看到白亮的视野。三、观察5．把所要观察的玻片标本（也可以用印有“e”字的薄纸片制成）放在

载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。6．转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼

睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。7．左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直

到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。注意事项1、注意安全，不要损伤显微镜、目镜和物镜。2、材料对准通光孔，用压片夹将玻片压好。3、下降镜筒时，不要注视目镜，一定要注视物镜，以免损坏玻片标本和物镜镜。头。4、取下玻片标本时要小心;5、实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。篇三观察人体的基本组织目的要求：1．观察人体基本组织的永久切片，认识人体的四种基本组织；2．描述同一种组织中细胞的共同特点；3．描述不同组织中细胞形态上的不同之处；4．根据观察，概述组织的共同特点，形成组织的概念。材料器具：显微镜；扁平上皮、立方上皮、柱状上皮等上皮组织玻片；横纹肌、骨骼肌、心肌等肌肉组织玻片；骨、软骨、血液、韧带、肌腱、脂肪等结缔组织玻片；神经组织的玻片。方法步骤：1．根据教师提供的玻片，逐个在显微镜低倍镜下认真观察，注意细胞的形态特征和细胞间的联系特点。【思考】1．上皮组织一般都分布在人体的什么位置?想一想，上皮组织有什么主要的功能?2．神经组织的主要功能是“接受刺激，产生和传导兴奋”，构成神经组织的细胞结构上有什么特点与这种功能相适应?

3．请试着用自己的语言，给组织下定义。篇四用显微镜观察人血的永久涂片实验方案一、取镜和安放一手握镜臂，一手托镜座,将显微镜从镜箱中取出并放在实验台上，略偏左。二、对光1、转动转换器，使低倍物镜正对通光孔。2、转动遮光器，选择较大的光圈对准通光孔。3、一眼注视目镜内，一眼睁开，同时把反光镜转向光源，通过目镜看到白亮视野后并报告教师。三、观察1、把涂片放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。2、从侧面注视物镜，转动粗准焦螺旋，使镜筒缓慢下降接近涂片。3、一眼注视目镜内，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直至看到物像，再略微转动细准焦螺旋，直至物像清晰，报告老师。4、正确填写实验报告。四、整理1、取下涂片并复位。2、用纱布擦拭显微镜外表。3、转动转换器，让两物镜偏到两旁，并将镜筒降至最低位置。4、将显微镜放回镜箱。篇五观察小鱼尾鳍内血液的流动一、目的要求：1.观察血液在血管内的流动。2.尝试分辨血管的种类以及血液在不同血管内的流动情况。二、材料用具：尾鳍色素少的小鱼、显微镜、培养皿、滴管、棉絮。三、实验步骤：1、检查实验材料用具2仔细检查实验材料用具是否齐全3、取放、组装、调试显微镜4、取放显微镜的步骤、方式是否正确；组装、调试显微镜的方法是否科学。四、实验操作与观察1、用浸湿的棉絮将小鱼头部的鳃盖和躯干部包裹起来，露出口和尾部。2、将小鱼平放在培养皿中，使尾鳍平贴在培养皿上，并在尾鳍上放载玻片。3、将培养皿放在载物台上，用低倍显微镜观察尾鳍血管内血液的流动情况。4、找到管径最小的血管，注意观察血液在这种血管中的流动情况。5、注意观察管径最小的血管是由什么血管分支而来的，它最终又汇入什么血管中。五、清洁、整理实验用具1将显微镜复原，放回显微镜箱。2将培养皿、滴管等冲洗干净并清洁实验桌面。六、注意事项1、是否用浸湿的棉絮将小鱼头部的鳃盖和躯干部包裹起来。2、是否露出小鱼的口和尾部。3、小鱼的尾鳍是否平贴在培养皿上。4、是否在小鱼的尾鳍上放载玻片。