实验项目槐米中芸香苷的提取精制及检识课件

实验项目槐米中芸香苷的提取精制及检识1.槐米中芸香苷的提取（2学时）2.芸香苷的精制（2学时）3.水解芸香苷得到槲皮素（4学时）4.芸香苷和槲皮素的检识（4学时）主要内容槐花槐米槐米系豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾。能凉血止血，清肝泻火。用于便血，痔疮出血，血痢，尿血，吐血，高血压症等。芸香苷槲皮素（苷元）

槐米中有效成分为芸香苷,又称芦丁(rutin)。含量可高达12～20％，药理实验证明芸香苷有调节毛细血管渗透作用，临床上可作为毛细血管脆弱引起的出血症，常作为高血压的辅助治疗药。实训内容

1.槐米中芸香苷的提取

实训目的掌握黄酮及其苷类化合物的性质及提取分离方法。学会运用碱溶酸沉法对槐米中的芸香苷进行提取分离。实训原理芸香苷分子中含具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。操作步骤加入0.4%硼砂水溶液200ml，搅拌下加入石灰乳调节pH8-9，加热保持微沸20min（注意补充水分，保证pH值），趁热用棉花过滤槐米（20g）合并滤液残渣用浓盐酸调pH3-4，盖好，静置加入150ml0.4%硼砂水溶液同法操作再提取15min，趁热用棉花过滤残渣（弃去不要）滤液提示1.提取时加入0.4%硼砂水溶液的目的：既能调节pH，又可以与芦丁中的邻二酚羟基络合，保护邻二酚羟基不被氧化。2.

加石灰乳既可达到调pH值的目的，还可以除去槐米中的多糖类、粘液质等杂质。注意1.加石灰乳时应严格控制在pH8～9，不得超过10，如碱性太强，钙离子易与酚羟基、羰基形成难溶于水的鳌合物，降低收率。2.酸化时加盐酸控制pH在3～4，如果pH＜2，容易使芸香苷的醚键形成

盐，不易析出沉淀，降低收率。实训内容

2.芸香苷的精制实训目的掌握重结晶法的原理。学会运用重结晶法对芸香苷粗品进行精制。实训原理根据杂质难溶于水，而芸香苷在冷、热水中溶解度相差悬殊的性质采用重结晶法进行精制。芸香苷性状：浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶。溶解度：在冷水中1:10000，沸水中1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中1:60。沸甲醇中1:7。第一次实验所得液体滤液沉淀（粗品芦丁）抽滤置300ml蒸馏水中，煮沸，至芸香苷完全溶解，趁热抽滤残渣滤液盖好，静置操作步骤减压抽滤装置思考1.以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么？2.重结晶的操作要点有哪些？实训内容

3.芸香苷的水解实训目的掌握苷类的酸水解方法。能够熟练操作芸香苷的酸水解。实训原理芸香苷可被稀酸水解生成苷元槲皮素及葡萄糖、鼠李糖。芸香苷槲皮素葡萄糖鼠李糖精制所得液体滤液沉淀抽滤操作步骤精制芸香苷置60～70℃烘箱中烘干（称重）提取率=所得重量（g）20g*100%精制芸香苷（1g）置250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸80ml，加3粒沸石，加热回流40min，放冷，抽滤。沉淀滤液水洗至中性，抽干水分，烘干槲皮素注意观察现象：未加热时，瓶内为混悬液（芦丁不溶于冷水），加热后，混悬液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水），继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不溶于水）实训内容

4.芸香苷和槲皮素的检识实训目的掌握黄酮类化合物、酚羟基、苷的化学检识方法。掌握硅胶色谱和聚酰胺色谱的分离原理。能够熟练进行薄层色谱操作。实训原理硅胶薄层色谱分离黄酮类成分的原理为极性吸附，极性大的物质吸附强。聚酰胺薄层色谱是利用聚酰胺分子内存在的许多酰胺基，能与酚类的羟基、酸类的羧基及醌类的醌基形成氢键而产生吸附，能够形成氢键的基团越多，吸附越强。黄酮类化合物的显色反应；酚羟基的显色反应；苷的鉴定。1.色谱检识样品溶液的制备：

芸香苷样品溶液：取精制芸香苷少量，加10ml乙醇溶解，备用。

槲皮素样品溶液：取槲皮素少量，加10ml乙醇溶解，备用。硅胶薄层色谱操作（1）点样：取硅胶薄层板，在下端约1.5-2cm处用铅笔画一直线，作为起始线，点上下列样品:

①自制芸香苷乙醇液②芸香苷对照品乙醇液③自制槲皮素乙醇液④槲皮素对照品乙醇液（2）展开：展开剂乙酸乙酯：甲醇：冰醋酸（15：1：0.5）；用量10ml；

展距

10cm（3）显色：展开完→取出硅胶板→划前沿线→晾干→可见光观察→紫外光观察→氨水熏→观察记录斑点颜色和位置（4）结果：计算Rf值，并比较。10cm①②

③④

聚酰胺薄层色谱（1）点样：取聚酰胺薄膜，在下端约0.8cm处用铅笔画一直线，作为起始线，点上下列样品:

①自制芸香苷乙醇液②芸香苷对照品乙醇液③自制槲皮素乙醇液④槲皮素对照品乙醇液自制样品要求：澄清透明，完全溶解（2）展开展开剂乙醇：水：乙酸乙酯（3：1：0.5）用量4ml展距5cm（3）显色：展开完→取出薄膜→划前沿线→溶剂挥干→可见光观察→紫外光观察→氨水熏→记录斑点颜色和位置聚酰胺色谱紫外灯下结果（4）结果：计算Rf值，并比较。2.化学检识样品：点样后剩下的

自制芸香苷乙醇液

自制槲皮素乙醇液试剂：镁粉、浓盐酸、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、1%三氯化铁乙醇溶液、1%三氯化铝乙醇溶液试管8支（芸香苷4支、槲皮素4支）将芸香苷乙醇液和槲皮素乙醇液，分别平分到4支试管中，分别做以下实验。样品溶液+α-萘酚20d→振摇后倾斜45°→沿管壁加浓硫酸20d→静置→观察并记录液面交界处颜色变化（不要摇动）黄酮盐酸-镁粉反应样品溶液+Mg少许+浓HCl2-3d观察颜色变化。黄酮三氯化铝反应样品溶液+AlCl32-3d→观察颜色变化→1d于滤纸上→紫