TNAIA 0320-2024 化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法

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T/NAIA团 体 标 准T/NAIA0320-2024化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物的测定高效液相色谱法DeterminationofRutinandotherflavonoidincosmeticsByHigh-performanceliquidchromatography2024-10-02发布 2024-10-20实施宁夏化学分析测试协会 发布T/NAIA0320-2024T/NAIA0320-2024II前 言GB/T1.1-20201则》的规定起草。本文件由宁夏回族自治区药品检验研究院提出。本文件由宁夏化学分析测试协会归口。本文件起草单位：宁夏回族自治区药品检验研究院（(宁夏))宁夏工商职业技术学院。本文件主要起草人：肖哲丽、王宁、王宁霞、马玲、尚博扬、翟宇、武亦融、王荣、贺凯、刘永衡、马宗卫。T/NAIA0320-2024T/NAIA0320-2024PAGEPAGE1化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物的测定高效液相色谱法DeterminationofRutinandotherflavonoidincosmeticsByHigh-performanceliquidchromatography1范围662GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理5试剂与材料除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水。甲醇溶液：准确量取800mL甲醇于1L磷酸溶液：准确量取1.0mL磷酸于1L标准品芦丁（CAS号153-18-4）、杨梅酮（CAS号529-44-2）、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷（CAS号604-80-8）、槲皮素（CAS号117-39-5）、木樨草素（CAS号491-90-3）、山奈酚（CAS号520-18-3）标准品：纯度≥91%。标准品溶液配制-3-O-β-D-1000mg/L4℃使用三个月。（5.6.1）各2.5mL于50mL中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为50mg/L的混合标准储备溶液，临用现配。混合标准工作溶液：分别准确量取混合标准储备溶液（5.6.2）0.2mL、0.4mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL用甲醇稀释至10mL，得到浓度为1.0µg/mL、2.0µg/mL、5.0µg/mL、10.0µg/mL、25.0µg/mL、50µg/mL的混合标准工作溶液（混合标准工作溶液范围可根据实际情况进行调整），临用现配。标准溶液色谱图见附录A。6仪器与设备分析天平：感量0.00001g。超声波清洗器。超纯水机。多管涡旋混合仪。微孔滤膜：0.45μm，有机系。7样品处理0.5g(0.0001g)10mL（类样品应取液体部分），6mL80%甲醇溶液，涡旋震荡使试样与提取溶剂充分混20min80%10mL0.45µm有机微孔滤膜过滤后，滤液作为样品待测溶液。8测定条件高效液相色谱参考条件如下：色谱柱：C18柱或等效色谱柱；b)柱温：25℃；c)流动相：A:0.1%磷酸（5.4），B:甲醇（5.1）,见表1；检测波长：360nm；流速：0.8mL/min；进样量：10μL。表1梯度洗脱程序时间（min）流动相A（%）流动相B（%）05149105149133070203070235149285149测定9分析结果的表述试样中芦丁、杨梅酮、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈酚6种黄酮类化合物的含量按以下公式计算：ω=𝜌×𝑉×𝐷 （1）𝑚×1000ω——6（gρ——代入标准曲线测得试样中芦丁等6种黄酮类化合物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；m——试样的质量，单位为克（g）；V——试样中加入并定容的提取溶液体积的数值，单位为毫升（mL）；D——为稀释倍数；注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。10精密度在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。11其他-3-O-β-D-6附录A（资料性）-3-O-β-D6图A.混合标准溶液色谱图1:芦丁（8.223min）;2