5、是否用低倍显微镜观察尾鳍血管内血液的流动情况。6、是否找到管径最小的血管。7、实验后是否将小鱼放回鱼缸生物实验报告「篇三」实验一练习使用显微镜目的要求1、练习使用显微镜，学会规范的操作方法。2、能够独立操作显微镜。3、能够将标本移动到视野中央，并看到清晰的图象。材料用具：显微镜、e字玻片（写有上字的玻片）、动植物永久玻片、擦镜纸、纱布方法和步骤一、取镜和安放1．右手握住镜臂，左手托住镜座。2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处）。安装好目镜和物镜。二、对光3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离)。4．把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于以后同时画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以看到白亮的视野。三、观察5．把所要观察的玻片标本（也可以用印有“e”字的薄纸片制成）放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。6．转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。7．左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。注意事项1、注意安全，不要损伤显微镜、目镜和物镜。2、材料对准通光孔，用压片夹将玻片压好。3、下降镜筒时，不要注视目镜，一定要注视物镜，以免损坏玻片标本和物镜镜头。4、取下玻片标本时要小心;5、实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。实验二观察人体的基本组织目的要求：1．观察人体基本组织的永久切片，认识人体的四种基本组织；2．描述同一种组织中细胞的共同特点；3．描述不同组织中细胞形态上的不同之处；4．根据观察，概述组织的共同特点，形成组织的概念。材料器具：显微镜；扁平上皮、立方上皮、柱状上皮等上皮组织玻片；横纹肌、骨骼肌、心肌等肌肉组织玻片；骨、软骨、血液、韧带、肌腱、脂肪等结缔组织玻片；神经组织的玻片。方法步骤：1．根据教师提供的玻片，逐个在显微镜低倍镜下认真观察，注意细胞的形态特征和细胞间的联系特点。【思考】1．上皮组织一般都分布在人体的什么位置?想一想，上皮组织有什么主要的功能?2．神经组织的主要功能是“接受刺激，产生和传导兴奋”，构成神经组织的细胞结构上有什么特点与这种功能相适应?3．请试着用自己的语言，给组织下定义。实验三用显微镜观察人血的永久涂片实验方案一、取镜和安放一手握镜臂，一手托镜座,将显微镜从镜箱中取出并放在实验台上，略偏左。二、对光1、转动转换器，使低倍物镜正对通光孔。2、转动遮光器，选择较大的光圈对准通光孔。3、一眼注视目镜内，一眼睁开，同时把反光镜转向光源，通过目镜看到白亮视野后并报告教师。三、观察1、把涂片放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。2、从侧面注视物镜，转动粗准焦螺旋，使镜筒缓慢下降接近涂片。3、一眼注视目镜内，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直至看到物像，再略微转动细准焦螺旋，直至物像清晰，报告老师。4、正确填写实验报告。四、整理1、取下涂片并复位。2、用纱布擦拭显微镜外表。3、转动转换器，让两物镜偏到两旁，并将镜筒降至最低位置。4、将显微镜放回镜箱。实验四观察小鱼尾鳍内血液的流动一、目的要求：1.观察血液在血管内的流动。2.尝试分辨血管的种类以及血液在不同血管内的流动情况。二、材料用具：尾鳍色素少的小鱼、显微镜、培养皿、滴管、棉絮。三、实验步骤：1、检查实验材料用具2、仔细检查实验材料用具是否齐全3、取放、组装、调试显微镜4、取放显微镜的步骤、方式是否正确；组装、调试显微镜的方法是否科学。