3-1-1-重组DNA技术的基本工具(人教版2019选择性必修3)

生物学（新人教版）生物技术与工程第三章第1节重组DNA技术的基本工具基因工程指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术。

工程别名：操作对象：操作水平：

工程实质：DNA重组技术基因DNA分子水平基因重组基因工程发展历程1944年艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可以在同种生物个体间转移。1961年尼伦伯格和马太破译了第一个编码氨基酸的密码子。截至19666年，64个密码子均被破译成功。1970年科学家在细菌中发现了第一个限制性核酸内切酶（简称限制酶）1972年，伯格首先在体外进行了DNA的改造，成功构建了第一个体外重组DNA分子。1982年，第一个基因工程药物-重组人胰岛素被批准上市。基因工程药物成为世界各国研究和投资开发的热点。1953年沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出了遗传物质自我复制的假说。1967年，科学家发现，在细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞间转移。20世纪70年代初，多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。1973年，科学家证明了质粒可以作为基因工程的载体，构建重组DNA，导入受体细胞，使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现了物种间的基因交流。至此，基因工程正式问世。1985年，穆里斯等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。从社会中来番木瓜容易受番木瓜环斑病毒的侵害。当番木瓜受到这种病毒感染后，产量会大大下降。科学家通过精心设计用“分子工具”培育出了转基因番木瓜，它可以抵御番木瓜环斑病毒。讨论：DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。那么，科学家究竟用到了哪些“分子工具”？这些“分子工具”各具有什么特征呢？非转基因番木瓜转基因番木瓜三种“分子工具”“分子手术刀”“分子缝合针”“分子运输车”01限制性核酸内切酶--分子手术刀（1）来源：主要从原核生物中分离出来。（2）种类：约4000种。（3）作用:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。磷酸二酯键限制酶识别序列的长度一般为4-8个或其他数量的核苷酸，最常见的为6个核苷酸。4.识别序列特点：仔细观察以下四种限制酶识别的特定序列有何特点？EcoRⅠ……G-A-A-T-T-C…………C-T-T-A-A-G……HindⅢ……A-A-G-C-T-T…………T-T-C-G-A-A……BamHⅠ……G-G-A-T-C-C…………C-C-T-A-G-G……TaqⅠ………T-C-G-A………………A-G-C-T………限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列。基因的“剪刀”01黏性末端EcoRⅠ例：大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切割。（1）被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。5.结果：

黏性末端

黏性末端01SmaⅠ平末端例：另一种限制酶(SmaⅠ)能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割。（2）当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。平末端平末端02DNA连接酶--分子缝合针什么样的末端才能连接起来？，1.作用：2.种类：⑴E·coliDNA连接酶⑵T4DNA连接酶将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的两条单链缺口，但不能连接单链DNA！3、DNA连接酶的缝合作用

可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，（1）E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶连接粘性末端即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键（2）T4DNA连接酶连接平末端，效率低E·coliDNA连接酶与T4DNA连接酶比较：类型来源E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？DNA连接酶DNA聚合酶相同作用实质化学本质不同点模板作用对象作用结果用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质

不需要需要DNA的一条链作模板形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键4、DNA连接酶与DNA聚合酶的比较：03运载体--分子运输车质粒将外源基因送入受体细胞。动植物病毒λ噬菌体的衍生物拟核DNA质粒大肠杆菌细胞目的基因插入位点复制原点氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌及质粒结构模式图它们的来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差别。1.作用：2.种类：裸露、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA外，具有自我复制能力的环状双链DNA。（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存（2）有一个至多个限制酶切点（3）有某些标记基因（4）对受体细胞无害、易分离能进入受体细胞并在受体细胞内复制并表达；便于与不同目的基因结合便于鉴定和筛选大肠杆菌及质粒结构模式图3.运载体需具备的条件限制酶DNA连接酶载体①对受体细胞无害；②有一个至多个限制酶切割位点；③有特殊的标记基因；④能自我复制或能整合到宿主DNA上。质粒、λ噬菌体衍生