尿中硫氰酸盐的吡啶巴比妥分光光度法_第1页
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文档简介

尿中硫氰酸盐的吡啶巴比妥分光光度法1.原理微酸性条件下，尿中硫氰酸盐和氯胺T反应生成氯化氰。它使吡啶环裂开，产生戊烯二醛。戊烯二醛于巴比妥酸作用，生成紫红色染料，其色度与硫氰酸盐含量成正比，在580nm波长处比色定量。2.仪器2.1聚盖聚乙烯塑料瓶，500ml。2.2尿比重计。2.3具塞比色管，10ml。2.4分光光度计。3.试剂实验用水为蒸馏水。3.1盐酸溶液，1+3。3.2磷酸盐缓冲液（pH=7）：溶解2.79g磷酸二氢钾和4.14g磷酸氢二钠于少量水中，并稀释至1L。3.3氯胺T溶液，10g/L。3.4吡啶—巴比妥酸溶液：溶解0.18g巴比妥酸于3ml吡啶及10ml盐酸溶液中，用水稀释至100ml（临用前配置）。3.5硫氰酸盐标准溶液：准确称取0.1673g已烘干的硫氰酸钾（KSCN），溶于少量水中，定量转移入100ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液1.0mg/ml硫氰酸盐标准储备液。存放普通冰箱中，可使用1个月。临用前，用水分别稀释为10.0ƒμg/ml标准溶液（A）和2.0g/μgl标准溶液（B）。4.样品的采集、运输和保存用具盖聚乙烯塑料瓶采集班后尿，摇匀，尽快测量比重。于4h内测定完毕。5.分析步骤5.1样品处理：吸取0.1ml新鲜尿液样于具塞比色管中，供测定。5.2标准曲线的绘制：取7个具塞比色管，分别加入0、0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml标准溶液（A），第1管除外，各管加0.10ml正常人混合尿，配置成0、0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0μg硫氰酸盐标准系列。各管加入2ml吡啶—巴比妥酸溶液，混匀，于室温（室温低于25℃时，置于25℃恒温箱中）放置20min，加水至5ml，混匀。于580nm波长处，用10nm比色杯，以第一管为参比，测量吸光度。以硫酸氢盐的含量（μg）对相应吸光度绘制标准曲线。5.3样品测定：用测定标准系列的操作条件，测定样品溶液。由标准曲线得硫氰酸盐的含量（μg）。6.计算按式（9-42）计算尿中硫氰酸盐的浓度：C=m/V×k（9-42）式中：C——尿中硫氰酸盐的浓度，mg/L；m——由标准曲线得硫氰酸盐的含量，μg；V——分析时所用的尿样体积，ml；k——尿样换算成标准比重下浓度的校正系数。7.说明7.1本法的最低检测浓度为1mg/L（按取0.1ml尿样计）；测定范围为0.1-2.0μg；相对标准偏差为3.25%-6.73%（硫氰酸盐的含量为0.2-2.0μg，n=6）；尿样加标回收率为97.1%-99.8%（加标量为0.2、0.5、1.0μg，n=6）。7.2显色温度应保持在25℃以上。吡啶-巴比妥酸溶液应于临用前配置，放置时间长会影响吸光度。氰化物进入人体后，大部分与体内的硫结合为硫氰酸盐，从尿中排除，一小部分仍以CNˉ的形式排除。CNˉ也同样显色

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