四、实验操作与观察1、用浸湿的棉絮将小鱼头部的鳃盖和躯干部包裹起来，露出口和尾部。2、将小鱼平放在培养皿中，使尾鳍平贴在培养皿上，并在尾鳍上放载玻片。3、将培养皿放在载物台上，用低倍显微镜观察尾鳍血管内血液的流动情况。4、找到管径最小的血管，注意观察血液在这种血管中的流动情况。5、注意观察管径最小的血管是由什么血管分支而来的，它最终又汇入什么血管中。五、清洁、整理实验用具1将显微镜复原，放回显微镜箱。2将培养皿、滴管等冲洗干净并清洁实验桌面。六、注意事项1、是否用浸湿的棉絮将小鱼头部的鳃盖和躯干部包裹起来。2、是否露出小鱼的口和尾部。3、小鱼的尾鳍是否平贴在培养皿上。4、是否在小鱼的尾鳍上放载玻片。5、是否用低倍显微镜观察尾鳍血管内血液的流动情况。6、是否找到管径最小的血管。7、实验后是否将小鱼放回鱼缸实验五鱼鳍在游泳中的作用引课：提起鱼，大家都不陌生，鱼在水中能自由自在的游动，既能向前游动，又能上浮，下潜，还能转弯以及停留在一定的水层。那么，鱼在游泳中各种鳍起什么作用呢？今天，我们就来探究一下鱼鳍在游泳中的作用。方法一：模型模拟法（当不能用直接实验法做实验时，可以用模拟实验代替实验法，即用模型代替实验对象进行实验，模拟实验的缺点是：其研究结果易受模型的局限，得出的结论不一定完全可靠。一般来说模型与实验对象的相似程度越高，实验的效果越好。）方法二：剪除鱼鳍法（太残忍）方法三：捆扎鱼鳍法注意事项：（对实验材料用具的选择是实验成败的关键，如对鱼体大小的选择，捆绑鱼体的夹板和线绳的选择等。经实践证明鱼体大小以6～10cm长为宜，捆绑鱼鳍用纱布较佳，捆绑鳍用轻且不易滑脱的材质为宜，如用轻的木片、塑料片等。要鼓励学生自行完成探究实验，培养学生动手能力。在实验探究鳍对鱼运动的作用时，应引导学生想办法只对单一因素进行观察，而限制其他因素的干扰，即分别探讨某一种鳍对鱼的作用，并作好实验记录。）下面我们就来开始我们的探究过程：一、提出问题：鱼在游泳时，胸鳍、背鳍、尾鳍分别起什么作用二、作出假设：鱼在游泳时，胸鳍、背鳍起平衡鱼体的作用，其中胸鳍有转换方向的作用，背鳍能防止鱼体侧翻；尾鳍产生前进的动力，决定运动的方向。三、制定计划：实验材料及用具：四个玻璃缸、四条大小相同的鲫鱼、轻的木片或塑料片、细绳子、纱布。实验步骤：1、在四只大玻璃缸上分别标上A、B、C、D，然后注水，水的高度为缸高的三分之二左右。2、对三条鲫鱼做如下处理：用木片和绳子缚住第一条鲫鱼的胸鳍后放入A缸用木片和绳子缚住第二条鲫鱼的背鳍后放入B缸用木片和绳子缚住第三条鲫鱼的尾鳍后放入C缸第四条鲫鱼做对照，不做任何处理直接放入D缸3、观察四条鲫鱼的运动情况四、实施计划现象：A缸中的鲫鱼能够向前运动，但左右摇摆不定，不能转向，不能掌握平衡。B缸中的鲫鱼能够向前运动，但鱼体侧翻，不能维持鱼体的直立状态。C缸中的鲫鱼能保持鱼体平衡，但基本上没有前进。D缸中的鲫鱼既能平衡身体，又能自由自在向前游动。五、分析结果，得出结论鱼游泳时，主要靠身体躯干部和尾鳍的左右摆动击动水流产生前进的动力，其他鱼鳍起辅助作用。鱼在运动时，胸鳍、腹鳍和背鳍都有维持鱼体的平衡的作用，尾鳍可以产生前进的动力，同时还有决定鱼运动方向的作用。六、表达与交流臀鳍：协调其它各鳍，起平衡作用，若失去，身体轻微摇晃。腹鳍起到稳定流经身体的水流的作用，也有平衡和稳定的作用。生物实验报告「篇四」关于生物技术综合实验报告篇一：四川大学-生物技术-综合实验报告-学生版生物技术综合实验甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学生：学号：同实验者：<研究背景>谷胱甘肽(glutathione,GSH)GSH具有多种重要生理功能,抗自由基和抗氧化应激作用,保护细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶,可以调控GSH的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫过程中起着重要作用,说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。