浙江专版2024-2025学年高中生物第一章实验一大肠杆菌的培养和分离教学案浙科版选修1

PAGE15-试验一大肠杆菌的培育和分别1.培育基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等养分物质。21.培育基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等养分物质。2..本试验用LB液体培育基扩大培育大肠杆菌，用LB固体培育基分别大肠杆菌。3.消毒是指运用较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物；而灭菌是指运用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。4..试验室常用煮沸消毒法、紫外线或化学药剂进行消毒；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌及过滤灭菌等。5.固体培育基的配制过程为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。6.微生物分别接种最常用的方法是划线分别法和涂布分别法。一、微生物1．概念：微生物是结构简洁、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。二、培育基1．概念人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分基质。2．养分构成各种培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满意微生物生长对pH、特殊养分物质以及氧气的要求。3．培育基的类型(1)按物理性质分：固体培育基、半固体培育基、液体培育基。(2)按目的用途分：鉴别培育基、选择培育基。4．微生物生长对特殊养分物质的要求(1)细菌培育基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置，细菌喜荤。(2)霉菌培育基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可，霉菌喜素。5．微生物生长对pH的要求细菌要求在中性偏碱(6.5～7.5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸(5.0～6.0)的环境中生长。三、无菌技术1．获得纯净培育物的方法获得纯净培育物的关键是防止外来杂菌的入侵，详细操作如下：(1)对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等进行灭菌。(3)为避开四周环境中微生物的污染，试验操作应在酒精灯火焰旁边进行。(4)试验操作时应避开已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触。2．消毒和灭菌(1)概念：[填表]项目方法结果常用的方法消毒较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌(2)常用方法：[连线]四、分别细菌的两种方法比较项目划线分别法涂布分别法工具接种环玻璃刮刀原理划线过程中接种环上的菌液渐渐削减，到划线最终部分细菌间距离加大，经培育后能得到单菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，进行培育。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培育基表面形成单个的菌落特点方法简洁，但单菌落较难分开单菌落更易分开，但操作困难些目的使培育基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落五、大肠杆菌的培育与分别1．大肠杆菌(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。(2)繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2．扩大培育与分别扩大培育用LB液体培育基，划线分别用LB固体平面培育基。3．大肠杆菌分别过程(1)培育基灭菌：50mLLB液体培育基和50mLLB固体培育基及培育皿运用高压蒸汽灭菌。(2)倒平板：将培育基分别倒入4个灭菌后的培育皿中，水平放置，使之形成平面。(3)接种：在装有液体培育基的三角瓶中接种大肠杆菌，在每分钟200转的摇床上振荡培育12h。(4)划线分别：用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培育基的平板上连续划线，盖好培育皿。培育皿倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培育箱中培育12～24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落。(5)培育视察：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培育24h后，置于4℃冰箱中保存。1．下列操作错误的是()A．用酒精擦拭双手B．用氯气消毒水源C．试验操作应在酒精灯火焰旁边进行D．玻璃器皿(吸管、培育皿)用酒精擦拭灭菌解析：选D对玻璃器皿一般应进行干热灭菌，而不是用酒精擦拭消毒。2．下列有关涂布分别法的叙述，错误的是()A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释B．将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培育基的表面C．在相宜条件下培育D．都可在培育基表面形成单个的菌落解析：选D涂布分别法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，在相宜条件下培育。只有在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细菌，从而在培育基表面形成单个的菌落。3．进行恒温培育时为什么要将培育皿倒置？提示：恒温培育时，培育基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培育皿则会使水蒸气凝聚成的水滴在培育基表面更好地挥发；假如正放，则水分形成的水滴会落入培育基表面并扩散开。假如培育皿中已形成菌落，则会导致菌随水扩散，很难再分成单菌落，达不到分别目的。4．试验完成后，接种过细菌的器皿应如何处理？提示：全部接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤(特殊是培育基)；运用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。

