TNAIA 0364-2025 金银花中12种有效成分含量的测定 液相色谱-质谱联用法

ICSCCSA017

T/NAIA团 体 标 准T/NAIA0364-2025金银花中12种有效成分含量的测定液相色谱-质谱联用法nf2estneeflos‒Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod2025-01-24发布 2025-01-31实施宁夏化学分析测试协会 发布T/NAIA0364-2025T/NAIA0364-2025II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。生态研究所，宁夏回族自治区食品检测研究院。吴燕、马斌、开建荣、赵丹青、杨春霞、陈翔、石欣。T/NAIA0364-2025T/NAIA0364-2025PAGEPAGE1金银花中12种有效成分含量的测定液相色谱-质谱联用法范围本文件规定了金银花中12种有效成分含量的液相色谱-质谱联用测定方法。12（ABC规范性引用文件（有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理70%甲醇溶液超声提取，上清液经离心后，液相色谱-质谱联用仪检测，外标法定量。试剂与材料除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。试剂甲醇(CH3OH，CAS号：67-56-1)：色谱纯。乙腈(CH3CN，CAS号：75-05-8)：色谱纯。甲酸(HCOOH，CAS号：64-18-6)：色谱纯。溶液配制70%甲醇溶液(70+30，体积比)30mL70mL甲醇中，混匀。0.1%1.0mL1000mL，摇匀。标准品新绿原酸（CAS号906-33-2）、绿原酸（CAS号327-97-9）A（CAS号89919-62-0）B（CAS号14534-61-3）C（CAS号32451-88-0）、木犀草苷（CAS号5373-11-5）、獐牙菜苷（CAS号14215-86-2）冬苷（CAS号25694-72-8）、莫诺苷（CAS号25406-64-8）、当药醇苷（CAS号23445-00-3）、断氧化马钱子苷（CAS号58822-47-2）、断马钱子酸（CAS号60077-46-5），纯度均≥98%。标准溶液配制标准储备溶液(1000mg/L)10mg（0.1mg）醇溶液(5.2.1)10mL，避光-18℃及以下条件保存。混合标准储备溶液(10mg/L~100mg/L)醇溶液(5.2.1)定容至刻度，避光-18℃及以下条件保存。材料微孔滤膜(水相)：13mm×0.22μm，或相当者。仪器与设备液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。0.1mg0.01g。离心机：4000r/min。高速粉碎机：10000r/min。涡旋混合器。数控超声波：40KHz。分析步骤试样制备500-18存。样品提取将试样充分混匀，称取0.02g，精确至0.0001g，置于100mL容量瓶中，先加入90mL甲醇溶液(5.2.1)，超声处理30min，冷却后定容至100mL，摇匀后静置30min，过0.22μm滤膜，待测定。测定液相色谱参考条件a）色谱柱：C18柱，2.1mm（内径）×100mm，粒径1.7μm，或相当者；b）流动相：A相为甲酸水溶液(5.2.2)，B相为乙腈(5.1.2)c）流速：0.3mL/min；d）柱温：40℃；e）进样量：2μL。表1 流动相及其梯度条件（VA+VB）时间minVA%VB%0.0090100.5090106.505957.505957.6090109.009010质谱参考条件a）离子源类型：电喷雾离子源；b）扫描方式：负离子扫描；c）电喷雾电压：负离子-4500V；d）离子源温度：500℃；e）喷雾气流速：50L/h；f）气帘气流速：50L/h；2A。标准工作曲线精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用甲醇溶液(5.2.1)稀释成质量浓度为0.01mg/L、0.02mg/L0.05mg/L0.1mg/L0.2mg/L0.5mg/L1mg/L3mg/L5mg/L的标准工5坐标，绘制标准工作曲线。定性及定量保留时间在±2.5%之内。离子丰度比2品中存在目标被测物。表2定性确证相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%本方法的标准物质LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见附录B。定量外标法定量。结果计算试样中各组分含量以质量分数X计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式(1)计算。X=1000

（1）式中：

m

………X——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；ρ——基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L)；V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；m——试样质量的数值，单位为克（g）。221mg/kg3位有效数字。精密度在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录C的要求。定量限本方法对12种有效成分的定量限为0.01mg/kg～0.1mg/kg(见附录D)。附录A（资料性）12种有效成分的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数12种有效成分的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数，见表A.1。表A.1 12种有效成分的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数序号中文名称英文名称保留时间min去簇电压V离子对Ⅰ碰撞能V离子对Ⅱ碰撞能V1新绿原酸neochlorogenicacid1.54-120353.1/190.9-26353.1/134.9-422绿原酸chlorogenicacid2.25-120353.2/191.2-23353.2/84.9-583异绿原酸AisochlorogenicacidA3.95-120515.2/353.1-20515.2/191.0-404异绿原酸BisochlorogenicacidB3.88-120515.2/172.9-25515.2/335.9-405异绿原酸CisochlorogenicacidC4.05-120515.3/353.1-26515.3/173.0-406木犀草苷luteoloside3.78-120447.1/285.1-36447.1/256.1-607獐牙菜苷sweroside3.32-120357.2/124.9-25357.2/196.0-228忍冬苷lonicerin3.74-120593.2/285.0-52593.2/447.2-509莫诺苷morroniside2.18-120405.3/242.8-15405.3/141.1-3010当药醇苷swertianolin4.09-120435.2/271.9-32435.2/256.9-5611断氧化马钱子苷secoxyloganin3.52-120403.2/371.1-20403.2/179.2-2012断马钱子酸secologanicacid2.82-120373.0/59.0-20373.0/97.0-60附录B（资料性）12种有效成分多反应监测（MRM）质量色谱图12种有效成分多反应监测（MRM）质量色谱图，见图B.1。图B.1 12种有效成分多反应监测（MRM）质量色谱图附录C（规范性）实验室内重复性要求实验室内重复性要求，见表C.1。表C.1实验室内重复性要求被测组分含量mg/kg精密度%>0.001≤0.01≤20>0.01≤0.1≤15>0.1≤1≤15>1≤10附录D（资料性）12种有效成分中英文名称和方法定量限12种有效成分中英文名称和方法定量限，见表D.1。表D.112种有效成分中英文名称和方法定量限序号中文名英文名方法定量限/mg/kg1新绿原酸neochlorogenicacid0.052绿原酸chlorogenicacid0.053异绿原酸AisochlorogenicacidA0.054异绿原酸BisochlorogenicacidB0.055异绿原酸CisochlorogenicacidC0.056木犀草苷lut