实验一甘薯叶片RNA提取一、实验目的1.了解真核生物RNA提取的原理；2.掌握Trizol提取的方法和步骤。二、实验原理Trizol试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方法得到的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。三、实验材料1.材料甘薯（IpomoeabatatasLam）叶片，品种为徐薯182.试剂①无RNA酶灭菌水：加入0.01%的DEPC，处理过夜后高压灭菌；②Trizol试剂；③氯仿；④异丙醇、75％乙醇；⑤TBE缓冲液；⑥上样缓冲液（6×）3.仪器高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、1.5mL塑料离心管、枪头和EP管架四、实验方法1.将叶片取出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1mLTrizol试剂，室温放置5min，使样品充分裂解；2.每1mLTrizol试剂加入200μL氯仿，用手剧烈振荡混匀后室温放置3-5min使其自然分相；3.4℃12,000rpm离心15min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置15min；4.4℃12,000rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底；5.RNA沉淀中加入1mL75%的乙醇（用RNase-free水配制），温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃8,000rpm离心2min，弃上清；6.室温放置10min晾干沉淀；7.沉淀中加入20μLRNase-freeddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存；8.用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。五、实验结果1.RNA提取结果依照Trizol试剂盒方法，提出的RNA较少，此部分未以图或数据显示。2.RNA后电泳结果如图1.其中9a为本组实验结果。由图可知RNA条带非常模糊，拖尾现象严重，几乎无法分清具体条带，亮度较大。点样孔附近的红色部分为杂质，在提取过程中并未很好除去。图1.RNA提取跑胶结果。其中1泳道为样品Marker，9a泳道为本小组RNA样品。与标准对照可见条带模糊，拖尾现象严重。六、分析与讨论1.RNA的提取产量并不多，可能是因裂解样品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。在实验过程中，由于对操作时间的掌握不熟练、操作技巧不完善，留上清与弃上清时令RNA损失了部分，使最终RNA产量不理想。2.RNA电泳结果有EB存在时，电泳后28SrRNA和18SrRNA在紫外灯下应看得很清楚，另出现条由tRNA，5.8SrRNA和5SrRNA组成的较模糊、迁移较快的带。如果RNA没有降解，则28SrRNA的亮度应为18SrRNA的2倍，且这两条带都无弥散现象发生。由图1.9a可知，RNA拖尾现象严重，说明RNA已大部分被降解；此外点样孔附近出现红色部分杂质，分析可能有并未除尽的蛋白质，同样影响RNA电泳结果。在进行实验时，本小组成员未严格戴上口罩并勤换手套，这可能使外源RNAase进入样品，导致其降解严重。另外，提取出RNA后本小组未立即将样品放入-70℃保存，也为导致结果不理想的重要原因之一。在最初用氯仿萃取分层的过程中，由于水相吸取过多，掺杂入部分蛋白质杂质而未于后续纯化步骤除尽，RNA条带拖尾严重可能还受该蛋白质影响。