eq\a\vs4\al(核心要点一)eq\a\vs4\al(\b\lc\|\rc\(\a\vs4\al\co1(,,,,)))eq\a\vs4\al(培育基及无菌技术)1．LB培育基的分类及用途2．几种常用灭菌和消毒方法的比较灭菌和消毒种类主要方法应用范围灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧微生物接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中的试管口或瓶口等干热灭菌干热灭菌箱在160～170℃加热1～2h玻璃器皿(如吸管、培育皿等)、金属用具等凡不相宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品高压蒸汽灭菌100kPa、121℃维持15～30min培育基及多种器材、物品玻璃砂漏斗过滤灭菌玻璃砂漏斗过滤含尿素或葡萄糖的培育基的灭菌煮沸消毒法100℃煮沸5～6min家庭餐具等生活用品的消毒紫外线消毒30W紫外灯照耀30min接种室、接种箱、超净工作台化学药物消毒用体积分数为70%～75%的酒精、碘酒涂抹，来苏尔喷洒等用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等的消毒3．倒平板操作的留意事项(1)打开紫外灯和过滤风，待LB固体培育基冷却到60℃左右。(2)关闭紫外灯，点燃酒精灯，用酒精棉球擦拭桌面及双手。(3)在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜。(4)使锥形瓶的瓶口快速通过火焰。(5)左手将培育皿打开一条缝隙，右手将培育基倒入培育皿，立即盖上皿盖。(6)待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。[题组冲关]1．大肠杆菌的培育和分别所用的培育基从物理性质上分别属于()A．液体培育基、固体培育基B．固体培育基、液体培育基C．液体培育基、液体培育基D．固体培育基、固体培育基解析：选A培育基从物理性质上可分为固体、半固体和液体培育基。大肠杆菌的分别和培育分别用固体和液体培育基。2．下列对灭菌和消毒的理解，错误的是()A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质上是完全相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法解析：选B消毒是运用较为温柔的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分微生物，不包括芽孢和孢子。灭菌则是运用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。3．下列有关倒平板操作的叙述，错误的是()A．将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口快速通过火焰C．将培育皿打开，培育皿盖倒放在桌面上D．平板冷却凝固后须要倒过来放置解析：选C整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培育皿应放在火焰旁，打开的锥形瓶瓶口应快速通过火焰，培育皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培育皿盖完全打开，平板冷却凝固后须要倒过来放置。4．请回答下列与大肠杆菌有关的问题：(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________。(2)下表是某公司研发的一种培育大肠杆菌菌群的培育基配方。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4显色剂琼脂含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL该培育基属于__________(填“固体”或“液体”)培育基。该培育基中的碳源是____________________。(3)在微生物培育操作过程中，为防止杂菌污染，需对培育基和培育皿进行____________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手须要进行清洗和__________。空气中的细菌可用紫外线杀灭，其缘由是紫外线能使蛋白质变性，还能____________________。(4)将配制好的培育基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入______________中灭菌，温度为________，时间为__________。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到大气压时，将试管取出。假如棉塞上沾有培育基，此试管应____________。(5)运用高压蒸汽灭菌锅时留意，先向锅内倒入________。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。若在灭菌前，没有排尽锅内的冷空气会导致________________________________________________________________________。(6)从一支试管向另一支试管接种时留意，接种环要在酒精灯________(填“内焰”或“外焰”)灭菌，并且待接种环______后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰旁边，将接种的试管在相宜温度下培育，长成菌落后放入______冰箱中保存。解析：(1)大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆菌属于分解者。(2)表中的培育基配方中含有琼脂，是固体培育基，其中能为大肠杆菌供应碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)微生物培育过程中，培育基和培育皿要进行灭菌，操作者的双手要进行清洗和消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。(4)培育基及器材、物品的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下，灭菌15～30min。若棉塞上沾有培育基，易被杂菌污染，应废弃。(5)运用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还有可能损坏设备。(6)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，否则会杀死菌种造成试验失败。答案：(1)分解者(2)固体乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)灭菌消毒损伤DNA的结构(4)高压蒸汽灭菌锅121℃15～30min废弃(5)适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底(6)外焰冷却4℃eq\a\vs4\al(核心要点二)eq\a\vs4\al(\b\lc\|\rc\(\a\vs4\al\co1(,,,,)))eq\a\vs4\al(大肠杆菌的培育和分别)1．平板划线法的操作步骤2．