DB11-T 1397-2017 鱼类口服抗菌药物选用技术规程

ICS65.150

B50

备案号:54176-2017DB11

北京市地方标准

DB11/T1397—2017

鱼类口服抗菌药物选用技术规程

Thetechnicalprotocolofscreeningoralantibacterialsforfish

2017-03-22发布2017-07-01实施

北京市质量技术监督局发布

DB11/T1397—2017

鱼类口服抗菌药物选用技术规程

1范围

本标准规定了鱼类口服抗菌药物选用原则、程序和操作流程。

本标准适用于养殖鱼类细菌感染判断和治疗时口服抗菌药物选用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27623.1—2011渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验

SC/T7014—2006水生动物检疫实验技术规范

SC/T7201.1—2006鱼类细菌病检疫技术规程第1部分：通用技术

3药物选用原则和程序

3.1原则

抗菌药物使用应遵循以下原则：

——药物种类应符合国家有关标准，药品应获得国家批准文号；

——选择GMP认证企业生产的抗菌药物；

——使用的优先顺序是磺胺类＞四环素类＞氨基糖苷类＞氟喹诺酮类＞酰胺醇类。

3.2程序

鱼类口服抗菌药物的选用程序参见附录A。

4操作流程

4.1病鱼采集

病鱼采集按SC/T7014—2006第6章的规定进行。

4.2病原菌的分离

病原菌的分离参见附录B。附录B中的BHIA的培养基配方参见C.1。

4.3细菌感染判断

任何一个划线分离平板，线上有菌落或菌带，则该样品来源养殖池塘的鱼类宜用口服抗菌药物；反

之，则不必使用。

1

DB11/T1397—2017

4.4敏感药物筛选

采取纸片扩散法（参见D.3）筛选敏感药物种类。依检测结果选择敏感药物种类，原则如下：

——一个样品仅获得一株病原菌，选择该菌的敏感药物种类；

——一个样品获得多株病原菌，选择共同的敏感药物种类；

——一个样品获得多株病原菌，且无共同的敏感药物种类，选择内脏器官分离菌的敏感药物种类，

优先选取肝、肾分离菌的敏感药物种类。

4.5用药剂量确定

4.5.1检测病原菌的最小抑菌浓度（MinimumInhibitoryConcentration，MIC）

采用浓度梯度稀释法（参见D.4）检测其对样品所有病原菌的MIC值。

4.5.2计算样品每千克鱼的日用药剂量

按4.5.1检测样品所有病原菌的MIC值，同种药物选取最大的MIC值。每种敏感药物按公式（1）计算

样品每千克鱼的日用药剂量，每千克鱼的日用药剂量不超过国家兽药规定的使用许可值。

U=MIC↔Sρ.....................................(1)

式中：

U——每千克鱼的日药物使用剂量（指有效成分剂量），单位为毫克每千克（mg/kg）；

MIC——抗菌药物对病原菌的MIC值，单位为毫克每升（mg/L）；

S——系数，鲤科鱼类为8.1，冷水鱼类为9.4，养殖者可依经验微调该系数；

ρ——水的密度，数值约为1，单位为千克每升（kg/L）。

4.5.3计算样品池塘的日药物总使用剂量

每种敏感药物按公式（2）计算样品池塘的日总用药剂量。

M=U↔T1000....................................(2)

