药品微生物检验技术 课件 模块二 项目八 溶血与凝聚检查

《药品微生物检验技术》模块二药品安全性检查项目八溶血与凝聚检查

任务注射用葛根素的溶血与凝聚检查

目录项目八溶血与凝聚检查任务注射用葛根素的溶血与凝聚检查

任务引入请思考

2021年11月30日，国家药监局发布了《国家药监局关于修订甘油果糖氯化钠注射液药品说明书的公告》。此次修订中，多次标注了甘油果糖氯化钠注射液具有引起溶血的不良反应。在“不良反应”项中增加了溶血，在“注意事项”中注明了“本品滴注过快可发生溶血，如患者出现血红蛋白尿（酱油色尿），立即停止滴注”。如何判断注射液的溶血与凝聚检查是否合格呢？

某制药企业生产了一批注射用葛根素，需要进行溶血与凝聚检查。药物是否会引发溶血与凝聚并不能通过观察药物外观直接做出判断，应该采用什么方法呢？

任务分析本任务以注射用葛根素的溶血与凝聚检查为例，介绍2%红细胞悬液制备、供试品溶液制备、试验方法和结果判断，工作内容及要求见下表。工作内容工作要求关键点2%兔红细胞悬液制备浓度正确、配制正确脱纤、分离、洗涤、混悬供试品溶液制备称量准确、稀释操作准确称量、溶解、定容、稀释试验方法方法正确、完成试验加入试剂、温育、观察现象结果判断结果判断正确对照管的选择相关知识-溶血与凝聚反应1．溶血反应

溶血是指红细胞胞破裂和血红蛋白逸出的现象，又称红细胞溶解，简称溶血。人血浆的等渗溶液为0.9%NaCl溶液，红细胞在低于0.45%NaCl溶液中，因水渗入而膨胀破裂，血红蛋白逸出。多种中草药（如人参、桔梗、远志和甘草等）含有皂甙，可引起溶血。2．凝聚反应

凝聚反应本质是一种免疫学反应，是颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。任务实施一、制订工作计划序号工作内容完成时间成员负责人12%兔红细胞悬液制备

2供试品溶液制备

3溶血与凝聚检查

4结果判断根据任务要求，制定合理工作进度计划，并根据小组成员的特点进行分工。任务实施二、试验前准备设备、器材、试剂规格数量用途生理氯化钠溶液

制备红细胞悬液兔血

制备红细胞悬液锥形瓶、玻璃珠

振摇兔血离心机、离心管

分离红细胞电子天平

称量试剂试管、试管架

容器、支架恒温箱

恒温温育补充1：

补充2：

任务实施三、试验操作序号步骤操作内容1取兔血取健康家兔血液

毫升于含有玻璃珠的锥形瓶中2振摇脱纤振摇

分钟，或用玻璃棒搅动血液，以除去纤维蛋白原3离心分离加入0.9%氯化钠溶液约

倍量，摇匀，每分钟

转离心

分钟，除去上清液，留沉淀4充分洗涤沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤

次，至上清液不显红色为止5混悬红细胞洗涤后的红细胞用0.9%氯化钠溶液制成浓度为

%的混悬液2%兔红细胞悬液制备任务实施三、试验操作序号步骤操作内容1称量供试品称量供试品

毫克2溶解稀释用0.9%氯化钠溶液溶解稀释至

毫升供试品溶液制备任务实施三、试验操作试管编号1、23452%红细胞悬液/mL0.9%氯化钠溶液体积/mL纯化水体积/mL供试品溶液体积/mL溶血与凝聚检查

取洁净玻璃试管5只，编号，1、2号管为供试品管，3号管为阴性对照管，4号管为阳性对照管，5号管为供试品对照管。按表8-2-3所示依次加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液、纯化水，混匀后，立即置37±0.5℃的恒温箱中进行温育。3小时后观察溶血和凝聚反应。

现象观察：如试管中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细

胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液无色澄明，或上

清液虽有色澄明，但1、2号管和5号管肉眼观察无明显差异，则表明无溶血发生。若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，轻轻倒转3次仍不分散，表明可能有红细胞凝聚发生，应进一步置显微镜下观察，如可见红细胞聚集为凝聚。三、试验操作溶血与凝聚检查任务实施三、试验操作试管编号3小时现象是否发生溶血或凝聚结果判断1□合格□不合格2345结果判断任务测评序号考核内容考核标准配分得分12%兔红细胞悬液制备能对血液振摇脱纤5

能离心分离到红细胞5

红细胞洗涤充分5

能正确选用试剂配制红细胞悬液5

红细胞悬液浓度准确10

2供试品溶液制备能准确称量供试品10

能正确选用、量取试剂5

溶解充分5

3试验操作能在规定时间按要求的配比量依次有序加入各试剂10

温育温度、时间正确5

能按规定时间观察试验现象5

任务测评序号考核内容考核标准配分得分4结果判