眉睫毛的毛发滋养功效测试方法

T/XXXXICS71.100.70T/XXXXC2682Y42团体标准T/XXXX000-2024T/XXXX000-2024眉/睫毛的毛发滋养功效测试方法Eyebrow/EyelashHairNourishingEfficacyTestMethod2024-XX-XX发布2024-XX-XX实施2024-XX-XX发布2024-XX-XX实施XXXXXXX发布方法编号眉/睫毛的毛发滋养功效测试方法1范围本方法规定了通过测定真人眉/睫毛毛发脂质中十八甲基二十碳烯酸（简称18-MEA）和神经酰胺的含量（第一法），以及通过真人发束（第二法）来评估眉/睫毛产品滋养功效的测试方法，包括但不限于眉笔、眉粉笔、眉胶、睫毛膏、睫毛打底产品等。作用于人体眉睫毛外其它部位毛发的产品滋养功效可参考引用。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。国家药监局关于发布《化妆品功效宣称评价规范》的公告（2021年第50号）国家药监局关于发布《化妆品分类规则和分类目录》的公告（2021年第49号）T/GDCA025-2023发用产品头发滋养功效测评方法T/GDCA017-2022发用产品护发功效测评方法T/CAFFCI68-2023化妆品滋养功效测试方法3基本原则3.1被测化妆品应为理化和卫生检验合格的产品，人体试验之前应先按照《化妆品卫生规范》完成必要的安全性评价并出具书面证明，安全性评价不合格的样品不再进行人体检验。3.2人体试验应符合国际赫尔辛基宣言的基本原则，要求受试者签署知情同意书并采取必要的医学防护措施，最大程度地保护受试者的利益。4术语和定义4.1滋养nourishing有助于为施用部位提供滋养作用。注：定义来源为国家药监局关于发布《化妆品分类规则和分类目录》的公告（2021年第49号）。4.2毛发滋养hairnourishing有助于为毛发提供滋养作用，促进毛发光泽度、顺滑度、韧性等提升。第一法眉/睫毛毛发成分分析法5原理毛发中十八甲基二十碳烯酸（简称18-MEA）和神经酰胺的含量对毛发的物理性能起着主要的作用，影响着毛发的光泽度、色泽、光滑度和柔软度等各方面的特性，因此，可通过检测产品使用前后眉/睫毛毛发中18-MEA、神经酰胺含量的变化来评价眉/睫毛产品滋养功效。6试验条件和志愿者要求6.1试验环境条件测试环境温度：20℃～25℃，并对温度实施必要的监测。6.2志愿者要求6.2.1受试者人数按人选和排除标准选择合格的受试者入组，并应根据实际情况考虑可能脱落的人数比例，确保最终完成有效人数不少于30人。6.2.2受试者纳入标准1）年龄介于18-60岁，身体健康人群；2）眉/睫部左右两侧毛发外观无明显差异者；3）能理解测试过程，自愿参加试验并签署知情同意书者；4）能够按照要求使用产品者。6.2.3受试者排除标准1）怀孕或哺乳期妇女，或近期有备孕计划者；2）严重系统疾病、免疫缺陷或自身免疫性疾病者；3）受试部位近3个月没有接受过皮肤治疗、纹眉等医美及其他可能影响结果的测试；4）有银屑病、湿疹、异位性皮炎等现患皮肤病者；5）近1个月内口服或外用过皮质类固醇激素等抗炎药物者；6）受试部位正参加其他临床试验者。6.2.4受试者限制1）在试验期间受试部位应使用实验室提供的试验产品，该试验产品替换原自用的同类型产品，且受试部位不可使用其他具有同类功效的产品，试验期间应保持日常生活、作息、饮食等习惯不变；2）测试当天早上，受试部位不使用产品。