涂布平板法的操作步骤(1)操作图示：(2)相关说明：①将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101～106的依次编号。②用移液管吸取1mL培育的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。③从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复②步的混匀操作。依次类推，直到完成最终一支试管的稀释。[题组冲关]5．如图是微生物平板划线示意图，划线的依次为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()A．操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B．划线操作须在火焰上进行C．只有在5区域中才有可能得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环进行灭菌解析：选D进行平板划线操作之前，要将接种环在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌；平板划线操作应在火焰旁进行，不能在火焰上进行；由题图可知，5区域是最终一个区域，有可能在5区域获得所须要的菌落，在4区域也有可能得到所须要的菌落。6．现有1L水样，梯度稀释至103倍。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培育基上培育，记录的菌落数分别为55、56、57个，则每升原水样中大肠杆菌数为()A．560个 B．5.6×105个C．5.6×107个 D．5.6×108个解析：选D图中稀释的倍数是103，三个菌落的平均数＝(55＋56＋57)÷3＝56，则每毫升样品中菌株数＝56÷0.1×103＝5.6×105个，所以每升土壤浸出液中的菌株数＝5.6×105×103＝5.6×108个。7．大肠杆菌是生活在人和高等动物体内的一种常见细菌，在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污染的指示菌，在遗传学上常作为试验材料，在基因工程中常用它作为受体细胞，为人类的健康和科学技术的发展作出了很多贡献。请回答下列有关大肠杆菌的问题：(1)在大肠杆菌培育过程中，除考虑养分条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简洁、易培育、____________等优点，因此常作为遗传学探讨的试验材料。(2)分别大肠杆菌时常用的接种方法是____________法和____________法。前者操作简洁，后者________更易分开，但操作困难些。(3)培育大肠杆菌时，在接种前须要检测培育基是否被污染。对于固体培育基应采纳的检测方法是将未接种的培育基在相宜的温度下放置适当的时间，视察________________________。(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是()A．严格操作、多次重复B．保证待测样品稀释的浓度比较合适C．倒平板培育D．计数全部浓度梯度下的菌落，取其平均值(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形态、大小、硬度和颜色等____________对细菌进行初步的鉴定(或分类)。(6)若用大肠杆菌进行试验，运用过的培育基及其培育物必需经过________处理后才能丢弃，以防止培育物的扩散。解析：(1)大肠杆菌的培育除须要合适的养分条件外，还须要相宜的温度、酸碱度(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型简洁选择、繁殖速度快，常作为遗传学探讨的试验材料。(2)分别微生物常用的接种方法有划线分别法和涂布分别法。前者方法简洁，后者单菌落更易分开，但操作困难些。(3)培育大肠杆菌时，在接种前须要检测培育基是否被污染。对于固体培育基应采纳的检测方法是将未接种的培育基在相宜的温度下放置适当的时间，视察培育基上是否有菌落产生。若固体培育基被细菌污染，在相宜条件下培育一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可依据菌落数量的多少推断污染程度。(4)若用涂布分别法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，应当采纳倒平板培育，并且严格操作、多次重复，保证待测样品稀释的浓度比较合适。(5)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形态、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(6)因为有的大肠杆菌会释放一种剧烈的毒素，并可能导致肠道出现严峻症状，所以运用过的培育基及其培育物必需经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培育物的扩散。答案：(1)温度酸碱度(pH)生活周期短(或繁殖快)(2)划线分别涂布分别单菌落(3)培育基上是否有菌落产生(4)D(5)菌落特征(6)灭菌[随堂基础巩固]1．下列关于培育基的说法，正确的是()A．任何培育基都必需含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B．培育基只有液体培育基和固体培育基C．固体培育基中加入少量水即可制成液体培育基D．配制培育基时要留意各种养分的浓度和比例解析：选D不同微生物对养分物质的需求不同，如自养微生物的培育基不须要加碳源，自生固氮菌的培育基不须要加氮源。按不同的分类标准，培育基可有不同的种类。配制培育基时要留意各种养分的浓度和比例。2．下列操作与消毒、灭菌无关的是()A．接种前用酒精灯火焰灼烧接种环B．接种前用酒精擦拭双手C．将平板倒置，放入培育箱中培育D．接种在酒精灯的火焰旁完成解析：选C将平板倒置，放入培育箱中培育与灭菌无关。3．采纳干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照耀等几种方法，可分别用于对哪些器物的灭菌()A．接种环、吸管、培育基、接种室B．培育皿、接种环、培育基、接种箱C．培育基、吸管、接种环、接种箱D．培育皿、吸管、培育基、双手解析：选B干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2h，适用于耐高温且须要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培育皿)和金属用具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min，主要用于培育基灭菌；紫外线照耀适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、超净工作台等，运用前用紫外线照耀约30min。4．将接种后的培育基和一个未接种的培育基都放入37℃恒温箱的目的是()A．对比视察培育基的成分是否相同B．对比分析培育基是否被杂菌污染C．没必要放入未接种的培育基D．为了下次接种时再运用解析：选B对未接种的培育基进行培育，起到比照作用，可确定培育基是否被杂菌污染。