式中：

M——样品池塘的日药物总使用剂量（指有效成分剂量），单位为克（g）；

U——每千克鱼的日药物使用剂量（指有效成分剂量），单位为毫克每千克（mg/kg）；

T——样品池塘养殖鱼类的总重量，单位为千克（kg）。

4.6使用方法

将样品鱼来源池塘的饵料日投喂量减少一半。将4.5.3确定的日药物总使用剂量溶解拌入饵料中，

充分混匀，一次性投喂使用。

4.7用药效果评价

用药后，按以下原则判断用药效果：

——如用药后3d～5d，日死亡数量明显下降或疾病的症状改善甚至消失，则认定药物治疗有效；

——如用药后3d～5d，鱼的日死亡数量保持治疗前的水平或者超过治疗前的水平，则认定药物

治疗无效。

2

DB11/T1397—2017

AA

附录A

（资料性附录）

鱼类口服抗菌药物选用程序

发病池病鱼采集病原菌的分离

治

疗平板线上是否有

及菌落或菌带

否

用

药是

病鱼不用抗菌药物

效

果

敏感药物筛选

评

价

使用方法用药剂量确定

图A.1鱼类口服抗菌药物选用程序示意

3

DB11/T1397—2017

BB

附录B

（资料性附录）

病原菌的分离

B.1设备和材料

B.1.1普通天平：0g～210g，精确至0.01g。

B.1.2高压灭菌锅。

B.1.3微波炉。

B.1.4生物安全柜或超净工作台。

B.1.5生物显微镜：×10，×40，×100。

B.1.6培养皿：直径90mm。

B.1.7酒精灯、解剖盘、解剖刀、剪子、镊子、接种环（针）、三角烧瓶（500mL）等。

B.1.8试剂和培养基

B.1.9水：GB/T6682，二级。

B.1.10脑心浸液琼脂（BrainHeartInfusionAgar,BHIA）：参见C.1。

B.2取样部位

病灶、肝、肾、脾、性腺、脑。

B.3病原菌分离

B.3.1冷水鱼病原菌分离

用接种环从取样部位蘸取病料，无菌操作划线接种于BHIA平板，22℃±2℃培养24h～48h，无

菌生长时继续培养至5d。

B.3.2温水鱼病原菌分离

用接种环从取样部位蘸取病料，无菌操作划线接种于BHIA平板，28℃±2℃培养24h～48h，无

菌生长时继续培养至5d。

4

DB11/T1397—2017

CC

附录C

（资料性附录）

培养基的配制方法

C.1脑心浸液琼脂（BHIA）

C.1.1成分

牛脑浸粉12.5g

牛心浸粉5.0g

蛋白胨10.0g

葡萄糖2.0g

氯化钠5.0g

磷酸氢二钠2.5g

琼脂10g

蒸馏水1000mL

C.1.2制法

将C.1.1中各成分混匀，加热溶解，调pH至7.4±0.1，121℃高压灭菌20min，冷至50℃左右，

倾制平板。

C.2水解酪蛋白琼脂（MHA）

C.2.1成分

牛肉浸膏6.0g

酸水解酪蛋白胨17.5g

可溶性淀粉1.5g

琼脂17.0g

蒸馏水1000mL

C.2.2制法

将C.2.1中各成分混匀，加热溶解，调pH至7.3±0.1，121℃高压灭菌15min，冷至50℃左右，倾

制平板。平板中的培养基厚度4mm。

C.3水解酪蛋白肉汤（MHB）

C.3.1成分

牛肉浸膏6.0g

酸水解酪蛋白胨17.5g

可溶性淀粉1.5g

5

DB11/T1397—2017

蒸馏水1000mL

C.3.2制法

将C.3.1中各成分混匀，加热溶解，调pH至7.3±0.1，121℃高压灭菌15min。如检测链球菌，临

用前加无菌血清0.5%。

6

DB11/T1397—2017

DD

附录D

（资料性附录）

病原菌的药物敏感性检测

D.1设备和材料

D.1.1恒温培养箱：0℃～60℃。

D.1.2精密天平：精确至0.0001g。

D.1.3高压灭菌锅。

D.1.4比浊仪。

D.1.5生物安全柜或超净工作台。

D.1.6生物显微镜：×10，×40，×100。

D.1.7微量移液器：100μL～1000μL，10μL～100μL。

D.1.8多通道移液器：50μL～300μL。

D.1.9培养皿：直径90mm。

D.1.10试管、试管架：15mm×150mm，15mm×100mm。

D.1.11微孔板（≥500μL/孔）。

D.1.12一次性针头过滤器（≤0.22μm）、注射器（5mL）。

D.2试剂和培养基

D.2.1水：GB/T6682，二级。

D.2.20.45%氯化钠缓冲液。

D.2.3二甲基甲酰胺：分析纯。

D.2.4氢氧化钠：分析纯。

D.2.575%酒精。

D.2.6药敏纸片。-20℃保存，药物种类及其溶解试剂见表D.1。药敏纸片可从可靠的供应商采购或自

行制备。

D.2.7抗菌药物标准品。抗菌药物种类参见表D.1，标准品由兽药管理部门指定单位提供。

D.2.8水解酪蛋白琼脂（Mueller-HintonAgar,MHA）：参见C.2。

D.2.9水解酪蛋白肉汤（Mueller-HintonBroth,MHB）：参见C.3。

D.3纸片扩散法

D.3.1制备菌悬液

从培养16h～24h的BHIA斜面上挑取纯培养菌，用0.45%氯化钠缓冲液配制成1.0×108CFU/mL～2.0

×108CFU/mL的菌悬液。

D.3.2接种平板

制好的菌悬液应在15min内使用。用微量移液器取100μL到MHA平板上，灭菌玻璃涂布棒涂匀。

7

DB11/T1397—2017

D.3.3贴药敏纸片

用灭菌的镊子取药敏纸片贴到D.3.2接种好的MHA平板上，镊子轻按药敏纸片，使药敏纸片与培养基

紧密相贴。每个培养皿均匀贴四片，标记药物名称、菌株名称和培养时间等。于28℃±2℃(杀鲑气单

胞菌为22℃±2℃)孵育15min。

D.3.4测抑菌圈直径

将D.3.3孵育后的平板倒置于28℃±2℃(杀鲑气单胞菌为22℃±2℃)生化培养箱中，培养24h

±2h后，观察结果。用游标卡尺或直尺测量抑菌圈直径（mm）。

D.3.5结果解释

按照表D.1的标准对抑菌圈大小作出解释，判断病原菌对抗菌药物敏感或耐药。

表D.1鱼类病原菌的抑菌圈直径解释标准和相对应的最低抑菌浓度值（MIC）

药敏片含量MIC（mg/L）抑菌圈直径（mm）

药物种类药名配制母液的溶剂

（μg/片）敏感耐药耐药敏感

磺胺类药物磺胺甲噁唑1mol/LNaOH300≤100≥350≤14≥17

磺胺类药物磺胺嘧啶1mol/LNaOH300≤100≥350≤14≥17

磺胺类药物磺胺二甲嘧啶1mol/LNaOH300≤100≥350≤14≥17

磺胺类药物磺胺间甲氧嘧啶1mol/LNaOH300≤100≥350≤13≥17

四环素类盐酸多西环素蒸馏水30≤4≥16≤13≥16

氨基糖苷类硫酸新霉素蒸馏水10≤4≥16≤12≥16

酰胺醇类氟苯尼考0.1mol/L二甲基甲酰胺30≤4≥16≤13≥18

酰胺醇类甲砜霉素0.1mol/L二甲基甲酰胺30≤4≥16