第10章基因诊断Genediagnosis中国医科

第十四章

基因诊断和基因治疗

Genediagnosisand

GeneTherapy

第一节基因诊断

第二节基因治疗

1第一节基因诊断重组DNA技术极大地丰富了我们对人类遗传病分子病理学的知识，同时也提供了从DNA水平对遗传病进行基因诊断的手段。基因诊断：就是利用DNA重组技术从DNA水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。2一、直接诊断

直接检测致病基因本身的异常。通常使用基因本身或邻近的DNA序列作为探针，或通过PCR扩增产物，以检测基因点突变、缺失、插入等异常及性质。它主要适用于已知基因异常疾病的诊断。31、Gene缺失遗传病的诊断1）α地贫的Gene诊断α基因不同程度的缺失引起不同类型的α地贫，α基因缺失1～4个。正常Gene组用BamHI切割，可得到14kb的片段，而缺失一个αGene时可得到10kb片段。BamHIBamHIα2α1α210kb14kbprobe4以αGene为探针，Southernblot方法检测αα/αααα/α-αα/--α-/----/--

正常缺1缺2缺3缺414kb10kb52）DMD/BMD的缺失诊断（进行性肌营养不良或假肥大型）DMD是一种严重致死性疾病（XR），临床症状表现肌肉进行性萎缩和乏力。BMD临床症状与DMD相似，但症状较轻。Gene定位Xp21，Gene2300kb,79个Exon，cDNA全长13974bp编码3685Aa，分子量427kD。DMD/BMD70%左右为缺失型，基因很大，缺失可能发生在不同的部位。应用多重PCR扩增检测，判断缺失状态。6多重PCR扩增后电泳检测结果病例外显子12345678Pm34350136476052bp53511372、突变型遗传病的基因诊断例如：镰形细胞贫血的Gene诊断已知突变基因编码β珠蛋白链的第6位密码子GAG——GTG谷Aa——缬Aa81）RFLP诊断

已知限制酶MstII识别序列MstII1.15kb

CCTGAGG1.35kbx

probeCCTGTGG突变后不能识别，酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。9限制酶切片段电泳后，经SouthernBlot检测，结果：1.35kb1.15kb

βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS

正常镰状镰状贫血102）ASO探针诊断

已知突变Gene部位和性质，合成寡和苷酸探针，32P标记，进行SouthernBlot杂交/斑点杂交。NormalβΑGeneProbe——与正常βΑ杂交MutationβSGeneProbe——与异常βS杂交

11斑点杂交结果：

βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS

正常探针

突变探针12二、间接诊断

主要通过Gene和DNA多态的连锁分析作出诊断。当致病基因虽然已知，但其异常尚属未知时，或疾病Gene本身尚属未知时，可通过对受检者及其家系进行连锁分析，推断受检者是否获得了带有致病基因的染色体或DNA片段。连锁分析是基于遗传标记与Gene连锁，子代是否获得遗传标记间接地判断做出诊断。这些遗传标记是基因组中的DAN多态，如：RFLP，VNTR等。131、Gene异常不明确的遗传病的诊断例：成年型多囊肾病——APKD，AD，临床表现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒症。APKD——Gene定位16p13，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明，但已证实APKDGene与α珠蛋白基因3`端附近的一段小卫星DNA序列（3`HVR）紧密连锁，因此，可以通过RFLP连锁分析进行诊断。14

以3`HVR为probe与PvuII酶切后的家系有关成员的Gene组DNA杂交——SouthernBlot杂交Gene组DNAprobe（3`HVR）PvuII酶切

DNA片段

杂交结果15结果1212345

5．7kb3．4kb2．3kb

16结果分析

患者（I1、II1和II2）有3.4kb片段,说明致病基因与3.4kb片段连锁,并按孟德尔方式遗传.II5不含3.4kb片段,产前诊断正常.17PCR—RFLP诊断

甲型血友病的基因诊断，已知甲型血友病XR，获得家系成员基因组DNA。PCR142bpBcLI

142bp99bp43bp电泳结果分析？p1p2142bp99bp43bpBclIBclI-BclI+18问:1/Ⅱ2、Ⅲ1诊断；2/Ⅲ1是男或是女发病？

142bp99bp12123ⅠⅡIII119结果分析1）先症者II2具有99bp片段而发病，该片段来自母亲。2）II2有142bp/99bp杂合子。142bp来自父亲，为正常片段，99bp片段是来自母亲而成为携带者。3）Ⅲ1为99bp片段如果是男性为患者（99bp片段来自母亲）；女性为携带者（来自父母双方）20基因诊断意义

现证病人的诊断：争取有效、针对性治疗。产前诊断：意义更为重要，预防遗传病患儿的出生END219、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。2月-252月-25Tuesday,February18,202510、人的志向通常和他们的能力成正比例。11:38:1111:38:1111:382/18/202511:38:11AM11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。2月-2511:38:1111:38Feb-2518-Feb-2512、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。11:38:1111:38:1111:38Tuesday,February18,202513、志不立，天下无可成之事。2月-252月-2511:38:1111:38:11February18,202514、ThankyouverymuchfortakingmewithyouonthatsplendidoutingtoLondon.ItwasthefirsttimethatIhadseentheToweroranyoftheotherfamoussights.IfI'dgonealone,Icouldn'thaveseennearlyasmuch,becauseIwouldn'thaveknownmywayabout.。18二月202511:38:11上午11:38:112月-2515、会当凌绝顶，一览众山小。二