液体检测进展

肺癌基因检测新进展目录驱动基因检测对肺癌个体化治疗的指导液体活检基础上的基因分型在肺癌诊治中的应用基于基因分型和基因组学特点的个体化医疗：

癌症分子诊断领域的变革单个生物标记物检测：SangerDNA测序or

PyrosequencingRT-PCRFISHIHC多个热点突变检测：PCR-basedSNapShotPCR-basedMassArraySNPSequenom

高通量技术:

SNP/CNVDNA芯片RNA芯片表型基因调节下一代基因测序：全基因组或外显子组测序（DNA）全基因组或靶向转录测序（RNA）显型测序LiTH,etal.JClinOncol2013.“从单基因到多基因”的动态检测变革能更充分地利用有限的肿瘤标本获得更多的信息指导个体化治疗——能更充分地利用有限的肿瘤标本获得更多的信息指导个体化治疗腺癌鳞癌TheCancer

GenomeAtlas

Research

Network,

Nature,

2012,2014.腺癌的全基因组分析TheCancerGenomeAtlasResearchNetwork，Nature.

2012Sep27;489(7417):519-25.PabloPMetal,ClinCancerRes.2012

;18(9):2443-51.CirielloGetal,NatGenet.2013;45(10):1127-1133.

晚期NSCLC鳞癌的驱动基因肺癌治疗从基于临床、病理特点到基因分型的治疗变革PresentedByEnriquetaFelipat2015ELCC越来越多的已知驱动基因进入临床应用LCMC2.0KRAS AKT1EGFR ALK(FISH)BRAF MET(FISH)HER2

RET(FISHorNGS)PI3K

ROS1(FISHorNGS)MEK

PTEN(IHC*orNGS)NRAS

MET(IHC**)KrisMG,etal.WCLC2013PL03.07.*细胞信号传导138G4;**VentanaSP44.基于EGFR外的驱动基因个体化治疗显示良好的治疗疗效新的驱动基因仍在不断被发现、认识和深入研究Fernandez-CuestaL,etal.WCLC2013,O04.01.WCLCO04.01：CD74-NRG1，肺腺癌一种新的致癌融合基因在24例肺腺癌中的一种粘液性肿瘤中发现了一种新的易位，即CD74-NRG1(Nerurogelin1)这种融合基因还见于4/15(27%)的其他粘液性肺部肿瘤(与KRAS突变相互排斥)这种融合基因与ERBB3磷酸化相关，进而激活PI3K-AKT通路(H2052)，显示出致癌特征(NIH-3T3)ElzaC.deBruin,etal.Science2014;346:251-258NSCLC在空间和时间上基因的不稳定性决定肿瘤异质性和肿瘤耐药模式的复杂性，实时动态地进行多基因平行检测，有助于实现精准治疗Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.2013肿瘤异质性使根据初诊时标本指导后续治疗可能产生偏倚实时监测耐药的不同机制对指导后续治疗的重要性。多基因平行检测基础上的靶向治疗研究模式ClinCancerRes2015;21:1514–24.目录驱动基因检测对肺癌个体化治疗的指导液体活检基础上的基因分型在肺癌诊治中的应用精准治疗时代肺癌组织诊治的困境与挑战肿瘤组织的异质性？对耐药的有效检测？怎样实现实时、定量、多基因的平行检测？血液检测应运而生Crowley,E.etal.Nat.Rev.Clin.Oncol.2013,10:472–484SourceofcfDNA--tumornecrosis/apoptosis--tumorexosome/microvesicles--normaltissueapoptosis--inflammatorycellscfDNA的特点与优势

Real-timemonitoringRepresentingsummationofspatialheterogeneitycf-DNAEGFR敏感性突变检测的临床应用-

具有高的特异性和疗效预测的准确性OSBai,etal.J.Clin.Oncol:2009MokT,etal.2015CCR，

敏感性为82%;特异性为92%，血浆、组织检测的一致性78%敏感性为76%；特异性为96%，组织、血浆检测一致性88%EGFR突变+(血浆)EGFR突变-(血浆)总数EGFR突变+(组织)692190EGFR突变-(组织)5129134总数74150224

TumorCasenumberEGFR+EGFR-plasmaEGFR+631679EGFR-14137151Casenumber77153230*一致性敏感性特异性PPVNPVn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CI亚太(n=1687)1310/1687(77.7)75.6,

79.6343/692(49.6)45.8,

53.4967/995(97.2)96.0,

98.1343/371(92.5)89.3,

94.9967/1316(73.5)71.0,

75.8俄罗斯(n=894)767/894(85.8)83.3,

88.033/109(30.3)21.8,

39.8734/785(93.5)91.5,

95.133/84(39.3)28.8,

50.5734/810(90.6)88.4,

92.5IGNITstudyHanBaohui,etal.2015

ELCC

96O.MokT,etal.2013WCLCO01.06.cf-DNAEGFR敏感检测的临床应用-动态监测FASTACT-2:在基线期、第3周期（C3）以及疾病进展时（PD）进行连续血浆样本分析，监测血浆游离DNA和pEGFR突变DNA的动态定量变化血浆游离DNA以及EGFR突变特异性DNA在C3降低，并在治疗进展时恢复ORAL16.06:QuantificationofMutantAllelesinctDNA–Tongtong