七、总结：本次试验RNA提取非常失败，从跑胶结果可见其降解严重。虽然大实验无法避免试剂交叉污染的可能性，且电泳用胶的质量也会影响实验结果，但从图1.2a，3a，2b等条带较为清晰的小组实验结果可知，琼脂糖凝胶质量以及试剂对结果干扰不大。那么本小组成员在提取过程中的操作一定出现了很大失误。首先口罩、手套应该严格按规定佩戴，提取过程对移液枪等仪器使用需谨慎仔细，尽量避免混入杂质。其次为排除部分杂质影响可对RNA样品用紫外线分光光度计测定吸光值检验，将有助于结果分析。最后，细节决定成败，我们应汲取教训避免接下来的实验出现类似问题。实验二第1链cDNA的合成和模板的验证一、实验目的1.掌握第1链cDNA的合成方法和步骤二、实验原理真核生物基因多为断裂基因，编码区不连续，需经转录后加工才能成为成熟mRNA。以真核成熟mRNA为模板合成cDNA，进而获得有连续氨基酸编码的DNA序列，无需转录后加工，即可在原核细胞中表达。真核生物的mRNA都有PolyA尾巴。引物：OligodT（12-18个T）。莫洛尼氏鼠白血病毒逆转录酶（M-MLV）以单链RNA为模板，在引物的引发下合成与模板互补的DNA链（cDNA）。mRNA反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR，RT-PCR比Northern杂交更灵敏，对RNA的质量要求较低，操作简便，它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。三、实验材料1.材料徐薯18叶片RNA样品2.试剂①dNTPmixture（10mMeach）；②Oligo(dT)Primer(10μM)；③TotalRNA；④RNasefreeddH2O；⑤M-MLV反转录酶；⑥5×First-strandBuffer；⑦0.1MDTT；⑧RibonucleaseInhibitor(40U/μL)3.仪器10μL和100μL的移液枪、0.5mL的EP管、PCR仪等四、实验方法1.在RNasefreeMicrotube管中配制下列混合液：dNTPmixture（10mMeach）1μL*Oligo(dT)Primer(10μM)4μLTotalRNA2μL篇二：生物技术综合实验报告(原生质体相关)生物技术综合实验报告（第一部分）实验一工作液的配制、培养基配制、器皿洗涤及灭菌一、实验目的掌握各种工作液配制方法；了解植物培养基的构成及配制方法；掌握高温高压灭菌的方法。二、原理培养基是植物组织培养的基本条件，同时也是关键因素。湿热条件(121℃的蒸汽，10分钟)能够有效地杀灭附着在玻璃器皿、器具以及溶液和培养基中的微生物达到灭菌的目的。三、器具和试剂灭菌锅，天平，电炉，微波炉，三角瓶，封口膜，移液管，移液器，量筒，烧杯，pH试纸，培养皿，滤纸，Parafilm封口膜。琼脂，MS培养基大量元素，无菌水，葡萄糖，2,4-D，IBA，KT（激动素），1MNaOH及HCl，卡那霉素，头孢霉素，乙酰丁香酮。四、实验内容PH调节剂的配制、培养基母液的配制、培养基的配制、各种相关物品的准备（一）培养基的配制步骤1、取个干净烧杯，加入1/3-2/3左右的蒸馏水，用移液管取所需的母液加入烧杯。2、称取定量的蔗糖加入烧杯中并不断搅拌，直到完全溶解，定容。3、用NaOH或者稀HCL调剂酸碱值。4、称取定量琼脂糖加入烧杯中，加热煮沸搅拌，待琼脂完全溶解，分装。5、高压灭菌（121℃,15min-20min)。6、冷却，取出，备用。（二）棉花无菌苗培养基的制备1、取25mlMS大量元素母液，称取葡萄糖15g、于1升的烧杯中，定容后调pH值为6.0，加入7.5g/l琼脂煮沸。2、然后将其分装到100毫升的三角瓶中，每瓶40毫升。3、用封口膜封口后在灭菌锅中灭菌15分钟。4、灭菌后Z于水平的工作台上冷却即可。要求：配制1L（三）拟南芥无菌苗培养基的制备1、拟南芥无菌苗培养基：1/2MS大量元素+蔗糖10g/L，PH值6.0；加入7.5g琼脂高温高压灭菌。