7试剂和材料7.1真人毛发（眉毛或睫毛）7.2二氯乙烷（分析纯AR）7.3乙醇（分析纯AR）7.4十二烷基硫酸钠（分析纯AR）7.5烧杯7.6橡胶手套7.7镊子7.8剪刀7.9修眉刀8仪器8.1高效液相色谱仪：可测定毛发中神经酰胺含量的设备8.2飞行时间二次离子质谱仪：可测定毛发中18-MEA含量的设备8.3索氏提取器8.4恒温水浴锅8.5电子分析天平（精确十万分之一）8.6恒温恒湿空调或恒温恒湿箱8.7布氏漏斗8.8旋转蒸发仪9测试步骤9.1神经酰胺含量测定9.1.1由工作人员用酒精棉片或水润湿的一次性擦脸巾擦拭受试部位，随后采用镊子和修眉刀/剪刀，获取并称量单个受试者眉/睫毛发0.1~0.5g样本。9.1.2将毛发样本浸泡在0.5%的十二烷基硫酸钠溶液中，将其一同置于已恒温至（40.0±1.0）℃的水浴锅中水浴30min，用布氏漏斗过滤并用清水冲洗至少3次。9.1.3将毛发置于索氏提取器中，用体积比为2:1的二氯乙烷和乙醇在70℃下萃取2h，随后在相同条件下进行第二次萃取，将得到的萃取液合并后进行过滤操作，真空旋干后得到毛发粗提物。9.1.4用高效液相色谱仪测定毛发粗提物中神经酰胺的含量。采用C18色谱柱，流动相为甲醇和异丙醇的混合溶液（体积比为55：45），紫外检测波长为205nm，柱温为30℃，检测池温度为40℃。对毛发粗提物进行神经酰胺定量检测，作为产品使用前神经酰胺初始值（A用样前）。9.1.5让受试者按要求单次或连续使用待测产品，并设置不同的访视点，可为2周、4周等，具体间隔依据产品特性或实验需求定，试验周期以不低于2周为宜。9.1.6在特定的访视点，按9.1.1~9.1.4操作进行再次取样分析，记为产品使用后测量值（A用样后）。两次毛发样本的重量需保持一致，重量偏差小于±0.00005g。9.2十八甲基二十碳烯酸含量测定9.2.1按9.1.1~9.1.3进行操作，采用飞行时间二次离子质谱仪测定十八甲基二十碳烯酸18-MEA的含量。采集面积：50μm×50μm，采集时间：3min，次级离子种类：正离子和负离子。对毛发粗提物进行18-MEA定量检测，记为产品使用前初始值（B用样前）。9.2.2让受试者按要求单次或连续使用待测产品，并设置不同的访视点，可为2周、4周等，具体间隔依据产品特性或实验需求定，试验周期以不低于2周为宜。9.2.3在特定的访视点，按9.2.1操作进行再次取样分析，记为产品使用后测量值（B用样后）。两次毛发样本的重量需保持一致，重量偏差小于±0.00005g。第二法真人发束替代法10原理人体毛发的主要成分为角蛋白（约占80%以上），它是由毛干和毛囊两部分组成，毛干可分为毛小皮、皮质和髓质三层。眉毛、睫毛、头发、腋毛等人体毛发结构和组成几乎一样，故可用真人头发替代眉毛、睫毛等毛发进行测试。本方法通过产品使用前后对比，或样品组与空白组对比，测量发束的梳理性、光泽度、摩擦力以及蓬松度参数变化，来评价试验产品滋养效果。11试验条件11.1测试环境温、湿度要求：环境温度为（21±2）℃、相对湿度为（50±10）%，并并对温湿度实施必要的监测。11.2试验过程中的测试条件应保持一致，如测试人员、场所、环境、仪器设备及其参数设置等。12试剂耗材12.1发束：试验产品的测试应使用同一批次、相同规格的发束，且发束之间应无明显差异。发束规格：亚洲真人发束，扁平直发，发束长度不少于20cm、宽度不小于2cm，受损发质（经染烫处理或人为损伤处理）更优。注：可借助头发测试仪对发束进行差异性筛选，例如，采用多功能头发测试仪Instron或相当者，对购入的批量发束进行梳理性能筛选，筛选出梳理力/功相近的发束作为本次试验入组发束。12.2梳子：防静电梳子，齿间距不大于1.1mm，梳齿长度大于2cm，梳子长度不少于10cm（不含梳子把柄）。12.3发束清洗液：10%十二烷基硫酸钠水溶液（质量分数）13仪器设备13.1蓬松度测试仪（主要参数）：具有测量发束蓬松度的仪器，例如SHUFFLE或相当者。