人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析_第1页
人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析_第2页
人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析_第3页
人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析_第4页
人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析_第5页
已阅读5页，还剩10页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析

医学遗传教研室2016.11实验目的熟悉人类有核细胞（k562）染色体标本的制备方法。熟悉染色体核分裂相的初步分析。实验原理染色体:见于细胞有丝分裂过程中,通常利用有核细胞（如外周血、细胞系、羊水、绒毛）制备染色体标本，显微镜下观察。通常情况下，少量外周血(0.5ml)做短期培养，至72h细胞进入增殖旺盛期，或者细胞系增殖至旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使其停止在中期以获得足够的分裂期细胞。实验过程细胞培养、收集、低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。以外周血为例，实验流程如上终止培养前2-4小时，加入秋水仙素↓收集培养物至离心管，离心（配平，1200rpm,6min）↓用吸管弃上清，加8ml0.075mol/LKCl，吹打混匀↓37℃，低渗20min↓加1ml固定液预固定，小心吹打，混匀↓1200rpm离心6-8min（注意配平）↓弃上清，加8ml固定液，室温固定20-30min↓1200rpm离心6-8min↓实验步骤↓留少量固定液制成细胞悬液(沉淀高度的1-2倍)↓滴片（1-2滴至凉玻片），干燥↓吉姆萨染液染5min↓冲洗玻片（背面）↓风筒吹干↓镜下观察终止培养、收集、低渗、固定滴片，吹干染色，去浮色如何使用显微镜首先，肉眼观察玻片上染料的痕迹;然后，10倍镜下聚焦，微移载物台，将理想的核分裂相调至视野中央；物镜切换为40倍,再次微调至视野清晰，并选择理想的核分裂相调整至视野中央；挪开镜头，滴1滴镜油；物镜切换为100倍,微调至清晰图像,观察记录分析；使用后，关掉电源，用擦镜纸沾二甲苯脱镜油。K562核分裂像细胞染色体数目变异范围为44～71,干系核型为亚三倍体,染色体众数为62±2外周血核分裂相46，XX【标本质量不佳的原因】①秋水仙素处理不当：浓度不够或处理时间不足，结果分裂相太少；浓度过高或处理时间过长，染色体过于缩短难于分析；②低渗处理不当：时间过长，细胞膜往往过早破裂，染色体丢失；低渗处理不够，则染色体分散不佳，难以计数分析；③离心速度不合适：收集细胞时离心速度太低易丢失细胞；低渗后离心速度过高，使分裂相过早破裂，完整分裂相减少；④标本固定不充分：如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质量不佳，则染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；⑤玻片去污不彻底，冷冻不够，使细胞悬液不能均匀附着以致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。思考题核型制备的常

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论