2、0.1%琼脂糖：0.1g琼脂糖/100ml蒸馏水；无菌苗培养基和0.1%琼脂糖均121°高压灭菌15分钟。3、另准备20套9cm培养皿，灭菌。要求：配制0.5L，装1瓶灭菌，灭菌后培养基倒皿。五、注意事项1、为了尽量减少人为的误差，必须严格按实验步骤进行操作，严格按照要求的量来配制工作液、母液及培养基。2、应当把培养基中的各种成分都写在纸上，加进去一个以后即划掉一个。3、所有装着培养基的试管、玻璃罐、玻璃瓶和培养皿等都应当清楚地做上标记。4、每小组的操作的具体事项请参照黑板上贴的任务分组。5、爱护实验仪器及耗材，小心使用玻璃器皿，合理灭菌，因为灭菌耗时较长。实验二无菌苗的制备一、原理化学灭菌：0.1%升汞(Hgcl2)溶液浸泡10分钟可以对棉花种子等外植体进行灭菌，84消毒液（2%的次氯酸钠）浸泡3分钟可以对拟南芥等小种子外植体进行消毒。物理消毒：紫外灯消毒、酒精灯火焰或高温烧灼5min左右可有效杀死镊子、剪刀等不锈钢操作器具的菌类达到消毒的目的。二、实验材料、器具和试剂棉花品种YZ1;拟南芥col-0野生型灭菌锅，天平，电炉，三角瓶，封口膜，镊子，酒精灯，剪刀，移液管，超净工作台。0.1%升汞溶液，84消毒液，75%酒精三、实验内容（一）拟南芥无菌苗培养基倒皿1.取上次灭菌好的拟南芥培养基（500ml装），稍微拧松瓶盖，微波炉煮沸，边煮边摇动，至全部融化。2.将上次灭菌好的9cm培养皿分开放Z超净工作台（超净工作台需先打开）上。3.将融化好的培养基分装于培养皿中（500ml/18-20皿），将皿至于超净台上吹干。（二）共培养培养基的配制成分数量成分数量MS大量元素(20倍）50ml2,4-D(0.1mg/ml)1mlNH4NO3(20倍)50ml甘氨酸(1000倍)1ml微量元素(100倍)10mlKT(0.1mg/ml)1ml铁盐(100倍)10ml葡萄糖30g/L微生素(1000倍)1mlPH值5.85-5.90肌醇(100倍)1ml依次加入上述物质，调PH值5.85-5.90，然后分装至2个500ml蓝盖瓶，每瓶加入4g琼脂，灭菌，灭菌后倒皿。（三）选择培养基的配制共培养培养基+卡那霉素50mg/L+头孢霉素400mg/L灭菌后，待培养基凉至60度左右加入，混匀，倒皿。（四）棉花无菌苗的制备1、将棉籽用手术剪刀去壳（每人3颗，饱满无病虫害种子）。2、用0.1%的升汞灭菌13分钟。3、无菌水冲洗三遍，接种于无菌苗培养基中。4、28℃条件下暗培养7天（304培养箱）。（五）拟南芥无菌苗的制备大量法灭菌：将拟南芥种子放入1.5ml离心管中，加入84消毒液：无菌水=1:1的混合液1ml，上下摇晃灭菌2min，弃消毒液；加入1ml75%的酒精混匀1min，然后无菌水清洗4次；加入0.1%琼脂糖溶液悬浮种子，用移液枪涂布于拟南芥无菌苗培养基。吹干，封口。弱光培养两天至种子萌发，转至光照培养室培养两周（304培养箱）。五、注意事项所有操作（除数种子）均在超净工作台上进行。六、实验结果一周后观察无菌苗的生长状况1、六瓶接种的棉花无菌苗中有一瓶被轻度污染，其余五瓶生长状况良好。2、拟南芥的无菌苗因涂布不均匀长势一般，幼苗较其他小组要弱小，叶片颜色较深。实验三愈伤组织的诱导及农杆菌介导的棉花遗传转化一、实验目的掌握植物体细胞胚胎发生的基本理论；了解植物愈伤组织在诱导和分化过程中的形态学、细胞学特征；进一步巩固植物离体培养和无菌操作的步骤；掌握植物遗传转化的方法、理论；掌握根癌农杆菌介导的植物遗传转化技术。二、实验原理植物细胞全能性：植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力。愈伤组织：胚性愈伤：呈淡黄色或者黄绿色，质地较均匀；细胞球状或近球状，细胞核大，细胞质浓非胚性愈伤：呈褐色、白色粉末状或白色、绿色坚硬块状；细胞一般为长柱状等非规则形状，细胞核小，细胞质较稀。农杆菌介导转基因的原理：植物细胞在受伤后，创伤分子诱导农杆菌Vir区各种基因的激活和表达，导致T-DNA被剪切，加工，形成T-链蛋白复合体（T-复合体），通过农杆菌和植物细胞的细胞膜，细胞壁进入植胞内，T-复合体上的核靶向序列可引导T-DNA整合到植物基因组。