AnMedian

PFSMedian

OSPlasma

EGFR

WT6.7m23.8mPlasma

EGFR

MT

Low11.1m29.3mPlasma

EGFR

MT

High15.4m44.5mcf-DNAEGFR敏感检测的临床应用-定量检测YangX,etal.Oncotarget，2015,accepted对耐药性突变的预测：TIGER-X研究

Rociletinib(所有剂量)治疗血浆T790M+患者的最佳疗效100806040200-20-40-60-80-100500mgbidHBr625mgbidHBr750mgbidHBr1000mgbidHbr正在进行之中长径总和自基线的变化(%)SequistLV,etal.2015ASCO;oralabstract8001.500mg625mg750mg1000mg总计N3049653147ORR(%)5755496753DCR(%080848210082组织全部阳性阴性组织不足血浆阳性1552312190阴性3712857全部1923520247当收集到不充分组织标本时，血浆检测可发现和组织检测同样多的T790M+患者T790组织阴性血浆阳性并非假阳性：后续检测的7个样本中，5个样本确认了血浆T790M组织参考：T790m活化突变阳性一致比例81%(155/192)87%(193/221)Gefitinib(n=81)Placebo(n=61)T790Mmutation-positive(n=142)MedianPFS,months4.65.3HRa(95%CI)=0.97(0.67,1.42);p=0.88IMPRESS研究:cfDNA中T790M突变阳性患者的无病进展生存时间T790MctDNAstatusassessedatbaselineCI,confidenceinterval;ctDNA,circulatingfreetumor-derivedDNA;HR,hazardratio;PFS,progression-freesurvivalPatientsatrisk:

Gefitinib 81 64 50 19 8 4 2 0

Placebo 61 46 40 18 8 1 1 01.00.90.80.70.60.50.40.20.30.10.00281014ProbabilityofPFSTimeofrandomization(months)Gefitinib(n=81)Placebo(n=61)4612aPrimaryCoxanalysiswithcovariatesAHR<1impliesalowerriskofprogressionwithgefitinibT790M突变阳性患者化疗有更好效价比Gefitinib(n=46)Placebo(n=59)T790Mmutation-negative(n=105)MedianPFS,months6.75.4HRa(95%CI)=0.67(0.43,1.03);p=0.07IMPRESSStudy:cfDNA中T790M阴性患者的无病进展生存时间T790MctDNAstatusassessedatbaselineCI,confidenceinterval;ctDNA,circulatingfreetumor-derivedDNA;HR,hazardratio;PFS,progression-freesurvivalPatientsatrisk:

Gefitinib 46 43 37 20 16 7 4 0

Placebo 59 46 38 17 7 4 3 0aPrimaryCoxanalysiswithcovariatesAHR<1impliesalowerriskofprogressionwithgefitinib1.00.90.80.70.60.50.40.20.30.10.00281014ProbabilityofPFSTimeofrandomization(months)4612Gefitinib(n=46)Placebo(n=59)T790M突变阴性患者继续TKIs联合化疗有延长PFS的趋势Gefitinib说明书更新(ctDNA伴随诊断）中国Gefitinib说明书更新(2015年2月13日cFDA已批准更新)欧洲说明书更新(2014年9月)第4页筛选入组：1.IV期肺腺癌；2.年龄18-75；3.PS0-2；4.血浆cf-DNA中EGFR经ddPCR确定为突变型；5.提供组织标本；6.有可测量病灶。收集血浆cf-DNA*（ddPCR法）收集组织标本*（ARMS法）

EGFRM+

EGFR突变检测吉非替尼

250mg/天每2个月收集外周血标本直至PD*PD血浆cf-DNA基因检测（ARMS法）回顾性前瞻性收集血浆标本*，及组织标本***为必须性，**为可选择性一项评价吉非替尼在血浆游离DNA经ddRCR确定的EGFR突变型晚期肺腺癌患者中作为一线治疗的疗效及安全性的开放、单臂、多中心临床试验（BENEFITStudy)）N=178

T790MpositiveinctDNAEGFRsensitivmutationwithrareT790MclonesinctDNAClinicalprogression

ThirdgenerationTKIsPresentstrategypreventstrategyEGFR-TKIsEGFR-TKIsThirdgenerationTKIsThirdgenerationTKIs

preventstrategyEGFR-TKIsBloodmonitorBloodmonitorBloodmonitorBloodmonitorThirdgenerationTKIs

ThirdgenerationTKIs

展望一:cfDNA动态检测有助于对耐药的应对从治疗到预防的转变Naturemedicine

AcquiredEGFRC797Smutationmediatesresista