DB2301T 212-2024越桔组织培养技术规程

ICS65.020.20CCSB612301IDB2301/T212—2024前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4外植体的采集与消毒 4.1外植体采集 4.2外植体的消毒 5培养基制备 5.1培养基配比 5.2培养基灭菌 5.3培养基保存 6培养程序 6.1初代培养 6.2继代培养 6.3生根培养 7炼苗与移栽 7.1炼苗 7.2移栽 9生产档案 DB2301/T212—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由哈尔滨市农业农村局提出并归口。本文件起草单位：黑龙江省农业科学院乡村振兴科技研究所、中国科学院东北地理与农业生态研究所、哈尔滨市农业技术推广总站、黑龙江省林业科学院、双鸭山市宝清县龙头镇农业乡村振兴服务发展中心、双鸭山市宝清县朝阳镇农业乡村振兴服务发展中心、伊春市农业综合服务中心。本文件主要起草人：赵文博、段亚东、孙嫒丽、李靖彤、张鹍、宋鹏慧、周春薇、周双、毛俊莹、刘争、侯帅、温智钧、梁海婷、许志伟、肖珩、吕德宝、郝淑荣、张甜甜。1DB2301/T212—2024越桔组织培养技术规程本文件规定了越桔（Vacciniumvitis-idaeaL.）组织培养育苗技术的外植体的采集与消毒、培养基制备、培养程序、炼苗与移栽、出圃和生产档案等。本文件适用于越桔的组织培养育苗。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程NY/T1276农药安全使用规范总则3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4外植体的采集与消毒4.1外植体采集4月～7月份的晴天剪取叶片表面无露水、生长健壮且无病虫害的当年生嫩枝，去掉叶片并留1mm~2mm叶柄作为外植体。4.2外植体的消毒4.2.1将剪成带1个芽的外植体茎段用流水冲洗10min～20min。4.2.2用75%酒精对双手及手腕消毒，将外植体置于已灭菌的烧杯中，先用75%酒精浸泡30s，无菌水清洗3次，每次30s。4.2.3再用10%次氯酸钠溶液灭菌10min，无菌水清洗3次，每次30s。4.2.4用无菌滤纸吸干外植体表面的水分备用。4.2.5药剂应符合GB/T8321和NY/T1276的规定。5培养基制备5.1培养基配比5.1.1基础培养基基础培养基为WPM，基础培养基配制方法按LY/T1882中4.2.1规定执行。2DB2301/T212—20245.1.2初代培养基初代培养基按WPM1L+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋琼脂7g进行配置，pH值5.2～5.4。5.1.3继代培养基继代培养基按WPM1L+IBA0.1mg～0.2mg+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋琼脂7g进行配置，pH值5.2～5.4。5.1.4生根培养基生根培养基按WPM1L+IBA3.0mg～4.0mg＋NAA0.4mg+蔗糖60g＋琼脂14g进行配置，pH值5.2～5.4。5.2培养基灭菌培养基在压力0.105MPa、温度121℃的条件下灭菌20min。灭菌物应不超过灭菌锅容积的3/4。5.3培养基保存灭菌后的培养基放入接种室，应避免阳光直射，在18℃~22℃条件下存放不宜超过7d。6培养程序6.1初代培养6.1.1接种在超净工作台上将已消毒的外植体茎段垂直插入初代培养基，每个培养瓶接种3个～5个茎段，均匀分布，接种后将培养瓶瓶口在酒精灯火焰上灼烧1s～2s，迅速盖好瓶盖，放入培养室培养。6.1.2培养条件白天25℃±2℃,夜间不低于15℃。黑暗培养7d后，转入光照培养。相对空气湿度70%～80%，光照强度为2000Lux～3000Lux，光照时间为12h/d～16h/d。待嫩芽长出后，进行继代培养。6.2继代培养6.2.1接种将初代培养后长出的嫩茎剪成1cm左右的茎段，插入新鲜的增殖培养基中进行继代培养。6.2.2培养条件白天25℃±2℃,夜间不低于15℃。相对空气湿度70%～80%，光照强度为2000Lux～3000Lux，光照时间为12h/d～16h/d。6.3生根培养6.3.1接种选取由继代培养获得的生长健壮、高度大于2cm的无菌不定芽接入生根培养基上进行生根培养。6.3.2培养条件3DB2301/T212—2024继续按6.2.2的要求培养。待生根后2周～3周，选取根长1.5cm～2.5cm、须根不少于3条的瓶苗，将其放置温室进行炼苗。7炼苗与移栽7.1炼苗先将培养瓶置于温度在20℃~30℃的温室进行闭瓶炼苗3d，再打开培养瓶盖炼苗2d，炼苗期间避免强光直射和高温灼伤瓶苗。7.2移栽7.2.1基质配置以草炭土、蛭石配比为1:1混合作为移栽基质，可加入多菌灵消毒基质，备用。药剂应符合GB/T8321和NY/T1276的规定。7.2.2移栽方法7.2.2.1将组培苗从瓶中取出，用流水冲洗掉粘附于根部的培养基，将瓶苗移入准备好的穴盘或营养钵中，扶正，使根系尽量舒展，用基质将根埋好并压紧。7.2.2.2移栽后，在遮荫且通风条件下栽培，每天向叶面喷水，