13.2摩擦性测试仪（主要参数）：具有测量发束摩擦力/功的仪器，例如DIA-STRON、Instron、质构仪（SMS）或相当者。13.3光泽度测试仪（主要参数）：具有测量发束光泽度的仪器，例如SAMBAHAIR头发光泽度测试仪或相当者。13.4头发梳理仪（次要参数）：具有测量发束梳理力/功的仪器，例如DIA-STRON、Instron、MTT175、质构仪（SMS）或相当者。13.5拉断测试仪（次要参数）：具有测量发束拉断力/功的仪器，例如DIA-STRON、Instron、MTT175、质构仪（SMS）或相当者。13.6头发直径测试仪：具有测量头发直径大小（粗细）的仪器，例如螺旋测微器（又称千分尺），精度0.01mm。14测试步骤14.1试验前，取同等用量的10%十二烷基硫酸钠水溶液（SLS）水溶液将发束清洗干净。若为湿梳理性测试，清洗后可直接使用；若为其他参数测试，则清洗后捋去多余水分，并将其悬挂于试验环境中晾干。14.2自身前后对比试验，每个试验产品需测量（5±1）个发束；组间对比试验，每组需测量（5±1）个发束，每个发束平行测试5次，取其平均值。6个发束剔除偏离最大的发束，保留5个有效发束数据。14.3梳理性测试14.3.1将发束浸于清水中拿出，用梳子将湿发束由发尾至发根轻轻梳理，正反面各梳理2次，避免发丝缠结。用食指与中指并紧夹住发束，捋去多余水分直至无法捋出水滴。测量产品使用前发束湿梳理力/功，记为湿发梳理性初始值。14.3.2将发束悬挂于试验环境条件中晾干（8h~24h），用梳子将干发束由发尾至发根轻轻梳理，正反面各梳理2次，避免发丝缠结。测量产品使用前发束干梳理力/功，记为干发梳理性初始值。14.4蓬松度/摩擦性/光泽度测试按14.2要求测量产品使用前发束蓬松度/摩擦性/光泽度，记为蓬松度/摩擦性/光泽度初始值。14.5拉断测试发束宽度要求不做限制，每个发束剪取5根头发，确保头发直径偏差不高于1%，测量产品使用前头发拉断力，记为拉断力初始值。14.6将试验产品按产品使用说明（淋洗型或驻留型）施用于发束上，单次或连续使用，设置不同的访视点，可为单次、3天、7天、4周等，具体间隔依据产品特性或实验需求定。14.7在设置的访视点按照14.3~14.5步骤进行再次测量，记为产品使用后测量值。14.8试验结束后，取同等用量的10%十二烷基硫酸钠水溶液将发束清洗干净，将发束悬挂于试验环境条件中晾干。15数据分析应用统计分析软件进行数据的统计分析。计量资料表示为：均值±标准差，并进行正态分布检验，符合正态分布要求，自身前后的比较采用配对t检验，否则采用2个相关样本秩和检验；试验组（侧）和对照组（侧）之间比较采用独立样本t检验（配对t检验）或秩和检验。所有统计分析均为双尾检验，显著性水平为α=0.05。16结果判定16.1第一法：与产品使用前相比，产品使用后任一访视点神经酰胺或18-MEA有显著性升高（P＜0.05）；或产品使用前后，产品组（侧）任一访视点神经酰胺或18-MEA变化值显著性优于（P＜0.05）对照组（侧），即可认为试验产品具有滋养功效。16.2第二法：与产品使用前相比，产品使用后任一访视点至少2个主要参数有显著性改善（P＜0.05），或任一主要参数和至少2个次要参数有显著性改善（P＜0.05）；或产品使用前后，产品组（侧）任一访视点至少2个主要参数变化值显著性优于（P＜0.05）对照组（侧），或任一主要参数和至少2个次要参数变化值显著性优于（P＜0.05）对照组（侧），即可认为试验产品具有滋养功效。

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