三、材料与用品1、实验材料：棉花材料YZ1（上周做的无菌苗）、农杆菌菌株LBA4404。2、用具：超净工作台，显微镜，载玻片，天平，三角瓶，封口膜，橡皮筋，镊子，酒精灯，培养皿，滤纸，剪刀，医用手术刀，摇床。3、药品：诱导、共培养培养基，卡宝品红染色液，MGL活化培养基，LB培养基，乙酰丁香酮（AS）。四、实验步骤（一）棉花愈伤组织的诱导及观察1、愈伤诱导培养基的配制（第1周已做）2、无菌苗的制备3、无菌苗的切取：选取培养7天左右健壮的无菌苗Z于垫有滤纸的培养皿上，用解剖刀切掉子叶及生长点，切掉胚根及相连的约1/4的下胚轴，余下的下胚轴用作愈伤组织诱导的外植体，用解剖刀将下胚轴切成～0.7cm小段。4、外植体接种及离体培养：将切离好的外植体接种于愈伤诱导培养基上（每瓶约7段），平行放Z，28℃光照培养，每天14小时光照，进行愈伤组织诱导及增殖培养。5、愈伤组织继代（一个月后）：待培养一个月左右，将增殖后的愈伤组织连同下胚轴切断继代到分化培养基上，进行胚性愈伤组织的分化。6、愈伤组织形态观察：分别挑取少量非胚性愈伤和胚性愈伤组织，Z于载玻片上，滴几滴清水用镊子捣碎愈伤组织，然后滴加一滴卡宝品红染色数秒钟后，在显微镜下观察比较两者细胞学特征。（二）农杆菌介导的棉花下胚轴的遗传转化1、共培养及选择培培养基的配制（第2周已做，没倒皿的组倒皿）2、无菌苗的制备（第2周已做）3、农杆菌的活化（研究生帮忙做）：从超低温冰箱内取出保存菌株的甘油管在冰上融化；按1:100的体积加入20mlLB液体培养基里摇菌，28℃暗培养36-48hr；将浑浊的农杆菌液涂布于LB平皿上，28℃暗培养36-48hr；把培养基表面菌落刮入装有20mlMGL培养基的三角瓶中（按1/1000比例加入AS），28℃、200rpm摇30min；OD值在0.5-1.5之间（估计）即可用于侵染。4、下胚轴与农杆菌共培养：把无菌苗切成~7mm茎段（同诱导程序），用镊子夹到经活化的菌液中进行侵染，摇匀，侵染10分钟；倒掉菌液，将下胚轴转入装有滤纸的灭菌培养皿中，吹5分钟使表面稍为干燥；再将下胚轴分散布于垫有滤纸的共培养培养基中，19-21℃,暗培养48-60小时结束共培养。5、选择培养（48-60小时后）：把经过共培养的下胚轴用镊子转入选择培养基中，培养30天左右继代一次转入相同的选择培养基中。五、注意事项1、在切无菌苗时，一定要使用锋利的刀片,尽量做到一刀能切断，避免挤压茎段。2、无菌苗培养时间不宜过长（培养七天最好）。3、从超低温冰箱内取出的甘油管，应尽量减少其在冰箱外的时间，用完后尽快放回冰箱。4、侵染时下胚轴稍为干燥可以增加农杆菌的吸附。5、共培养后第一次进行选择培养时应尽量使培养的环境保持干燥，可以减少农杆菌的污染。6、整个过程均为无菌操作环境。六、实验结果：1．锥形瓶与平皿中的下胚轴生长状况均良好，观察到平皿中农杆菌介导转化的下胚轴有发黑的现象，而锥形瓶中诱导的愈伤组织则无发黑现象。2．两个平皿中的拟南芥均生长缓慢且幼叶发黄，推测原因可能与杂菌感染有关。篇三：生物技术制药综合实验报告生物技术制药实验报告人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的表达与纯第一节引言1.1表皮生长因子(EGF)概述生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用，它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合，参与细胞的各种生命活动。生长因子可以是维生素，碱基，多肽等。所研究的表皮生长因子，就是一种人机体细胞合成的一种多肽。在生物体内，每个细胞的生长状态不同，在不同组织中的细胞的表皮生长因子参与生长、增值、死亡等过程。目前，表皮生长因子已得到广泛应用。在许多公司已经开始研发甚至是生产出EGF，多种疾病的诱发原因很多