凝胶类产品检验前处理技术规范

凝胶类产品检验前处理技术规范范围本文件规定了凝胶类产品检验前的处理办法。本文件适用于不同类型的凝胶类产品，包括水溶性凝胶、油溶性凝胶、混悬型凝胶和乳胶型凝胶等，进行相关检测和试验前的处理过程。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。中华人民共和国药典《2020年版》四部术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1酸沉acidprecipitation酸沉法是利用某些成分在酸中沉淀的性质而达到分离的方法。3.2盐析saltingout盐析（saltingout）是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。3.3萃取extraction萃取，又称溶剂萃取或液液萃取，亦称抽提，是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的方法。基本要求4.1基本流程凝胶剂前处理基本流程示意图参见图1。注：凝胶剂前处理方法选择可根据实际检测项目进行组合调整，具体组合调整方式举例见附录A。4.2仪器设备超声波清洗器、通风橱、分液漏斗、低温冷冻离心机、超滤管、真空干燥箱、旋转蒸发仪等。强酸沉淀法5.1概述为解决卡波姆体系凝胶剂黏度大的问题，同时沉淀收集蛋白类核心成分，需对凝胶剂进行强酸沉淀处理。5.2处理方法10%三氯乙酸处理取待检测凝胶剂适量，加入10%三氯乙酸溶液后，超声5min，将超声后的凝胶/三氯乙酸混合体系在6000～12000r/min下低温离心10min，取离心后沉淀物，用于后续检测。6%高氯酸处理取待检测凝胶剂适量，加入6%高氯酸溶液后，超声5min，将超声后的凝胶/高氯酸混合体系在6000～12000r/min下低温离心10min，取离心后沉淀，用于后续检测。5%偏磷酸处理取待检测凝胶剂适量，加入5%偏磷酸溶液后，超声5min，将超声后的凝胶/偏磷酸混合体系在6000～12000r/min下低温离心10min，取离心后沉淀，用于后续检测。5.3注意事项考虑到强酸沉淀过程中所使用的强酸试剂具有高腐蚀性和强刺激性，因此实验人员应做好防护，实验过程需在通风橱中进行。盐析超滤法6.1概述为解决凝胶体系中核心成分的含量检测问题，需对凝胶剂进行盐析超滤处理。6.2硫酸铵盐析法取待检测凝胶剂适量，加入质量浓度为50%～70%的硫酸铵溶液，搅拌，搅拌结束后利用PBS缓冲溶液透析。6.3超滤法将透析后的样品利用不同孔径的超滤膜进行超滤，分别收取截留液和超滤液待用。6.4注意事项依据待检测成分的分子量大小，选择截留液或超滤液进行浓缩后处理。有机溶剂萃取法7.1概述为解决油溶性凝胶剂（如硅酮体系）中核心成分不溶于水的问题，需对凝胶剂进行有机溶剂萃取处理。7.2有机溶剂萃取取待检测凝胶剂，加入适量有机溶剂（如甲苯、乙酸乙酯、乙醚等），采用分液漏斗萃取，静置，收集有机相。7.3有机溶剂去除收集后的有机溶剂采用旋转蒸发（如甲苯）、真空干燥（如乙酸乙酯）或冷冻干燥（如乙醚等低沸点溶剂）等方法去除溶剂，收集去除溶剂后的样品待测。7.4注意事项需根据所需萃取的油性物质特性，选择有机溶剂；甲苯、乙醚等有机溶剂具有一定毒性，实验全程需在通风橱内进行。

附录A（资料性）前处理组合调整方式举例在实际凝胶剂检测前处理过程中，通常单一的前处理方式无法满足产品多技术要求的检测，因此需要将本技术规范中所呈现的前处理方式进行调整组合。本附录以有机溶剂萃取法、强酸沉淀法、超滤法组合为例，呈现凝胶剂前处理组合方案，组合方案流程图如图A.1所示。图A.1有机溶剂萃取法、强酸沉淀法、超滤法组合方案流程图具体前处理组合过程为：（1）将待测凝胶剂与所选择的有机溶剂混合，利用萃取装置萃取，静置。（2）取萃取后的有机相，通过旋转蒸发除去有机溶剂，收集样品用于后续检测。（3）取萃取后的水相，加入10%三氯乙酸或6%高氯酸处理，收集沉淀物。（4）将强酸沉淀后收集的沉淀物用适量水复溶，选择合适孔径的超滤膜超滤，收集截留液，用于后续检测。本组合方案的分离装置图如图A.2所示。图A.2有机溶剂萃取、强酸沉淀、超滤组合分离装置图本附录以硅酮体系卡波姆凝胶（含胶原蛋白）前处理为例，结合图A.2分离装置流程图，详细介绍硅酮体系卡波姆凝胶（含胶原蛋白）的前处理过程，具体前处理过程如下：（1）将硅酮体系卡波姆凝胶加入萃取装置，并加入凝胶剂5～10倍质量的甲苯，以60～100r/min的转速搅拌5min，排气后静置5min；（2）静置后将下层液体（水相）通过管道传送至酸沉装置，分离出萃取装置的上层液体（甲苯溶液），利用旋转蒸发仪除去甲苯溶液中的甲苯，收集旋转蒸发后得到的样品用于后续检测；（3）在酸沉装置中加入10%三氯乙酸溶液，静置，待有沉淀物析出（胶原蛋白及其他杂蛋白）后，收集沉淀物；（4）将沉淀物以5～10倍质量的水复溶，将复溶后的溶液加入超滤装置，超滤装置中搭配合适孔径的超滤膜，利用压缩空气进行超滤，收取截留液（目标检测蛋白于截留液中），用于后续检测。

参考文献[1]中华人民共和国药典（2020年版）四部[2]李雪琴，苗笑亮，裘爱泳.酸沉法和超滤法制备蚕豆分离蛋白的功能性比较[J].XX工程学院学报，2003，24（3）:62-65.[3]刘顺湖，李桂菊，王晓强，等.大豆蛋白质提取工艺中酸沉pH值的简单效应分析[J].XX学院学报，2010，31（6）:5.[4]刘鑫阳，郜晋楠，段开红，等.2步盐析法纯化螺旋藻中藻蓝蛋白[J].XX农业大学学报：自然科学版，2019（1）:7.[5]袁青松.硫酸铵盐析——冷沉淀分离人血白蛋白的初探[J].中国生化药物杂志，1989（3）:2.[6]Korant，BruceD.Methodforextractingproteinwithorganicacid[J].EP，1987.[7]GuoN，JiangST，Xing-JiangLI，etal.Extractionofwheatbranproteinandaminoacidcompositionanalysis[J].JournalofHe