5．下列有关平板划线操作的描述，错误的是()A．将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红B．接种环在平板上划线的位置是随机的C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰D．最终一区的划线不能与第一区相连解析：选B将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红；接种环在平板上划线的位置不是随机的；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰；最终一区的划线不能与第一区相连。6．下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用____________法进行微生物接种，图乙是利用____________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是____________和玻璃刮刀；对这两种接种工具进行灭菌的方法依次是__________和取出放在70%酒精中的玻璃刮刀引燃。(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步削减，每次划线都要从________________起先，平板划线结束后，最终一次划的线不能与第一次划的线________。(3)接种操作为什么肯定要在酒精灯火焰旁边进行？________________________________________________________________________。(4)下图是接种后培育的效果图解，其接种方法是______(填“图甲”或“图乙”)。(5)假设用图乙所示方法接种培育结束后，发觉培育基上菌落连成一片，可能的缘由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)图甲和图乙分别是划线分别法和涂布分别法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和玻璃刮刀。(2)划线分别时，每次划线前都要从上一次划线的末端起先，最终一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰旁边存在着无菌区域，因此接种常在酒精灯火焰旁边进行。(4)培育基上的菌落分布匀称，接种方法为涂布分别法。(5)采纳涂布分别法进行菌种分别时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。答案：(1)划线分别涂布分别接种环灼烧灭菌(2)上一次划线的末端相连(或相接、相交、交叉等)(3)火焰旁边存在着无菌区域(4)图乙(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高课时跟踪检测]对应配套卷P491．下列有关微生物培育条件的叙述，错误的是()A．分别微生物常用固体培育基，扩大培育常用液体培育基B．“细菌喜荤，霉菌喜素”，培育基中成分的含量和配比因培育物而异C．培育基的灭菌均采纳高压蒸汽法D．制作固体培育基时经常加入琼脂解析：选C培育基的灭菌通常是采纳高压蒸汽法，但因培育基的成分而异。如培育基中有葡萄糖，高压蒸汽条件下会导致葡萄糖分解碳化，而采纳500g/cm2压力灭菌30min。2．获得纯净培育物的最关键环节是()A．将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌C．相宜环境条件下培育D．防止外来杂菌的入侵解析：选D纯净培育物是单一、纯种菌的菌落。因此，确保无其他杂菌的入侵是关键。3．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒。下述有关接种金黄色葡萄球菌的试验叙述错误的是()A．将灼烧的接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C．对接种环进行灼烧处理D．接种后还要将试管口灭菌加塞解析：选A接种环伸入试管后应先接触未长菌的部位，待接种环冷却后再接触长菌部位。4．下列划线分别的图解中，正确的是()解析：选C划线分别的划线有很多要求。A的划线方法不对，而B错在划线2的起点，D项错在4与1交叉了。5．要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必需对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培育、并利用纯化技术得到单菌落。请回答下列有关大肠杆菌的培育和分别试验的相关问题：(1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培育，一般用LB培育基，在培育基中为微生物供应碳源、氮源和能源的物质主要是____________________，为调整渗透压，要加入肯定量的__________。为进行大肠杆菌的分别，还要加入琼脂配制成固体培育基，并进行倒平板的操作。(2)获得纯净微生物培育物的关键是____________________，为此，必需对培育器皿、接种用具和培育基进行严格灭菌。培育器皿和培育基一般采纳________法灭菌，接种环采纳灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对试验者的衣着、手和试验空间进行严格清洁和消毒外，还必需_______________________________________以防止空气中的杂菌污染。(3)大肠杆菌菌种的扩大培育一般采纳液体培育基，接种后将培育基置于37℃摇床振荡条件下培育12小时。菌种的分别一般在固体培育基上采纳____________法，并将培育皿以______状态放置于相宜温度的恒温箱中，培育12～24小时后，____________________，接种于固体斜面培育基上，37℃培育24小时后，得到的纯化菌种在________条件下保存。解析：(1)LB培育基的主要成分有蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水、琼脂，其中蛋白胨和酵母提取物为微生物供应碳源、氮源和能源，氯化钠可以调整培育基的渗透压，琼脂作为凝固剂。(2)微生物纯培育的关键是防止外来杂菌的污染，因此操作过程中要严格灭菌，培育器皿和培育基一般采纳高压蒸汽灭菌法灭菌，而接种时要在酒精灯火焰旁进行。(3)大肠杆菌菌种分别采纳划线分别法，接种后将培育皿置于恒温箱中倒置培育，以防培育过程中被污染；培育后菌种的保藏方法是：用接种环将单菌落挑出，接种于斜面培育基上，37℃培育24小时后置于4℃条件下保存。答案：(1)蛋白胨和酵母提取物氯化钠(2)防止外来杂菌的侵入高压蒸汽灭菌保证操作过程在酒精灯火焰旁进行(3)划线分别倒置将单菌落用接种环取出4℃6．大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。假如食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品